經導管建立兔急性腎動脈血栓栓塞模型

沈長銀，彭虹，石蓓，劉漢林，劉志江，趙然尊，許官學

（遵義醫學院附屬醫院心內科，貴州 遵義 563003）

經導管建立兔急性腎動脈血栓栓塞模型

沈長銀，彭虹，石蓓，劉漢林，劉志江，趙然尊，許官學

（遵義醫學院附屬醫院心內科，貴州 遵義 563003）

目的探討導管法建立兔急性腎動脈血栓栓塞模型的可行性，為研究急性腎動脈血栓栓塞及急性腎功能衰竭提供可靠實驗室方法學。方法新西蘭大白兔20只，隨機分為栓塞組及對照組，每組10只。栓塞組經股動脈置管，自制血栓經導管行選擇性兔腎動脈栓塞，記錄栓塞前后主動脈壓力變化情況，分別于術前，術后1、2及10 h抽血化驗腎功能，然后切取兔腎臟后處死動物，標本行病理學檢查；對照組只行股動脈置管，不行血栓栓塞，分別在相應時間點行腎功能及病理學檢查。結果栓塞組8只兔成功行單側腎動脈栓塞，2只置管失敗，腎動脈造影結果提示手術即刻腎動脈栓塞成功，主動脈壓力在栓塞成功后比栓塞前升高（P＜0.05）。栓塞術后2 h兔腎功能肌酐及尿素氮升高，術后10 h升高明顯并同時有乳酸脫氫酶升高，對照組腎功能及乳酸脫氫酶無明顯變化（P＜0.05）。栓塞組在栓塞后10 h腎臟病理學證實血栓栓塞組腎臟可見腎皮質梗死約占腎皮質70%～90%，梗死灶周圍腎臟組織充血、出血伴中性粒細胞浸潤。對照組無腎梗死，僅見腎臟稍充血，腎小管輕微水腫（P＜0.05）。結論經導管建立兔急性腎動脈血栓栓塞模型成功率高，栓塞術后腎功能及病理學變化符合臨床急性腎動脈血栓變化過程，此方法簡單易行，可控制性好，能為急性腎動脈栓塞臨床治療及藥物干預研究提供可靠動物模型。

腎動脈造影；兔；急性腎功能衰竭；腎動脈栓塞

本課題組曾在進行兔急性心肌梗死無復流的實驗研究中[1-2]，經導管進行兔腎動脈造影，發現可以使用人5 F右冠狀動脈指引導管行兔腎動脈造影并行選擇性腎動脈血栓栓塞，方法簡單易行，可控性好，能提供可靠的符合臨床過程的急性腎動脈血栓栓塞動物模型，為研究急性腎動脈栓塞、急性腎功能不全以及相應藥物干預提供可靠的實驗室方法學。

1 材料與方法

1.1實驗動物及材料

健康雄性新西蘭大白兔20只。體重2.5～3.5 kg，由遵義醫學院動物實驗中心提供，隨機分為栓塞組10只及對照組10只。西門子公司Artis Zee Ceiling DSA機，美國麥瑞通公司Merit(R)Manifold三接頭高壓注射器，Cordis公司6 F橈動脈鞘管，雅培公司BMW導絲，TERUMO公司runthrough導絲及超滑導絲，美敦力5 F右3.5指引導管，凝血酶，25%烏拉坦，碘海醇造影劑及肝素等。

1.2實驗方法

1.2.1麻醉及兔股動脈置管25%烏拉坦按1 g/kg耳緣靜脈麻醉，全麻后后背固定于手術臺，右側腹股溝區局部備皮、消毒和鋪巾，切開皮膚，依次分離皮膚、筋膜及肌肉組織，鈍性分離股動脈鞘，暴露股動脈、股靜脈和股神經。動脈兩端予以橡皮筋拉緊阻斷血流，采用兒科頭皮穿刺針直視下穿刺，穿入動脈血管后，調整穿刺針方向，沿穿刺針內推入runthrough導絲至腹主動脈，沿runthrough導絲緩慢置入經石蠟油潤滑涂過的Cordis公司6 F橈動脈鞘管，鞘管內肝素鹽水抗凝。

1.2.2栓塞血栓制作經兔股動脈鞘管抽動脈血10 ml，加入凝血酶20 u混勻，37℃冰箱敷育2 h，見大塊血栓形成，然后用手術刀片把血栓細分為約2～3 mm×2～3 mm大小血栓,血栓大小適于通過5 F導管即可。

1.2.3兔腎動脈造影充分肝素化后，X線透視并在超滑導絲導引下，經6 F橈動脈鞘管送入人冠狀動脈5 F右指引導管至兔降主動脈，退出超滑導絲，排氣，調整指引導管頭端，高壓手推造影劑行雙側腎動脈造影，記錄相應造影圖片，觀察腎動脈走行，同時記錄主動脈壓力變化情況（表1）。

1.2.4兔腎動脈血栓栓塞建立過程造影后定位腎動脈開口，稍調節指引導管頭端，讓指引導管對準腎動脈開口，把BMW導絲頭端塑性，導絲沿指引導管緩慢通過腎動脈至腎動脈遠端分支，沿導絲緩慢推送指引導管使其進入腎動脈內，5 ml注射器輕輕吸取自制血栓1枚，緩慢輕輕注入三接頭高壓注射器內，然后予以注射器緩慢推造影劑，使血栓緩慢注入腎動脈內，栓塞成功后行腎動脈造影，觀察記錄腎動脈血流變化情況，腎動脈造影見腎動脈內血栓影，并出現遠端腎動脈不顯影為栓塞模型成功。

1.2.5腎功能檢查分別于術前，術后1、2及10 h經動脈鞘管抽血5 ml行腎功能檢查（表2），每次抽血后肝素鹽水封管以防動脈鞘內血液凝固。

1.2.6病理學檢查10 h后開腹取相應雙腎標本后處死動物，腎臟標本用10%福爾馬林固定后行病理學檢查。

1.3統計學方法

利用SPSS18.0統計軟件對實驗數據進行統計學分析，計量資料采用均數±標準差（x±s）表示，兩兩比較采用t檢驗，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1腎動脈造影及腎動脈栓塞

模型組8只兔均成功行雙側腎動脈造影及單側腎動脈血栓栓塞，2只兔股動脈置管失敗。對照組2只兔股動脈置管失敗，1只麻醉死亡。置管失敗原因為6 F股動脈鞘管撕裂股動脈。見圖1、2。

2.2栓塞前后兔主動脈壓力變化

與栓塞前比較，栓塞后兔主動脈收縮壓和舒張壓均明顯升高，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.3栓塞前后兔腎功能變化情況

栓塞術后2 h兔腎功能肌酐及尿素氮升高，術后10 h升高明顯并同時有乳酸脫氫酶升高，對照組腎功能及乳酸脫氫酶無明顯變化（P＜0.05）。見表2。

圖1 兔右腎動脈栓塞術

圖2 兔左腎動脈栓塞術

2.4病理結果

2.4.1腎臟標本大體肉眼觀未栓塞兔腎臟顏色暗紅，無水腫；栓塞兔右腎，表面多點狀出血，顏色為暗紅及灰白相間，稍水腫。栓塞兔左腎見壞死區與非壞死區分界明顯，壞死區顏色發黑及灰白。

2.4.2光鏡HE染色：栓塞腎可見腎皮質梗死約占腎皮質的70%～90%，梗死灶部分相互融合，部分多灶融合，梗死灶周圍腎臟組織充血、出血伴中性粒細胞浸潤。對照組無腎梗死，僅見腎臟稍充血，腎小管輕微水腫。見圖3。

圖3 腎臟光鏡檢查結果

表1 栓塞前后兔主動脈壓力變化（mmHg±s）

表1 栓塞前后兔主動脈壓力變化（mmHg±s）

注：?與栓塞前比較，P＜0.05

分組n收縮壓舒張壓平均動脈壓栓塞前875±950±662±7栓塞后892±5?73±4?66±9

表2 兔腎動脈栓塞前后腎功能變化情況（±s）

表2 兔腎動脈栓塞前后腎功能變化情況（±s）

注：?與栓塞前比較，P＜0.05

分組n肌酐/（μmol/L）尿素氮/（mmol/L）LDH/（u/L）對照組772±87.5±1.2350±45栓塞前868±77.3±1.4320±55栓塞后1 h874±67.6±2.1210±60栓塞后2 h8115±8?9.1±3.2?318±70栓塞后10 h8225±29?20.36±2.4?3213±200?

3 討論

臨床上腎動脈栓塞如處理不及時常常導致嚴重后果甚至死亡[3-5]，因此構建符合臨床上腎動脈急性血栓栓塞動物模型，對于腎動脈栓塞的治療及藥物干預研究極為重要。文獻報道使用兔建立腎動脈栓塞動物模型方法有一級微銅圈栓塞、股動脈插管栓塞等[6-7]，均未能完全反映臨床上急性腎動脈血栓栓塞病理過程。我們在進行兔急性心肌梗死無復流的研究中，發現可用人5 F指引導管行兔腎動脈造影，通過自制血栓成功行選擇性兔腎動脈栓塞，栓塞后兔腎功能變化及病理學檢查證實兔急性腎動脈血栓栓塞模型構建成功，符合急性腎動脈栓塞臨床過程，文獻鮮見報道。

本實驗模型組10只兔中成功行選擇性兔腎動脈造影8只，2只置管失敗，造影后8只兔均成功行選擇性腎動脈血栓栓塞，栓塞后造影證實血栓栓塞模型成功，本實驗血栓栓塞位于兔腎動脈主干，故腎臟梗死灶范圍較大，如需構建栓塞范圍較小模型，可采用微導管選擇性進入腎動脈分支進行栓塞，如需建立雙側腎臟梗死模型，可行雙側腎動脈血栓栓塞。

本實驗栓塞后兔主動脈壓力升高，其中收縮壓及舒張壓較栓塞前升高明顯，栓塞前后主動脈壓變化差異有統計學意義（P＜0.05），原因可能與栓塞后腎臟急性缺血引起交感神經興奮或腎素分泌增加有關，但因筆者未進行有關腎素檢測，也未進一步喂養兔并行主動脈壓監測，能否作為制作兔高血壓模型，需要進一步研究。

總之，在使用導管行血栓栓塞時要注意：指引導管頭端要在腎動脈內，以免血栓發生其他部位動脈誤栓塞，本模型構建通過5F指引導管行兔腎動脈造影并成功行血栓栓塞，有以下優點：①人橈動脈鞘管及指引導管臨床上獲取方便，不需要特殊訂制，可從導管室使用后收集利用，兔成本低，可減少實驗費用，便于大規模實驗進行；②如需進行藥物干預，可直接通過指引導管內注入腎動脈，也可以通過指引導管模擬臨床上急性腎動脈栓塞介入治療過程如溶栓及介入取栓治療；③模型建立后如需要進一步進行干預研究，可經另一側股動脈或雙側頸動脈置管行造影或介入治療。不足之處：實驗條件要求較高，需在有DSA實驗室條件醫院進行，需要有一定介入治療經驗的心血管或周圍血管醫生才能完成，因而建立模型受限。

[1]ZHOU SS,TIAN F,CHEN YD et al.Combination therapy reduces the incidence of no-reflow after primary per-cutaneous coronary intervention in patients with ST-segment elevation acute myocardial infarction[J].J Geriatr Cardiol,2015,12(2):35-42.

[2]SHEMIRANIH,TAFTIFD,AMIRPOURA.Comparisonof no-reflow phenomenon after percutaneous coronary intervention for acute myocardial infarction between smokers and nonsmokers [J].See comment in PubMed Commons belowJ Res Med Sci, 2014,19(11):1068-1073.

[3]葛均波,徐永健.內科學[M].第8版,北京:人民衛生出版社,2013: 188-190.

[4]MOHAMMAD K,RAJINI K,AJAY KUMAR,et al.Acute transplant renal artery thrombosis due to distal renal artery stenosis:A case report and review of the literature[J].Journal of Nephropathology,2014,3(3):105-108.

[5]KONINGS R1,LELY RJ,NURMOHAMED SA,et al.Successful reversal of acute kidney failure by ultrasound-accelerated thrombolysis of an occluded renal artery[J].Case Rep Med,2014 (2014):205646.

[6]姜華,閆東,孫勇,等.一級微銅圈腎動脈栓塞的實驗研究[J].介入放射學雜志,2015,24(1):64-68.

[7]張文雷,王大偉,曹殿波,等.兔腎動脈栓塞實驗技術的研究[J].中國老年學雜志,2009,29(18):2358-2360.

（王榮兵 編輯）

Establishment of rabbit model of acute renal artery thrombosis through catheter

Chang-yin SHEN,Hong PENG,Bei SHI,Han-lin LIU,Zhi-jiang LIU,Ran-zun ZHAO,Guan-xue XU
(Department Of Cardiology,the Affiliated Hospital of Zunyi Medical College, Zunyi,Guizhou 563003,P.R.China)

【Objective】To explore the feasibility of establishing the model of acute renal artery thrombosis in rabbits by catheter method，and provide reliable laboratory method for the study of acute renal artery thrombosis and acute renal failure.【Methods】Twenty New Zealand white rabbits were randomly divided into embolization and control groups with ten in each group.The embolization group was performed with the femoral artery catheter,and the renal artery embolization was performed with self-made thrombus,then the changes of aortic pressure before and after operation were recorded,kidney function were tested before the operation,1 hour,2 hours and 10 hours after the operation.Then the rabbits were killed and kidneys were cut for pathological examination.While the control group was only received femoral artery catheterization.The renal function and pathological examination were underwent in the corresponding time.【Results】Eight rabbits in the embolization group underwent unilateral renal artery embolization,and catheterization was failed in 2 rabbits.Renal artery angiography showed that the operation was successful.The aortic pressure raised after embolization(P<0.05).After 2 hours of embolization,serum creatinine and urea nitrogen of rabbits raised,they were significantly increased and the lactate dehydrogenase raised 10 hours after operation.The renal function and lactic dehydrogenase of control group had no obvious changes(P<0.05). Kidney pathological changes confirmed that the embolism renal cortical infarction occured in 70%-90%of renalcortex,kidney tissue hyperemia,hemorrhage and infiltration of neutrophils were found around the infarction focus. The control group had no renal infarction,slight hyperemia in kidney was seen,slight edema was found in renal tubules（P<0.05).【Conclusions】The establishment of rabbit model of acute renal artery thrombosis through catheter had a high success rate.Renal functions and pathological changes were similar with the clinical process of renal artery embolism.This method was simple and convenient and could be controlled well.It could provide a reliable animal model for the study of clinical treatment and drug intervention of acute renal artery embolization.

renal arteriography;rabbit;acute renal failure;renal artery embolism

R-332

B

1005-8982（2015）25-0069-04

2015-02-18

貴州省中醫藥管理局中醫藥、民族醫藥科學技術研究課題資助項目（No：QZYY2011-72）

石蓓，E-mail：shibei2147@163.com