中藥治療人工感染豬弓形蟲病試驗

王秀琴+李穎康+馬吉峰+梁小軍

摘要：為尋求抗弓形蟲病特效藥，進行了人工感染豬弓形蟲病治療和生物回歸試驗研究，結果表明，中藥AT10、混合制劑AT10+20對弓形蟲滋養體具有100%殺滅作用，對包囊分別有100%和98.04%殺滅作用，中藥AT20對滋養體有95%殺滅作用，對包囊無效，打破了傳統西藥治療弓形蟲病藥只對滋養體有效而對包囊無效的結論。

關鍵詞：中藥;治療;豬弓形蟲病;生物回歸試驗

中圖分類號： S855.99 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2015）04-0222-02

收稿日期：2014-06-05

基金項目：寧夏農林科學院科技創新先導資金（編號：nkyj-14-20）

作者簡介：王秀琴（1964—），女，寧夏平羅人，副研究員，主要從事動物疾病預防及診斷研究。E-mail：nxnkyw@163.com。

通信作者：梁小軍，研究員，主要從事家畜繁殖育種和健康養殖方面的研究與示范。E-mail：Lxj0520@163.com。

弓形蟲病是由弓形蟲（Taxoplasma gondii）引起的一種人畜共患原蟲病，人類通過接觸終末宿主貓科動物和食入寄生弓形蟲包囊的豬、羊、雞等產品而感染[1-2]。人感染弓形蟲病可導致孕婦流產、死胎和新生兒先天性弓形蟲病等。弓形蟲病是嚴重影響人類健康及畜牧業發展的人畜共患寄生蟲病之一[3-4]。對弓形蟲病的治療，多年來一直采用螺旋霉素和磺胺類藥物，這些藥品僅對滋養體有效，對包囊無效[5-6]。為了尋求既能殺滅滋養體又對包囊有特效的抗弓形蟲藥物，我們對人工感染豬弓形蟲病進行了治療試驗。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 弓形蟲強毒株 試驗用標準強毒蟲株CN，引自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

1.1.2 試驗藥物 試驗用抗弓形蟲中藥及混合制劑AT10（AT：Anti-Toxoplasaa的縮寫，下同），AT20、AT10+20混合制劑，由寧夏中藥研究所研制。

1.1.3 試驗動物 45 d健康豬，由寧夏賀蘭縣農牧局提供;小白鼠，體質量（20±2） g，購自寧夏自治區藥品檢驗所。

1.2 試驗方法

1.2.1 藥物安全性試驗[7] 注射藥物后1 h內和2、4、8 h觀察試驗豬臨床反應多次。停藥后每日上下午各觀察1次，連續觀察3 d。無任何臨床反應為安全，有一定臨床反應，但能在短期內耐過為基本安全，臨床反應重，甚至部分豬死亡，或較長時間方能耐過為不安全。

1.2.2 藥物治療試驗[8] 弓形蟲CN強毒株，采用腹腔注射攻毒試驗。試驗動物小白鼠，垂直傳遞3代以上，抽取小白鼠腹腔液，用生理鹽水稀釋，每頭試驗豬腹腔注射3 000萬～3 750萬個弓形蟲滋養體。對照組又分強毒對照：每批試驗共設1組，每組1頭;藥物對照：每種藥物設1頭;健康對照：每批試驗共設1組，每組1頭。治療組按不同藥物分別分為大、中、小劑量組。

1.2.3 生物回歸試驗 分別于攻毒后7、14 d，在AT10、AT20、AT10+203組中各隨機抽樣檢查經藥效判定認為對弓形蟲滋養體有效的豬1頭（共6頭）剖殺，取腹水、腦、肝、脾、腸淋巴結、膈肌，按病原分離程序和方法，分別接種健鼠3只（肝、脾、淋、膈混合為1組），并分別于7、14 d盲傳1代，傳遞3代，分別測算各生物回歸試驗組鼠的陽性率。

1.2.4 臨床檢查[9] 每天測溫2次（上午體溫超過40 ℃，下午超過40.5 ℃即認為升溫，并以此統計稽留期），脈搏、呼吸、心、肺、眼結膜、鼻、胃腸、食欲、糞尿、體表淋巴結和精神、行動等常規觀察與檢查1次，檢查期30 d。分別統計體溫稽留小時數，并采用t測定法進行均數差異顯著性分析，比較各組與強毒對照組的差異性。

1.2.5 荷蟲量檢查[10] 分別在投藥前和臨床檢查結束時抽取腹水，以壓片鏡檢法觀察蟲體形態、運動和活力。以白細胞計數法計算荷蟲量，計算減少率。并采用χ2測定法進行差異顯著性分析，比較各組與強毒對照的差異性。

減少率=（1-投藥后荷蟲數投藥前荷蟲數）×100%。

2 結果與分析

2.1 藥物安全性試驗

通過45頭豬的藥物安全性觀察，獲得不同藥物的安全有效劑量，結果見表1。

表1 試驗藥物安全劑量

試驗藥物

大劑量 中劑量 小劑量

劑量

（mg/kg） 試驗豬數

（頭） 劑量

（mg/kg） 試驗豬數

（頭） 劑量

（mg/kg） 試驗豬數

（頭）

AT10 2.50 10 0.25 3 0.05 2

AT20 50.0 10 2.50 3 0.50 2

AT10+20 2.50+25.0 10 0.25+2.50 3 0.05+0.50 2

AT10以大劑量腹腔注射試驗豬后，15 min內出現口涎增多、扭腰、步履蹣跚、精神遲滯等毒副反應。30 min左右明顯緩解，1 h左右基本恢復正常。注射第2、第3劑后都曾出現類似反應，但未再加劇。在正式治療試驗中也未出現嚴重藥物毒副反應，基本安全。以中劑量腹腔注射試驗豬后均未見異常反應，安全性能良好。以7.5 mg/kg大劑量腹腔注射試驗豬后15 min出現嚴重毒副反應，口吐大量白色泡沫，扭腰伸頸，后肢伸直，站立不穩，行走困難，頻頻起臥，肌肉震顫，精神沉郁。2 h后逐漸緩解，4～8 h基本恢復。注射第2劑后 15 min 內出現上述癥狀，并逐漸加劇，其中1頭注第2劑后25 min死亡，另1頭注第2劑后8 h基本恢復。注第3劑后仍出現類似癥狀，8 h左右基本康復。endprint

AT20以大劑量腹腔注射試驗豬后，15 min內出現嘔吐、伸腰、行走不穩等反應。1 h左右開始緩解，2 h基本恢復，注射第2、第3劑曾出現過類似反應，但未見加劇。在正式試驗中都未出現嚴重藥物毒副反應，基本安全。以中劑量腹腔注射仔豬后，均未見任何異常反應，安全性能良好。

AT10+20以大劑量腹腔注射試驗豬后，15 min內出現口涎增多、嘔吐、扭腰、步履蹣跚、精神遲滯等毒副反應，15 min后毒副反應逐漸緩解，2 h左右基本恢復正常。注射第2、第3劑后，都曾出現過類似反應，但未見加劇，似無蓄積現象。以中、小劑量腹腔注射試驗豬，均未見異常反應，安全性能良好。

2.2 藥物治療試驗

根據藥效判定標準認為以AT100.25～2.5 mg/kg治療豬弓形蟲病，對滋養體殺滅率為100%;以AT100.05 mg/kg治療豬弓形蟲病，對滋養體殺滅率為95.23%。

根據藥效判定標準認為以AT200.5～50 mg/kg治療豬弓形蟲病，對滋養體殺滅率達到95%左右。

根據藥效判定標準認為以AT10+20 的0.05～2.5+0.5～25 mg/kg治療豬弓形蟲病，對滋養體殺滅率為100%（表2）。

表2 不同藥物治療效果比較

試驗藥物 組別

荷蟲量（mm3） 體溫

治療前蟲數

（頭）

治療后 差異顯著性

蟲數（頭） 減少率（%） χ2值 結果

稽留時間

（h）

差異顯著性

t值 結果

AT10 大劑量 10 730 0 100 333.37 P<0.01 44.4 6.860 P<0.01

中劑量 10 634 0 100 330.37 P<0.01 68.0 4.698 P<0.01

小劑量 10 600 506 95.23 282.44 P<0.01 84.0 7.639 P<0.01

強毒對照 11 254 12 100 123.27

AT20 大劑量 9 954 512 94.85 256.06 P<0.01 44.4 21.814 P<0.01

中劑量 10 400 500 95.19 276.92 P<0.01 68.0 3.188 P<0.01

小劑量 10 900 511 95.31 283.58 P<0.01 84.0 2.276 P<0.01

強毒對照 11 254 12 100 123.27

AT10+20 大劑量 11 260 0 100 349.84 P<0.01 2.40 21.303 P<0.01

中劑量 11 534 0 100 356.84 P<0.01 36.0 6.475 P<0.01

小劑量 10 800 0 100 335.51 P<0.01 60.0 2.578 P<0.05

強毒對照 11 254 12 100 123.27

2.3 生物回歸試驗

由表3可知，AT10、AT10+20 對包囊有效，對包囊的殺滅率分別達到100%、98.04%。AT20對包囊無效。強毒攻擊后自然耐過豬剖殺取材回歸小白鼠，結果表明，第1代鼠100%典型發病并在7 d內死亡。

表3 生物回歸試驗陽性率結果比較

組別

回歸試驗小鼠陽性率（%）

7 d組 14 d組

腹水 腦 肝、脾、淋、膈 平均 腹水 腦 肝、脾、淋、膈 平均

總陽性率

AT10 0 0 0 0 0 0 0 0 0

AT20 35.71 35.71 30.77 33.33 83.33 25.00 29.17 41.67 37.25

AT10+20 0 0 0 0 8.33 8.33 0 4.16 1.96

強毒對照 100 100 100 100

3 結論與討論

治療弓形蟲病的理想藥物應能阻止感染和預防包囊形成，如已形成包囊則應破壞它或使包囊內的蟲體死亡[11-12]。本試驗用5種中藥對人工感染豬弓形蟲病進行治療試驗，通過治療結果比較，篩選出3種治療弓形蟲病的新特效藥AT10、AT20、AT10+20，其中AT10和AT10+20對弓形蟲體滋養體和包囊均有強大的殺滅作用，AT20僅對弓形蟲滋養體有效。AT10、AT20均系中藥制劑，藥源廣、成本低、用量少、療效高，相關藥理機制還有待進一步研究。

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