鹽酸戊乙奎醚對百草枯中毒大鼠血清TGF-β1、HIF-α1表達的影響

姚造極　江　勇

(福建醫科大學附屬第一醫院急診科，福建　福州　350004)

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鹽酸戊乙奎醚對百草枯中毒大鼠血清TGF-β1、HIF-α1表達的影響

姚造極江勇

(福建醫科大學附屬第一醫院急診科，福建福州350004)

摘要〔〕目的探討鹽酸戊乙奎醚對百草枯中毒大鼠血清及肺組織轉化生長因子(TGF)-β1、缺氧誘導因子(HIF)-1α表達的影響。方法選擇百枯草中毒大鼠80只，隨機分成兩組各40只。對照組給予生理鹽水灌胃干預。觀察組：鹽酸戊乙奎醚大鼠尾靜脈注射。觀察不同時點兩組大鼠血清及肺組織TGF-β1、HIF-1α的水平與表達情況。結果觀察組大鼠血清TGF-β1、HIF-1α含量都低于對照組(P<0.01)。實驗后7、14 d，觀察組大鼠的血清及肺組織TGF-β1、HIF-1α水平都低于對照組(P<0.01)。結論鹽酸戊乙奎醚通過調節百草枯中毒大鼠血清及肺組織TGF-β1、HIF-1α的表達來減慢肺纖維化的產生、改善大鼠缺氧狀況、進一步減輕肺損傷。

關鍵詞〔〕百草枯中毒；鹽酸戊乙奎醚；轉化生長因子-β1；缺氧誘導因子-1α

百草枯中毒后肺組織受影響最明顯，中毒初期以肺泡上皮細胞受損、炎癥細胞浸潤為主，晚期可能會出現肺纖維化〔1〕。轉化生長因子(TGF)-β1、缺氧誘導因子(HIF)-1α等細胞因子在肺纖維化的形成過程中有著重要作用。TGF-β1能夠改變細胞外基質成分、促進膠原合成，被普遍認為是纖維化進程的開關因子〔2〕。HIF-1α具有介導哺乳動物細胞低氧反應的核轉錄因子的作用，可有效調節組織纖維化進程〔3〕。有研究發現〔4〕，鹽酸戊乙奎醚對百草枯中毒大鼠肺纖維化具有干預效果。本文探討鹽酸戊乙奎醚對百草枯中毒大鼠血清及肺組織TGF-β1、HIF-1α表達的影響。

1資料與方法

1.1一般資料選擇健康雄性SD大鼠80只，隨機分成兩組各40只。對照組：重量205～249 g，平均(222.9±17.2)g；周齡4～6 w，平均(5.1±0.3)w。觀察組：重量208～247 g，平均(225.4±17.8)g；周齡：4～7 w，平均(5.2±0.4)w。兩組大鼠重量、周齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，有可對比性。

1.2方法兩組大鼠均用百草枯(上海譜振生物科技有限公司提供)腹腔注射染毒。TGF-β1、HIF-1α的酶聯免疫吸附(ELISA)試劑盒均由上海常斤生物科技有限公司提供。TGF-β1、HIF-1α免疫組化試劑盒、抗體由圣克魯斯生物技術公司提供。對照組：大鼠百草枯中毒6 h后，給予生理鹽水250 mg/kg灌胃干預。觀察組：大鼠百草枯中毒6 h后，鹽酸戊乙奎醚(成都力思特制藥股份有限公司，國藥準字H20051948)大鼠尾靜脈注射，0.15 mg/kg，用生理鹽水稀釋成1 ml，1次/d。

1.3觀察指標于實驗后的第1、7、14天在大鼠腹腔內注射水合氯醛麻醉大鼠，取腹主動脈血，離心取血清。應用ELISA法測定兩組大鼠血清TGF-β1、HIF-1α水平〔5〕，嚴格按照試劑盒的操作說明進行。開胸獲取大鼠兩側肺組織，用10%甲醛液體保存，通過免疫組化染色測定肺組織TGF-β1、HIF-1α表達，嚴格按照試劑盒的操作說明進行。

1.4統計學方法應用SPSS13.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗。

2結果

2.1血清TGF-β1、HIF-1α含量觀察組大鼠血清TGF-β1、HIF-1α含量〔(142.77±18.16)pg/ml,(13.36±4.04)pg/ml〕都低于對照組〔(193.18±29.81)pg/ml,(22.32±5.79)pg/ml〕(P<0.01)。

2.2血清TGF-β1水平實驗后7、14 d，觀察組大鼠的血清TGF-β1、HIF-1α水平都低于對照組(P<0.01)。見表1。

2.3肺組織TGF-β1、HIF-1α的表達實驗后7、14 d，觀察組大鼠的肺組織TGF-β1表達都低于對照組(P<0.01)。見表1，圖1，圖2。

組別血清TGF-β1實驗后1d實驗后7d實驗后14d血清HIF-1α實驗后1d實驗后7d實驗后14d對照組170.53±22.89202.83±28.46196.23±25.4410.12±2.5632.57±7.3323.68±5.81觀察組169.38±23.40151.76±18.19132.22±14.479.87±2.2020.65±4.7310.29±2.62t/P值0.222/>0.059.563/<0.0113.832/<0.010.468/>0.058.642/<0.013.364/<0.01組別肺組織TGF-β1實驗后1d實驗后7d實驗后14d肺組織HIF-1α實驗后1d實驗后7d實驗后14d對照組0.713±0.1350.916±0.0490.868±0.0430.601±0.0220.843±0.0391.147±0.059觀察組0.689±0.1310.641±0.0450.592±0.0270.596±0.0250.623±0.0310.885±0.047t/P值0.807/>0.0526.143/<0.0134.379/<0.010.950/>0.0527.929/<0.0121.967/<0.01

第一作者：姚造極(1974-)，男，主治醫師，主要從事急診醫學研究。

圖1　兩組大鼠肺組織TGF-β1免疫組化(DAB，×200)

圖2　兩組大鼠肺組織HIF-1α免疫組化(DAB，×200)

3討論

百草枯是一種聯吡啶類除草劑，口服5～10 ml 20%濃度的百草枯即可致人死亡。百草枯中毒后，肺組織中的藥物濃度最高，會造成肺泡的水腫與出血以及肺部嚴重的炎癥反應，進而誘發肺纖維化，引起氣體交換障礙，導致缺氧而死亡。研究發現，肺纖維化與細胞因子的作用有關〔6〕。TGF-β1水平過高是肺纖維化發生、發展的重要原因之一〔7〕。HIF-1α主要存在于慢性缺氧細胞中，與機體缺氧存在緊密的聯系。百草枯中毒后肺組織細胞會表現出低氧的狀態〔8〕，是肺組織纖維化產生的重要原因。抑制HIF-1α的表達一方面能夠減輕肺組織損傷，也有利于延緩組織纖維化的進程〔9〕。

雖然臨床上烏司他丁、依達拉奉、丙泊酚等藥物在百草枯中毒后肺損傷保護中發揮出積極顯著的作用〔10〕。但是，如何抑制百草枯中毒后肺纖維化的出現以及減緩肺纖維化的發展仍是臨床關注的重點。鹽酸戊乙奎醚又名長托寧，是一種新型的抗膽堿能藥物〔11〕，可以抑制炎性介質與多種細胞因子的釋放而防止全身炎癥反應的發生〔12〕。本研究表明鹽酸戊乙奎醚通過降低百草枯中毒大鼠血清及肺組織TGF-β1、HIF-1α的表達減慢肺纖維化的產生，改善大鼠缺氧狀況，進一步減輕肺損傷。

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〔2015-05-17修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

通訊作者：江勇(1969-)，男，主治醫師，主要從事急診醫學研究。

基金項目：福建省衛生廳青年科研基金資助項目(No.2003A044)

中圖分類號〔〕R595.9〔

文獻標識碼〕A〔

文章編號〕1005-9202(2015)24-7005-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2015.24.017