美洲大蠊提取物CⅡ—3對家兔血常規及抗氧化活性的影響

邵維莉吳道勛彭芳劉光明　陳俊雅　王濤

【摘 要】 目的：研究美洲大蠊提取物CⅡ-3對正常家兔血常規和血清抗氧化能力的影響。方法：給予正常家兔高（16mg/kg）、中（8mg/kg）、低（4mg/kg）耳緣靜脈注射CⅡ-3，對各劑量組血常規和血清中抗氧化因子活性進行測定。結果：單次給藥后，高劑量CⅡ-3能夠明顯降低正常家兔血液中白細胞、紅細胞的數量（P<005）；多次給藥后，與NS組比較，CⅡ-3對CAT、MPO的含量及T-AOC活性均有一定的提高作用（P<005）。結論：美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎和抗氧化活性。

【關鍵詞】 美洲大蠊；血常規；抗炎；抗氧化

【中圖分類號】R967 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）23-0036-03

美洲大蠊（Periplaneta americana L.）為蜚蠊目蜚蠊科昆蟲，俗稱蟑螂。據《本草綱目》記載，蟑螂以干燥或新鮮全體入藥，有活血化瘀、解毒消疳、利水消腫等功效[1]。自20世紀70年代以來，國內外學者從其體內分離純化出多種活性物質，如與組織再生有關的p10蛋白[2]、促進血細胞吸收感染細菌的防御型分子脂多糖結合蛋白[3]以及具有利尿作用的多肽[4]等。并開發了美洲大蠊系列昆蟲藥品，如康復新液、心脈隆注射液和肝龍膠囊等[5]。實驗通過測定美洲大蠊醇提取物CⅡ-3對家兔外周血細胞因子和血清液中抗氧化因子的含量，進一步闡明美洲大蠊的抗炎及抗氧化作用，為其進一步研究提供參考。

1 儀器與材料

11 美洲大蠊提取物的制備 受試藥物CⅡ-3（批號：20140823，由大理大學藥學院劉光明教授提供）為棕褐色凍干粉末，其制備過程如下：用溶劑提取粉碎后的美洲大蠊蟲體干品，濃縮回收溶劑，得到的濃縮液經大孔吸附樹脂材料柱層析，水洗，然后用醇溶劑洗脫，所得洗脫液經減壓濃縮至無醇味，干燥后得到產品CⅡ-3[6]。實驗前受試藥物用生理鹽水分別配制成不同濃度的藥液，然后用022 μm的微孔濾膜進行過濾滅菌。

12 動物與試劑 家兔42只，體重15～20kg，由大理大學實驗動物中心提供，許可證號SYXK（滇）2011-0004，普通級別。過氧化氫酶（CAT，批號：20150707）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px，批號：20150421）、髓過氧化物酶（MPO，批號：20150415）、總抗氧化能力（T-AOC，批號：20150706）等試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；XFA6000動物血細胞分析儀用稀釋液（批號：PD1501）、HB探針清洗液（批號：PB9407）；ANI-3D溶血劑（批號：PF2402）；HB含酶清洗液（批號：PB7501）等購自南京普朗醫療設備有限公司。

13 儀器 TL-16R高速冷凍離心機（上海市離心機機械研究所）；EMP-168G半自動生化分析儀（深圳市恩普電子技術有限公司）；XFA6000全自動動物血細胞分析儀（南京普朗醫療設備有限公司）。

2 方法

21 單次給藥對家兔血細胞含量的影響 體重15～20kg健康雄性家兔18只，隨機分為3組，每組6只，即CⅡ-3高（16mg/kg）、中（8mg/kg）、低（4mg/kg）劑量組。各組家兔按給藥量2mL/kg通過耳緣靜脈給藥1次，分別于給藥前，給藥后5、15、30、60、120、240min耳緣靜脈采血20μL，全自動血細胞分析儀上檢測不同時間點家兔血液中白細胞、紅細胞、血小板等含量的變化。

22 連續給藥對家兔血清中抗氧化因子含量的影響 體重15～20kg健康雄性家兔24只，按體重隨機分為4組，每組6只，分別為3個給藥組（與21中相同）和1個生理鹽水對照組（NS組）。給藥組家兔每日耳緣靜脈給藥，給藥量均為2mL/kg，NS組給予生理鹽水，連續給藥5d。末次給藥后24 h，心臟采血5 mL，并分離血清，參照試劑盒說明書分別測定血清中過氧化氫酶（Catalase；CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（Myeloperoxidase；GSH-PX）、髓過氧化物酶（Myeloperodidase；MPO）的含量以及血清總抗氧化能力（Total Antioxidant Capacity ；T-AOC）的活性。

23 數據分析 采用SPSS170分析軟件進行統計學分析，數據用均數±標準差（x±s）表示，單次給藥數據采用配對t檢驗，多次給藥數據均數的比較用單因素方差分析，P<005為差異具有統計學意義。

3 結果

31 單次給藥美洲大蠊提取物CⅡ-3對家兔血細胞含量的影響

311 單次給藥后CⅡ-3對家兔白細胞含量的影響 與給藥前比較，給藥后30、60min時，高劑量組家兔血液中白細胞含量明顯降低，差異有統計學意義（P<005）。結果見表1。

312 單次給藥CⅡ-3對家兔紅細胞含量的影響 與給藥前比較，給藥后240min時高劑量CⅡ-3組紅細胞數量的減少較明顯，差異有統計學意義（P<005）。結果見表 2。

313 單次給藥CⅡ-3對家兔血小板含量的影響 與給藥前比較，CⅡ-3各劑量組對家兔血小板的影響不明顯，差異無統計學意義（P>005）。結果見表 3。

32 多次給藥CⅡ-3對正常家兔血清中抗氧化因子含量的影響 與NS組比較，CⅡ-3能夠明顯增強正常家兔血清中MPO的活性，差異有統計學意義（P<005）。低劑量、中劑量CⅡ-3能使血清中CAT的含量顯著增加，差異有統計學意義（P<005），中劑量CⅡ-3還可以顯著提高血清中T-AOC的活性，差異有統計學意義（P<005）；另外，高劑量CⅡ-3也能提高血清中GSH-PX的含量，但差異不具有統計學意義（P>005）。結果見表4。

4 討論

血常規檢查是血液細胞部分的檢查，也是臨床一項基本的常規檢查[7-8]。根據其數量和分布的變化，可以作為疾病診斷的輔助手段。紅細胞各項參數出現異常時，可對一些疾病的診斷提供依據。白細胞可以保護機體避免各種病毒性和細菌性感染，以及其他異物的入侵[9]。有證據表明[10]，血小板對急性炎癥和損傷，包括類風濕性關節炎、腦型瘧和急性肺損傷等起主要作用。試驗中，高劑量CⅡ-3能夠降低正常家兔血液中白細胞、紅細胞的數量，提示其具有一定的抗炎作用。

過氧化氫酶（CAT）能夠刺激H2O2生成水并且可以清除機體氫過氧化物，且過氧化氫酶利用H2O2可以氧化一些毒素，包括酚類、甲酸、甲醛和酒精等[11]。過氧化氫作為機體代謝過程中產生的廢物，能夠對機體造成損害。為了避免這種損害，過氧化氫必須被快速地轉化為其他無害或毒性較小的物質，而過氧化氫酶就是常常被細胞用來催化過氧化氫分解的工具。實驗結果顯示，與NS組相比，低、中劑量CⅡ-3能夠明顯增強家兔血清中過氧化物酶的活力（P<005）。谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）是機體內廣泛存在的抗氧化酶，它在信號平衡、免疫調節[12]，以及清除氫過氧化物，避免氧化損傷中發揮重要作用[13-14]。實驗中，中、高劑量CⅡ-3可以增加家兔血清中谷胱甘肽過氧化物酶的含量。髓過氧化物酶（MPO）存在于吞噬細胞中，是抗微生物系統和炎癥調節的基本成分[15]，其活性的變化可對早期組織損傷做出較敏感的反應[16]。作為中性粒細胞和單核細胞的標志酶[17]，其水平與細胞數量成正比，與血常規中的中性粒細胞和單核細胞數的增加一致；且根據實驗發現，各劑量CⅡ-3均能明顯提高家兔血清中MPO的活性（P<005）。而從整體抗氧化水平而言，總抗氧化能力（T-AOC）對防御體的抗氧化作用主要通過消除自由基和活性氧，分解過氧化物，去除催化作用的金屬離子等來實現。結果發現，中劑量CⅡ-3能夠明顯增加家兔血清中T-AOC水平（P<005）。根據所測定家兔血清中抗氧化因子的活性和水平，可以認為CⅡ-3具有一定的體內抗氧化作用。

實驗通過對正常家兔外周血細胞含量及抗氧化因子進行測定，結果顯示，給予美洲大蠊提取物CⅡ-3后，正常家兔血液中白細胞、紅細胞數量減少，對抗氧化因子MPO、CAT、GSH-PX、T-AOC具有一定的提高作用，從而表明美洲大蠊提取物CⅡ-3具有一定的抗炎、抗氧化作用，這一結果將為美洲大蠊的下一步研究提供理論依據。

參考文獻

[1]李玉和. 蟲類藥治療疑難病證的臨床研究[J]. 中醫藥信息，1998，11（4）：21-23.

[2]Nomura A， Kawasaki K， Kubo T， et al. Purification and localization of p10， a novel protein that increases in nymphal regenerating legs of Periplaneta americana （American cockroach）[J]. The International Journal of Developmental Biology， 1992， 36（3）： 391-398.

[3]Jomori T， Natori S. Function of the lipopolysaccharide-binding protein of Periplaneta americana as an opsonin[J]. FEBS Letters， 1992， 296（3）： 283-286.

[4]Kay I， Patel M， Coast GM， et al. Isolation， characterization and biological activity of a CRF-related diuretic peptide from Periplaneta americana L[J]. Regulatory Peptides， 1992， 42（3）： 111-122.

[5]何正春，彭芳，宋麗艷，等. 美洲大蠊化學成分及藥理作用研究進展[J]. 中國中藥雜志，2007，32（21）：2326-2331.

[6]大理學院. 大孔吸附樹脂制備的美洲大蠊抗腫瘤有效部位及用途[P]. 中國發明專利，CN101214262. 2008-07-09.

[7]費樹強. 血常規檢查的臨床意義分析[J]. 大家健康，2014，8（16）：53-54.

[8]楊志明. C-反應蛋白和血常規測定的臨床意義[J]. 實用中西醫結合臨床，2014，14（9）：51-52.