雙探針顯色原位雜交技術在乳腺癌HER2基因檢測中的應用

張可星

（廣西醫科大學基礎醫學院 廣西南寧 530021）

雙探針顯色原位雜交技術在乳腺癌HER2基因檢測中的應用

張可星

（廣西醫科大學基礎醫學院 廣西南寧 530021）

目的：通過雙探針顯色原位雜交技術檢測乳腺癌HER2基因的狀態，評估雙探針顯色原位雜交技術的臨床應用價值。方法：選取存檔蠟塊82例，分別用免疫組化及雙探針顯色原位雜交兩種方法對Her-2基因及蛋白進行檢測，并采用四格表卡方檢驗、配對卡方檢驗及Kappa檢驗作相關統計學分析。結果： 兩種方法檢測結果不存在顯著性差異（P＞0.05）；就兩種方法檢測結果的一致性分析而言，兩種方法所得出的檢測結果存在較好的一致性（P＜0.05）。結論：雙探針顯色原位雜交技術檢測乳腺癌HER2基因擴增結果與免疫組化檢測HER2蛋白過表達結果高度相似，可作為檢測HER2基因狀態的有效方法。

乳腺癌 雙探針顯色原位雜交技術 免疫組織化學法 HER2基因

世界衛生組織的數據顯示：全世界每年約有140萬婦女罹患乳腺癌,有40萬婦女死于乳腺癌。在我國,乳腺癌已居女性惡性腫瘤死亡率的首位。在所有乳腺癌患者中,約有20～30%的患者會出現HER2（人類表皮生長因子受體2）陽性現象。目前美國FAD公認的有兩種檢測方法,分別為HER2蛋白的免疫組化（ICH）和HER2基因擴增的熒光原位雜交（FISH）,因ICH操作簡單,價廉、快速等特點,被廣泛運用［1］。顯色原位雜交技術（CISH）分為兩種單探針和雙探針兩種方法。本研究采用ICH和雙探針CISH檢測HER2蛋白表達和基因擴增的狀態,根據2014年乳腺癌HER2檢測指南,探討雙探針CISH技術檢測乳腺癌HER2基因的優越性。

1 材料及方法

1.1 主要材料及試劑

82例乳腺癌組織存檔蠟塊及臨床資料收集于廣西醫科大學附屬腫瘤醫院。HER2基因雙探針CISH 試劑盒（德國ZytoVision公司）。免疫組化S-P試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 免疫組化染色及結果判定

免疫組化S-P法檢測乳腺癌組織切片Her-2蛋白表達試驗操作嚴格按照說明書進行。結果判定標準：光鏡下觀察陽性信號,鏡下所見棕黃色顆粒為陽性反應物, 位于細胞膜。

1.2.2 顯色原位雜交檢測

①嚴格按照CISH操作步驟進行。組織玻片變性、脫蠟,乙醇梯度脫水, 98℃恒溫處理也中浸泡15分鐘,蒸餾水沖洗后加蛋白酶在濕盒中消化6分鐘,隨后的操作步驟按說明書進行。最后蓋蓋玻片后封片,空氣中干燥后光鏡下觀察。

1.2.3 統計學分析方法

將兩種方法得出的結果進行配對計數資料的卡方檢驗和Kappa檢驗,進行兩組結果一致性的比較,檢驗水準α=0.05,P＜0.05時則說明差異有統計學意義。

表1 兩種方法檢測結果一致性分析

2 結果

82例乳腺癌標本的免疫組化檢測結果顯示：就兩種方法獨立的檢測結果而言,兩者之間不存在顯著性差異（X2=0.672,P=0.512）,但免疫組化的方法陽性率稍高（68.29% VS 62.20%）；而對于兩種方法的一致性分析結果發現,兩種方法得出的檢測結果具有較好的一致性（Kappa=0.705；P=0.001）,且存在統計學意義（見下表）。

3 討論

目前,免疫組織化學染色方法是臨床上最常用的檢測乳腺癌中Her-2蛋白表達的方法［2］,本方法具有以下優勢：操作簡單、成本低廉、重復性好、對實驗室條件及實驗材料的要求低等。但是由于蛋白質在固定標本的過程中,極易變性或遭受不可逆性破壞,從而影響檢測結果,以及不同試驗技術人員的主觀判斷差異,都使該項技術難以用一項統計的標準來規定檢驗結果,因此在檢測中不可避免的出現各種假陰性和假陽性［3］。

免疫雜交技術是分子遺傳學常用技術,其不僅可以進行異常染色體的檢測,同樣可以用于檢測目標基因的擴增情況,是目前國際上公認的基因表達檢測的金標準；與蛋白表達的檢測相比,基因的檢測具有穩定性更高、準確性及重復性更好、靈敏度更好等優勢［3］。本研究中對82例乳腺癌標本的檢測,兩種方法獨立檢測結果顯示無統計學差異（X2=0.672,P=0.512）；而就兩種方法檢測結果的一致性來看,可以認為兩者的檢驗結果基本一致（Kappa=0.705；P=0.001）,結果有統計學意義,與文章中報道的Kappa=0.640基本相符。

綜上所述,免疫組化技術由于其操作簡單、成本低廉的優勢可以進行Her-2表達的初步檢測,然而我們并不能拘泥于該方法的簡單廉價,其假陰性和假陽性才是我們應該重視的問題,尤其是對于一些Her-2基因表達陰性的患者而言,為臨床提供更加準確、可靠的信息,對患者進行有效的治療、盡可能的降低其的痛苦及經濟負擔,促使免疫雜交技術登上現代醫學的舞臺。

［1］白燕峰，任國平，滕理送，等.雙探針顯色原位雜交技術檢測HER2基因的應用［J］.臨床與實驗病理學雜志，2010，26（5）：627-9.

［3］顯色原位雜交（CISH）技術在檢測乳腺癌HER-2/neu 基因狀態中的應用［J］.實驗與檢驗醫學，2010，28（6）：593-595.

R655

A

1674-2060（2016）03-0104-01