ESBLs在大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌中的檢出率及耐藥情況比較

唐景云　　秦曉林

[摘要]目的分析并對比ESBLs（超廣譜內酰胺酶）在大腸埃希菌、陰溝腸桿菌以及肺炎克雷伯菌中的檢出率、耐藥情況。方法以我院2011年6月～2015年9月間內科收治的106例化膿性膽管炎患者為臨床研究對象，分別記錄其膽汁大腸埃希菌、陰溝腸桿菌以及肺炎克雷伯菌的培養結果，并通過藥敏測定和試驗檢查ESBLs在各類菌種中的耐藥情況。結果在154株實驗培養菌中，共有62株產ESBLs株，其總檢出率為40.3%。而在62株產ESBLs株中，大腸埃希菌檢出33株（53.2%），陰溝腸桿菌檢出8株（22.2%），肺炎克雷伯菌檢出21株（37.5%）。大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌的檢出率要明顯高于陰溝腸桿菌，x1²=22.77，其對比均具有統計學意義（P<0.05）；肺炎克雷伯菌的檢出率要明顯高于陰溝腸桿菌，x2²=7.61，其對比有統計學學意義（P<0.05）。在各類標本中，在膽管結石病例膽汁培養結果中，產ESBLs肺炎克雷伯菌（85.7%）的檢出數量最高；在膽管惡性梗阻病例中，產ESBL^s陰溝腸桿菌、大腸埃希菌所占比例較高。產ESBL^s陰溝腸桿菌、大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌均對阿莫西林耐藥，且耐藥率為100%；3種菌株對頭孢類抗菌藥耐藥率較高，3種菌株對碳青霉烯類耐藥率比較低。產ESBL^s陰溝腸桿菌的耐藥率要低于產ESBL^s大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，特別是在慶大霉素、環丙沙星以及頭孢類藥物上差距最為明顯。結論對于產ESBL^s（超廣譜內酰胺酶）菌株導致的感染疾病，結合藥敏試驗的結果來合理選擇抗生素用藥，是延滯細菌耐藥性出現的關鍵，也是臨床合理用藥的重要保證。

[關鍵詞]ESBLs（超廣譜內酰胺酶）；大腸埃希菌；陰溝腸桿菌；肺炎克雷伯茵；檢出率；耐藥性

[中圖分類號]R446.5

[文獻標識碼]B

[文章編號]2095-0616（2016）03-175-04

ESBLs（超廣譜內酰胺酶）是一種水解頭孢菌素、單胺類及青霉素的酶，具有易播散、作用底物較廣、種類多且個體差異較大等特點。該種酶多由大腸埃希菌以及肺炎克雷伯菌產生，近幾年有研究證實了這種酶還可由陰溝腸桿菌、產氣腸桿菌和沙雷菌屬等格蘭陰性桿菌產生，基本上跨越了格蘭陰性桿菌的多個種類。革蘭陰性桿菌是化膿性膽管炎的主要致病菌，研究其不同菌屬群中ESBLs的檢出率以及耐藥情況，對于支持化膿性膽管炎臨床治療有著十分重要的意義。本文將我院2011年6月～2015年9月間內科收治的106例化膿性膽管炎患者作為臨床研究對象，以分析并對比ESBLs（超廣譜內酰胺酶）在大腸埃希菌、陰溝腸桿菌以及肺炎克雷伯菌中的檢出率、耐藥情況?，F將主要研究過程和結果作如下闡述。

1.資料與方法

1.1一般資料

本研究從我院2011年6月～2015年9月間內科收治的106例化膿性膽管炎患者作為臨床研究對象，全部患者均通過消化內科系統檢查確診。本組患者男43例，女41例，年齡28～67歲，平均年齡為（42.54±8.40）歲。全部患者的膽汁培養結果如下，膽汁標本共分離大腸埃希菌、陰溝腸桿菌以及肺炎克雷伯菌共154株，排除同一患者分離出藥敏結果相同的同一菌株。經API系統復核，154珠培養菌中，大腸埃希菌62株，陰溝腸桿菌36株，以及肺炎克雷伯菌56株。質控菌株均符合衛生部質控中心公布的統一標準，將其當作ESBLs陽性與陰性對照菌。

1.2方法

（1）產ESBLs大腸埃希菌以及肺炎克雷伯菌檢測：執行NCCLS 2002檢測標準，進行最低抑菌濃度檢測，利用K-B紙片進行擴散實驗驗證；并輔助使用雙紙片協同法對測定結果進行確證，選用的藥敏紙片包括頭孢他啶與克拉維酸紙片，頭孢噻肟及克拉維酸紙片。（2）產ESBLs陰溝腸桿菌檢測：首先，制備β一內酰胺酶。在平皿上劃出單個細菌菌落，接種于培養基中，在37℃恒溫下孵育18h左右。將培養液以每分鐘6500r的速率離心15min，使用pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液沖洗2次，使用超聲破碎儀破碎菌體，取破碎處理之后的菌液進行低溫離心，速率為每分鐘21000r，提取β一內酰胺酶液后置于零下70度條件下保存備用。其次，采用標準的紙片擴散法檢測細菌的生長情況，若發現抑菌圈和紙片邊緣狹縫的交接處出現大片細菌生長區域，則利用其改良酶提取物進行三維測試，檢測產ESBLs陰溝腸桿菌。

1.3觀察指標及判斷標準

（1）產ESBLs株判定標準：含克拉維酸與不含克拉維酸紙片間的抑菌圈之差不低于5mm。（2）耐藥判定標準：根據CLSl2010文件的M100-S20所規定的折點作為耐藥的判定標準。

1.4統計學方法

針對上述數據，采用SPSSl6.0軟件進行統計分析，計量資料采用（x±s）的形式表示，運用百分比表示計數資料，統計方法以t檢驗及x²檢驗為主，以P<0.05為差異具有統計學意義。

2.結果

2.1統計各菌種的檢出率

在154株實驗培養菌中，大腸埃希菌有62株，陰溝腸桿菌有36株，肺炎克雷伯菌有56株，同時共有62株產ESBLs株，其總檢出率為40.3%。而在62株產ESBLs株中，大腸埃希菌檢出33株（53.2%），陰溝腸桿菌檢出8株（22.2%），肺炎克雷伯菌檢出21株（37.5%）。大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌的檢出率要明顯高于陰溝腸桿菌，x²=22.77，其對比均具有統計學意義（P<0.05）；肺炎克雷伯菌的檢出率要明顯高于陰溝腸桿菌，x²=7.61，其對比差異顯著，有統計學學意義（P<0.05）。

2.2統計ESBLs菌株占各類標本的比例

在各類標本中，產ESBLs陰溝腸桿菌、大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的比例構成情況如下表1。從整體上看，在膽管結石病例膽汁培養結果中，產ESBLs肺炎克雷伯菌的檢出數量最高，且所占比例為85.7%，要明顯高于產ESBLs陰溝腸桿菌（x²=9.98）和產ESBLs大腸埃希菌（x²=21.48），其對比均具有統計學意義（P<0.05）；在膽管惡性梗阻病例中，產ESBLs陰溝腸桿菌、大腸埃希菌所占比例較高。

2.3統計ESBLs菌株的具體耐藥情況

詳情如下表2。產ESBLs陰溝腸桿菌、大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌均對阿莫西林耐藥，且耐藥率為100%；從整體上看，對頭孢類抗菌藥，上述3種菌株的耐藥率較高，對碳青霉烯類藥，上述3種菌株的耐藥率比較低，特別是對美羅培南和亞胺培南，3種菌株的耐藥率為0。3種產ESBLs菌株之間作比較，從整體上看，產ESBLs陰溝腸桿菌的耐藥率要明顯低于產ESBLs大腸埃希菌（x²=6.63）和肺炎克雷伯菌（x²=7.88），其對比差異均具有統計學意義（P<0.05）；對比最大差距存在于慶大霉素、環丙沙星以及頭孢類藥物上。

3.討論

近年來，ERCP在臨床內科中的應用頻率越來越高，在很大程度上證實了由膽管結石或膽管占位所引發的各類并發癥的發生率呈現出顯著的上升趨勢，其中，以高熱和黃疸這兩類臨床表現最為多見。ESBLs（超廣譜內酰胺酶）作為一種水解頭孢菌素、單胺類及青霉素的酶，對細菌有著十分嚴重的耐藥性。本次研究得出了以下結果：在大腸埃希菌、陰溝腸桿菌以及肺炎克雷伯菌三類菌種中，檢測率最高的是ESBLs大腸埃希菌（53.2%），其次為肺炎克雷伯菌（37.5%）和陰溝腸桿菌（22.2%）。目前，多個文獻已經報道了大腸埃希菌以及肺炎克雷伯菌是產生ESBLs的主要菌種，這主要是由于第三代頭孢菌素以及其他廣譜內酰胺類的使用范圍越來越廣，大腸埃希菌以及肺炎克雷伯菌能夠通過抗生素誘導（或選擇性壓力下）產生ESBLs，在質粒的介導作用下，利用傳導、接合以及轉化等形式于細菌間傳遞。但是隨著臨床研究的深入以及檢測技術的不斷完善，有學者發現，在主要格蘭陰性桿菌之中，陰溝腸桿菌的ESBLs檢出率也越來越高，特別是它產生的AmPc酶可以水解第三代頭孢菌素。而且以β一內酰胺酶為主的抑制劑并不能對其產生抑制作用，致使其對各種類型的加酶抑制劑和β一內酰胺酶抑制劑等抗生素耐藥。本次研究結果中，在各類標本中，從整體上看，在膽管結石病例膽汁培養結果中，產ESBLs肺炎克雷伯菌的檢出數量最高，所占比例為85.7%；在膽管惡性梗阻病例中，產ESBLs陰溝腸桿菌、大腸埃希菌所占比例較高，分別為50.0%和51.5%。而藥敏試驗結果呈現，產ESBLs陰溝腸桿菌、大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌均對阿莫西林完全耐藥，且從整體上看，對頭孢類抗菌藥，上述3種菌株的耐藥率較高，對碳青霉烯類藥，上述3種菌株的耐藥率比較低，特別是對其中的美羅培南和亞胺培南，3種菌株的耐藥率均為0，這也提示在現階段治療中，碳青霉烯類藥藥物具有有效的抗ESBLs效果。將3種產ESBLs菌株之間作比較，從整體上看，產ESBLs陰溝腸桿菌的耐藥率要低于產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，對比的最大差距存在于慶大霉素、環丙沙星以及頭孢類藥物上，出現這一現象的原因可能是產ESBLs菌株本身的流行情況在各地區或者各醫院間存在著較大的差異。盡管研究結果提示了陰溝腸桿菌對頭孢類抗菌藥物均比較敏感，但在實際應用過程當中，還需進一步強化藥敏試驗，對其耐藥情況進行動態監測。綜合上述研究，對于由產ESBLs菌株所致的感染，需嚴格按照藥敏試驗的結果合理調整用藥方案，選擇高敏感性的抗生素藥物，盡可能降低細菌的耐藥性。