AKTl基因多態性與阿爾茨海默病的相關性研究

陳忠偉　趙和丹　王金龍　黃通　田華偉　王長義　劉盛元

[摘要]目的本研究旨在探討胰島素信號轉導通路相關基因AKTl多態性與阿爾茨海默病的關系，以期深入了解AKTl基因多態對阿爾茨海默病易感性的影響。方法以阿爾茨海默病患者為病例組研究對象，同時選取年齡及性別匹配的健康體檢者為對照組研究對象。提取基因組DNA，應用PCR方法對AKTl基因6個位點進行基因測序。結果在AKTl基因位點rs2498786上，阿爾茨海默病組與對照組之間存在統計學差異（P<0.05）。結論AKT基因位點rs2498786的突變型等位基因C可能增加阿爾茨海默病的發病風險。AKT基因可能是阿爾茨海默病的易感基因，AKT基因位點rs2498786突變可能增加阿爾茨海默病的發病率，其他所研究的AKT基因位點雖與阿爾茨海默病無明顯相關性，但是不排除是其微效基因，值得我們進一步研究。

[關鍵詞]阿爾茨海默??；AKTl；基因多態性

[中圖分類號]R749.16

[文獻標識碼]A

[文章編號]2095-0616（2016）03-37-04

阿爾茨海默?。ˋlzheimers disease，AD）又稱老年癡呆癥，是一種以進行性認知障礙和記憶力損害為主的中樞神經系統退行性疾病…。研究發現，載脂蛋白E（ApoE）基因、血管轉換酶基因（ace）、載脂蛋白c1基因（apocl）、雌激素受體基因等都與阿爾茨海默病發病有一定關系，但并不能完全解釋阿爾茨海默病的發病原因。因此，尋找新的阿爾茨海默病風險因子至關重要。研究發現，2型糖尿病患者中，阿爾茨海默病的發病率高于正常人群，與2型糖尿病發病有關的胰島素P13K-AKT信號轉導通路在阿爾茨海默病的病變過程中的作用值得我們進一步的研究。本研究目的探討胰島素P13K-AKT信號轉導通路相關基因AKT多態性與阿爾茨海默病的關系，以期深入了解AKT基因多態對阿爾茨海默病易感性的影響。

1.資料與方法

1.1一般資料

將2002年1月～2013年12月我院納入管理的阿爾茨海默病患者為病例組研究對象，病例組入選標準：所有患者符合美國神經病學、語言障礙及卒中一阿爾茨海默病和相關疾病學會（NINCDS-ADRDA）的診斷標準，所有患者均由兩位神經內科醫師做出診斷。同時選取年齡及性別匹配的健康體檢者為對照組研究對象，對對照組研究對象進行MMSE（簡易精神狀態量表）、ADL（日?；顒恿勘恚?、CDR（臨床癡呆評定量表）的評定，其結果必須均為正常，同時采用漢密爾頓抑郁量表排除抑郁癥。兩組研究對象均要排除高血壓、糖尿病、精神病史、酒精或藥物濫用、腫瘤及自身免疫性疾病。兩組研究對象均為漢族人群，阿爾茨海默病患者本人或家屬對本研究簽署書面知情同意書，對照組本人簽署書面知情同意書。

本研究中，阿爾茨海默病組患者共231例，男113例，女118例，平均年齡（79.6±9.9）歲，Apoε4（+）者67例，平均MMSE評分（18.6±3.9），健康對照組患者共231例，男113例，女118例，平均年齡（78.5±8.4）歲，Apoε4（+）者39例，平均MMSE評分（28.3±2.7），兩組患者平均年齡、性別構成、文化程度差別均沒有統計學意義（P>0.05），其結果具有可比性。阿爾茨海默病組Apoε4（+）者比例高于對照組，平均MMSE評分低于對照組。

1.2研究方法

1.2.1DNA提取抽取所有研究對象靜脈血并提取基因組DNA，血液標本儲存于-70℃待用，并進行DNA含量及純度檢測。

1.2.2基因分型通過NCBI-SNP和HapMap數據庫檢索，分析AKT基因上的tagSNPs數據，應用PCR測序的方法檢測上述入選對象胰島素信號轉導通路相關基因AKT多態性基因型。

1.3統計學分析

采用SPSS 18.0統計學軟件進行數據的處理，運用Hardy-Weinberg平衡法則進行遺傳平衡吻合度檢驗；x²檢驗分析各組間基因型及等位基因的頻數分布差異；計量資料（x±s）的形式表示，采用t檢驗進行計量資料的比較，以P<0.05為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 rs2498786基因位點與阿爾茲海默病的相關性分析

rs2498786為G/C多態性，包括G/G、G/C、C/C三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異有統計學意義（P<0.05），等位基因G、c頻數分布在兩組之間分布差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2rs74090038基因位點與阿爾茲海默病的相關性分析

rs74090038為C/F多態性，包括C/C、C/T、T/T三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異沒有統計學意義（P>0.05），等位基因C、T頻數分布在兩組之間分布差異沒有統計學意義（P>0.05）。見表2。

2.3rs2494750基因位點與阿爾茲海默病的相關性分析

rs2494750為C/G多態性，包括C/C、C/G、G/G三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異沒有統計學意義（P>0.05），等位基因c、G頻數分布在兩組之間分布差異沒有統計學意義（P>0.05）。見表3。

2.4 rs2494751基因位點與阿爾茲海默病的相關性分析

rs2494751為A/G多態性，包括A/A、A/G、G/G三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異沒有統計學意義（P>0.05），等位基因A、G頻數分布在兩組之間分布差異沒有統計學意義（P>0.05）。見表4。

2.5 rs5811155基因位點與阿爾茲海默病的相關性分析

rs5811155為T/-多態性，包括T/T、T/-、-/-三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異沒有統計學意義（P>0.05），等位基因T頻數分布在兩組之間分布差異沒有統計學意義（P>0.05）。見表5。

2.6 rs2494752基因位點與阿爾茲海默病的相關性分析

rs2494752為G/A多態性，包括G/G、G/A、A/A三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異沒有統計學意義（P>0.05），等位基因G、A頻數分布在兩組之間分布差異沒有統計學意義（P>0.05），因此，rs2494752的基因多態性可能與阿爾茲海默病的發病無關聯。見表6。

3.討論

研究表明，2型糖尿病患者中阿爾茨海默病的發病率高于正常人群，并且有研究表明與2型糖尿病發病密切相關的胰島素P13K-AKT信號轉導通路調控功能在阿爾茨海默病的病理生理過程中發揮重要作用。研究稱，阿爾茨海默病患者體內胰島素P13K-AKT信號轉導通路功能失調，導致底物糖原合成酶激酶一3（GSK-3）無法降解及mTORCl無法激活，而GSK3的增多及mTORCl失活則可引起β一淀粉樣蛋白過多積聚及tau蛋白異常磷酸化，后二者與阿爾茨海默病最主要的兩個病理表現老年斑及神經纖維纏結的發生密切相關。雖然有證據表明胰島素P13K-AKT信號轉導通路與AD發生有重要的關系，但是未見從分子流行病學角度探討胰島素P13K-AKT信號轉導通路相關基因多態性與阿爾茨海默病關系的相關報道。

本研究選擇阿爾茨海默病患者181例，同時選取健康對照組217例，篩選AKT基因上6個位點，分別為：rs2498786、rs74090038、rs2494750、rs2494751、rs5811155、rs2494752，研究結果顯示，在AKT基因位點rs2498786上，阿爾茨海默病組與對照組存在統計學差異（P<0.05）。統計學分析之后，rs2498786的突變型等位基因c可能增加阿爾茨海默病的風險。而rs74090038、rs2494750、rs2494751、rs5811155、rs2494752這些AKT基因位點雖不是阿爾茨海默病的易感基因位點，但不能排除其是眾多易感基因位點中一個微效基因位點，各種微效基因疊加后最終導致阿爾茨海默病的發生，而作為一個單獨微效基因，其不足以單獨通過自身的影響導致阿爾茨海默病發病，因而很難存在顯著的統計學意義。