梔子苷改善缺氧缺血性腦損傷新生大鼠的運動功能并抑制炎癥反應

謝五元

摘要：目的 觀察梔子苷對缺氧缺血性腦損傷（HIBD）新生大鼠皮層TNF-α和IL-6等炎性因子表達的影響，探討梔子苷對缺氧缺血性腦損傷的保護作用機制。方法 按照Rice法制作新生大鼠HIBD模型。24只健康新生7d SD大鼠隨機分為對照組、HIBD模型組、梔子苷治療組，每組8只。造模成功后，懸掛試驗評價大鼠的運動功能；ELISA法檢測各組大鼠皮層TNF-α和IL-6表達水平。結果 與對照組比較，HIBD模型組大鼠和梔子苷治療組大鼠表現出明顯的運動功能落后（P<0.01），與HIBD模型組比較，梔子苷治療組大鼠運動功能明顯改善（P<0.01）；HIBD模型組大鼠和梔子苷治療組大鼠皮層TNF-α和IL-6表達均較對照組增高（P<0.01），但梔子苷治療組表達較HIBD模型組顯著降低（P<0.01）。結論 梔子苷可能通過降低HIBD大鼠皮層TNF-α和IL-6表達，抑制腦內炎性反應，發揮腦保護作用。

關鍵詞：子苷；缺氧缺血性腦損傷；炎性反應

缺氧缺血性腦損傷（hypoxic ischemic brain damage， HIBD）是新生兒期最危險的疾病之一，其發病機制復雜，目前尚無特異性療法。梔子苷是中藥梔子的主要成分，是一種天然的抗炎抗氧化物質，在抗炎鎮痛、抗腫瘤及在中樞神經系統和心腦血管疾病的治療中都有一定的作用[1]。但梔子苷對新生大鼠HIBD是否有保護作用，目前國內外鮮少報道。本研究通過建立新生大鼠HIBD模型，檢測皮層TNF-α和IL-6的表達變化，探討梔子苷干預后對HIBD的影響及其可能的機制，從而為梔子苷更合理有效的應用于臨床治療HIBD提供實驗依據和理論指導。

1 資料與方法

1.1一般資料 24只健康新生7d SD大鼠購自河南省實驗動物中心，體重（12.36±1.57）g，雌雄不拘；梔子苷；TNF-α和IL-6 ELISA試劑盒。

1.2方法

1.2.1 HIBD模型制備及分組 24只新生7 d的SD大鼠隨機分為對照組、HIBD模型組和梔子苷治療組。采用Rice方法[2]行左側頸總動脈分離并結扎及缺氧2 h制作HIBD模型，對照組只分離左側頸總動脈，不結扎，不缺氧。梔子苷治療組于造模成功后即刻給予腹腔注射梔子苷（25 mg/kg），1次/d，連續7 d；HIBD模型組于造模成功后與對照組一同腹腔注射梔子苷等等量的生理鹽水。各組大鼠術后常規飼養。各組大鼠分別于術后第7 d行為學檢測，然后斷頭取腦，進行生化指標的檢測。

1.2.2運動功能評價 懸掛試驗：首先將大鼠放在鼠籠的蓋子上，輕搖籠蓋，使大鼠抓握籠蓋，然后將籠蓋倒置，大鼠會緊緊抓住籠蓋以防墜落。用秒表測定大鼠從籠蓋倒置到大鼠墜落的時間。

1.2.3 ELISA法檢測各組大鼠皮層TNF-α和IL-6表達水平

0.8%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，經4%多聚甲醛心臟灌流，快速取出全腦，冰浴分離出大鼠大腦皮層，1：10勻漿，4℃，10000 r/min，離心10 min，取上清液。實驗嚴格按照ELISA法說明書步驟進行。

1.3統計學處理 采用 SPSS 19.0軟件包對數據進行統計學比較分析，計量資料以標準差（x±s）表示，多組間比較行單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1各組大鼠運動功能測試結果 與對照組（10.12±2.47）比較，HIBD模型組大鼠（4.39±0.96）和梔子苷治療組大鼠（5.92±1.27）的平均懸掛持續時間均明顯減少（P<0.01），與HIBD模型組比較，梔子苷治療組大鼠懸掛持續時間明顯延長（P<0.01）。

2.2各組大鼠皮層TNF-α和IL-6的表達 ELISA結果顯示，HIBD模型組大鼠和梔子苷治療組大鼠皮層TNF-α和IL-6表達均較對照組增高（P<0.01），但梔子苷治療組表達較HIBD模型組顯著降低（P<0.01），見表1。

3 討論

新生兒缺氧缺血性腦損傷（hypoxic ischemic brain damage， HIBD）是由于圍產期窒息引起的部分或者完全缺氧，導致胎兒或新生兒腦損傷性疾病，會造成不同程度的認知、運動障礙[3]。本實驗室采用Rice法制備HIBD大鼠模型，術后采用懸掛試驗檢測大鼠行為，發現HIBD模型組大鼠運動功能明顯下降，表明我們造模成功。

HIBD發病機制比較復雜，近些年研究表明，腦內炎癥反應在腦損傷的發生過程中起到重要作用，而皮層區與感覺運動功能關系密切，故本研究以皮層為切入點，檢測炎性因子的表達，以進一步探討HIBD的發病機制和治療措施。

中醫藥毒副作用相對比較小，在臨床治療腦缺血方面有著很大的優勢。梔子苷是從中藥梔子中提取出的環烯醚萜苷類物質，易通過血腦屏障，目前其在治療腦部疾病方面受到越來越多的關注。研究表明，梔子苷可通過抑制細胞凋亡、抑制氧化應激反應、清除自由基、抑制小膠質細胞活化、抑制炎癥反應等途徑減輕或改善各種原因引起的腦損傷過程[4]。

本研究采用梔子苷對HIBD大鼠模型進行干預治療，結果發現TNF-α和IL-6在HIBD大鼠腦組織中的表達均較對照組增高，梔子苷治療后顯著降低，表明梔子苷可以通過抑制TNF-α和IL-6的表達，抑制腦內炎癥，對HIBD大鼠發揮腦保護作用，是一種有效的神經保護劑。

參考文獻：

[1]游偉良，平其能，孫敏捷，等. 梔子苷的藥理學研究新進展[J]. 藥學進展，2012， 36（4）： 158-162.

[2]Rice JE 3rd， Vannucci RC， Brierley JB. The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat[J]. Ann Neurol， 1981， 09（2）： 131-141.

[3]劉合營，黃友敏，周永勤. 缺氧缺血性腦病患兒內脂素和VE-cadherin的變化[J]. 中華全科醫學，2011， 9（9）： 1455-1457.

[4]Liu W， Li G， H？lscher C， Li L. Neuroprotective effects of geniposide on Alzheimer's disease pathology[J].Rev Neurosci， 2015， 26（4）： 371-383.

編輯/周蕓霏