顯微技術在牛黃清心丸（局方）質量控制中的應用

聶黎行+張燁+張南平+胡曉茹+康帥+侯建忠+戴忠+馬雙成

[摘要]探討顯微技術在牛黃清心丸（局方）質量控制中的應用。對執行標準規定的顯微特征進行了總結，并新建了未規定檢驗項目的山藥、羚羊角、肉桂、防風4味藥材的顯微鑒別方法。首次采用顯微技術檢查中成藥摻偽，建立了牛黃清心丸（局方）中山藥混偽品山薯的檢查方法。1個廠家的2批次樣品未檢出羚羊角，2個廠家的3批次抽樣檢出山薯。所建方法準確、簡便、快速、直觀、經濟，可更加全面地控制牛黃清心丸（局方）的質量。傳統的顯微技術能夠在指標成分缺乏或含量過低的中藥的鑒別方面發揮重要作用。

[關鍵詞]牛黃清心丸（局方）； 顯微； 鑒別； 檢查； 摻偽

[Abstract]Application of microscopic spectroscopy in quality control of Niuhuang Qingxin pills was discussed. First， microscopic characteristics specified by the statutory standard of Niuhuang Qingxin pills were summarized. Then new identification method was established for Dioscoreae Rhizoma， Saigae Tataricae Cornu， Cinnamomi Cortex and Saposhnikoviae Radix. Finally， microscopic spectroscopy was used for test of Dioscoreae Rhizoma′s adulterant Dioscoreae Fordii Rhizoma.It was the first time for this technology being applied in adulteration test of Chinese patent medicine.The results showed that Saigae Tataricae Cornu was not detected in 2 batches of Niuhuang Qingxin pills from 1 manufacturer while Dioscoreae Fordii Rhizoma was detected in 3 batches of samples from 2 manufacturers. The proposed methods were accurate， simple， rapid， objective and economic， which offered a more comprehensive approach for quality control of Niuhuang Qingxin pills. It was indicated that conventional technology such as microscopic spectroscopy could play an important role in identification of traditional Chinese medicine whose index ingredient was deficient or tiny.

[Key words]Niuhuang Qingxin pills； microscopic spectroscopy； identification； test； adulteration

doi：10.4268/cjcmm20162007

牛黃清心丸（局方）由牛黃、當歸、川芎、甘草、山藥、黃芩、炒苦杏仁、大豆黃卷、大棗、炒白術、茯苓、桔梗、防風、柴胡、阿膠、干姜、白芍、人參、六神曲（炒）、肉桂、麥冬、白蘞、蒲黃（炒）、人工麝香、冰片、水牛角濃縮粉、羚羊角、朱砂、雄黃等29味中藥材粉碎配研制成，具有清心化痰，鎮驚祛風的功效，用于風痰阻竅所致的頭暈目眩、痰涎壅盛、神志混亂、言語不清及驚風抽搐、癲癇^[1]。2014年我院承擔了該品種的國家藥品監督抽驗任務，執行標準收載于《中國藥典》2010年版一部第一增補本，除制劑通則外，包括【性狀】、【鑒別】、【檢查】3項。其中顯微鑒別項涉及14個藥味，包括茯苓、白芍、炒白術、麥冬、甘草、黃芩、桔梗、炒苦杏仁、大棗、大豆黃卷、蒲黃（炒）、朱砂、雄黃、水牛角濃縮粉等原料藥材；薄層鑒別4項，包括牛黃、黃芩、人參、當歸的鑒別。另有豬去氧膽酸的【檢查】項，防止人工牛黃冒充牛黃投料。牛黃清心丸（局方）處方藥味眾多，且輔料煉蜜干擾嚴重，顯微鑒別難度較大，尚無相關資料或文獻可供參考，故對執行標準規定的顯微特征進行了研究和總結。為更全面地控制本品質量，研究并新建了執行標準未規定檢驗項目的山藥、羚羊角、肉桂、防風四味藥材的顯微鑒別方法。此外，針對檢驗過程中發現的個別樣品使用山藥混偽品投料的現象，首次采用顯微技術建立了中成藥中摻偽檢查的新方法。所建方法準確、簡便、快速、直觀、經濟，可為大處方原粉制劑的質量控制提供參考。

1 材料與方法

奧林巴斯BX50-32H01生物顯微鏡。分析純水合氯醛購于國藥集團化學試劑有限公司。9個廠家生產的牛黃清心丸（局方）38批次，均為2014年國家藥品監督抽驗樣品。山藥、羚羊角、肉桂、防風對照藥材來自中國食品藥品檢定研究院。牛黃、當歸、川芎、甘草、山藥、黃芩、炒苦杏仁、大豆黃卷、大棗、炒白術、茯苓、桔梗、防風、柴胡、阿膠、干姜、白芍、人參、六神曲（炒）、肉桂、麥冬、白蘞、蒲黃（炒）、人工麝香、冰片、水牛角濃縮粉、羚羊角、朱砂、雄黃、煉蜜等原輔料由天津中新藥業集團股份有限公司達仁堂制藥廠提供。山藥偽品山薯由酒泉市藥品檢驗檢測中心收集，經侯建忠主任藥師鑒定為薯蕷科植物山薯Dioscorea fordii Prain et Burkill.的干燥根莖。

取牛黃清心丸（局方），按執行標準檢驗。另取質量較好的天津中新藥業集團股份有限公司達仁堂制藥廠生產的樣品3批，山藥、羚羊角、肉桂、防風對照藥材，水合氯醛液加熱透化后，置顯微鏡下觀察。通過與對照藥材對比，并結合文獻分析^[2-5]，新建牛黃清心丸（局方）中山藥、羚羊角、肉桂、防風的顯微鑒別方法。再取問題樣品、山薯、分別以山藥對照藥材和山薯投料的模擬制劑，透化后置顯微鏡下觀察，經比較和驗證，新建牛黃清心丸（局方）中山薯混偽投料的顯微檢查方法。38批次抽樣均按標準方法和新建的鑒別和檢查方法測定、觀察，記錄結果。

2 結果

2.1 標準規定的顯微鑒別特征 不規則分枝狀團塊無色，遇水合氯醛試液溶化；菌絲無色或淡棕色，直徑4～6 μm（茯苓）。草酸鈣簇晶直徑18～32 μm，存在于薄壁細胞中，常排列成行，或1個細胞中含有數個簇晶（白芍）。草酸鈣針晶細小，長10～32 μm，不規則地充塞于薄壁細胞中（炒白術）。草酸鈣針晶束長24～50 μm，存在于類圓形或橢圓形黏液細胞中（麥冬）。纖維束周圍薄壁細胞含草酸鈣方晶，形成晶纖維（甘草）。韌皮纖維淡黃色，梭形，壁厚，孔溝細（黃芩）。聯結乳管直徑14～25 μm，含淡黃色顆粒狀物（桔梗）。石細胞橙黃色，貝殼狀，壁較厚，較寬一邊紋孔明顯（炒苦杏仁）。果皮表皮細胞黃棕色至紅棕色，表面觀多角形，斷面觀角質層厚約10 μm（大棗）。種皮柵狀細胞淡黃色，長45～80 μm（大豆黃卷）?；ǚ哿｜S色，類圓形或橢圓形，直徑約30 μm，外壁有微細疣狀突起（蒲黃）。不規則細小顆粒暗棕紅色，有光澤，邊緣暗黑色（朱砂）。不規則碎塊金黃色或橙黃色，有光澤（雄黃）。不規則碎塊灰白色或淺灰黃色，稍具光澤，表面有灰棕色色素顆粒，并有不規則縱長裂縫（水牛角濃縮粉）。結果38批次樣品均符合規定，14味藥材的顯微鑒別特征見圖1。

2.2 山藥、羚羊角、肉桂、防風的顯微鑒別 牛黃清心丸（局方）中山藥、羚羊角、肉桂、防風的顯微鑒別特征：草酸鈣針晶束存在于黏液細胞中，長約至240 μm，針晶粗2～5 μm。淀粉粒三角狀卵形或矩圓形，直徑24～40 μm，臍點短縫狀或人字狀（山藥）。不規則透明碎塊稍有光澤，均勻分布裂縫狀或長圓形空隙（羚羊角）。石細胞類方形或類圓形，直徑32～88 μm，壁一面菲薄。纖維大多單個散在，長梭形，長195～920 μm，直徑約至50 μm，壁厚，木化，紋孔不明顯（肉桂）。油管含金黃色分泌物，直徑約30 μm（防風）。上述顯微鑒別特征見圖2。按擬定的鑒別方法考察了9個企業的38批次抽樣，結果均檢出山藥、肉桂和防風，1個廠家的2批次抽樣未檢出羚羊角，不排除未投料的可能性。

2.3 山藥混偽品山薯的檢查 在檢驗過程中發現，個別樣品檢出不屬于處方藥味的異常石細胞，見圖3。文獻報道山藥的混淆品及偽品較多，除地方標準收載的褐苞薯蕷、參薯、日本薯蕷、山薯外，還有用木薯、番薯等冒充山藥使用，其中褐苞薯蕷、山薯、木薯、參薯均含石細胞^[6-8]。經與文獻比較^[9-10]，認為為驗證上述結論，收集來源明確的山薯，粉碎成細粉，觀察其顯微特征。同時按牛黃清心丸（局方）處方比例，分別以山藥對照藥材和山薯細粉投料，加入其他原料和輔料煉蜜，制成模擬制劑，置顯微鏡下觀察。結果以山藥投料的模擬制劑未檢出異常石細胞，山薯和以山薯代替山藥投料的模擬制劑均檢出與文獻描述基本一致的石細胞。說明采用顯微技術檢查牛黃清心丸（局方）中山薯摻偽投料，方法可行。擬定方法要求不得檢出山薯石細胞（類方形、類多角形、類圓形，直徑10～50 μm，紋孔、孔溝細密而明顯，內含草酸鈣方晶）。按上述方法對38批次的牛黃清心丸（局方）抽樣進行檢查，結果2個廠家的3批抽樣檢出山薯石細胞。2.2項下鑒別結果表明，所有樣品均檢出山藥顯微特征，故推測這3批樣品并非純粹以山薯替代山藥投料，而是山薯混偽山藥投料。山薯、以山薯代替山藥投料的模擬樣品及問題樣品中觀察到的石細胞見圖3。

3 討論

牛黃清心丸（局方）是由29味原料藥材制成的原粉制劑，處方藥味眾多，化學成分復雜，指標成分含量偏低，且不乏山藥、羚羊角這類指標成分尚未明確的藥味。在此情況下，傳統的顯微技術反而能夠在鑒別方面發揮很好的作用，與化學方法互為補充。本文總結了牛黃清心丸（局方）執行標準規定的14味藥材的顯微鑒別特征，為相關檢驗工作提供了參考。進一步新建了4味藥材的顯微鑒別項目，填補了質量控制項目的缺失，為標準增修訂提供了科學依據。近年來采用薄層色譜、高效液相色譜、液質聯用法檢查中藥摻偽的研究較多，但采用顯微技術進行相關研究尚未見報道。本文創新性地采用顯微技術建立了牛黃清心丸（局方）中山薯混偽山藥投料的檢查方法，為中藥摻偽檢查提供了新的思路。

化學分析的飛速發展使其成為中藥質量控制的最主要手段，經典的顯微鑒別方法往往未受到足夠重視，事實上后者在中藥材和原粉投料中成藥的真偽鑒別方面仍舊發揮著獨特而不可或缺的作用。隨著顯微透射、顯微定量、超高分辨率顯微、激光顯微切割等分析方法的發展和應用，這一技術必將煥發新的活力。

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[責任編輯 呂冬梅]