Ki-67及PTEN在口腔腺樣囊性癌中的表達及臨床意義

王佳娜 沈建軍 張艷紅 王佳天 李文秀 潘軍英

Ki-67及PTEN在口腔腺樣囊性癌中的表達及臨床意義

王佳娜1沈建軍1張艷紅1王佳天1李文秀1潘軍英2

目的研究口腔腺樣囊性癌(OACC)中Ki-67和PTEN的表達情況，及其表達水平與臨床病理特征的關系。方法收集佳木斯大學附屬第一醫院病理實驗室證實的40例口腔腺樣囊性癌。另選口腔腺樣囊性癌患者標本癌旁正常腺體15例做對照組。免疫組化SP法檢測腺樣囊性癌中Ki-67蛋白及PTEN的表達。結果Ki-67蛋白在口腔腺樣囊性癌中的陽性率為70%(28/40)，明顯高于對照組13%(2/15)(P<0.05)。PTEN蛋白在口腔腺樣囊性癌中的陽性率為63%(25/40)，明顯高于對照組20%(3/15)(P<0.05)。Ki-67、PTEN的表達與TNM分期、腫瘤組織學類型、遠處轉移、淋巴結轉移和神經節浸潤均顯著相關，并且Ki-67和PTEN表達存在相關性。結論Ki-67和PTEN在口腔腺樣囊性癌發生和發展過程中可能起重要作用。Ki-67和PTEN蛋白可能作為口腔腺樣囊性癌的診斷標志物。

口腔腺樣囊性癌；Ki-67；PTEN；免疫組織化學

口腔腺樣囊性癌是口腔頜面部惡性腫瘤中比較常見的腫瘤之一，惡性常多發于女性，以腭部的小涎腺最多見，其次是腮腺[1]。該腫瘤生長緩慢，但具有一定的侵襲能力，早期即可向周圍組織侵襲；局部淋巴結轉移不常發生，主要通過血源性途徑向遠處轉移。對于該病的治療，目前國內外臨床上仍采用以手術為主的綜合治療，由于常發生局部復發及遠處轉移導致該病的術后遠期生存率較低，有報道稱10年的生存率為43%[2-4]。因此探討其浸潤性及遠處轉移能力具有一定臨床意義。目前關于Ki-67和PTEN在口腔腺樣囊性癌中的表達，在國內外的研究中較少。因此本研究采用免疫組織化學方法檢測Ki-67和PTEN在口腔腺樣癌中的表達，以探討兩種蛋白與腫瘤的浸潤性及遠端轉移能力之間的關系，從而為口腔腺樣囊性癌的臨床治療和預后作出判斷提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

選取佳木斯大學附屬第一醫院病理實驗室2010年1月—2016年6月病史保存完整且病理診斷為口腔腺樣囊性癌進行根治性手術石蠟標本40例，其中男性10例，女性30例，年齡30～80歲，中位年齡55歲。腫瘤發生部位包括舌下腺、口底、頜下腺、腮腺、腭部(硬腭)、口頰部。病理診斷參照世界衛生組織(2011)涎腺癌的TNM分類分期分為侵襲組20例和非侵襲組20例。對照組選取癌旁正常腺體15例。病理診斷由3名專業病理科醫師診斷核實，并且符合組織學診斷標準和病理分級標準。

1.2 試劑

Ki-67及PTEN均為單克隆抗體(Ki-67鼠抗人單克隆抗體ZM-0166；PTEN鼠抗人單克隆抗體ZM-0221)，工作濃度均為1∶100，SABC免疫試劑盒和DAB顯色試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 檢測方法

采用免疫組織化學SABC法(按試劑盒說明書進行)，DAB顯色，蘇木素復染，陰性對照PBS緩沖液分別代替一抗，其余步驟同實驗組。顯微鏡下觀察結果：陽性為蛋白以細胞核或者細胞漿出現顯色。由兩位高資歷的病理醫生采用雙盲法對免疫組化結果進行評估。觀察至少5個具有代表性的高倍視野，根據細胞陽性染色范圍計數腫瘤細胞中的陽性個數百分比來判斷：陽性細胞數<15%記為(-)，陽性細胞數在16%～30%記為(+)，陽性細胞數在31%～50%記為(++)，陽性細胞數>51%記為(+++)，(+)～(+++)均記為陽性。圖片拍照。

1.4 統計學方法

應用SPSS 21.0軟件進行統計學分析，計數資料以頻數(%)表示，組間比較采用卡方檢驗，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 Ki-67和PTEN的表達情況

Ki-67和PTEN在口腔腺樣囊性癌中的表達如圖1～2所示，Ki-67和PTEN在癌旁正常組織中的陽性表達如圖3～4所示，Ki-67和PTEN在淋巴結組織中的陽性表達如圖5～6所示。Ki-67和PTEN主要分布于細胞核和細胞漿中，陽性表達率分別為70%和63%，在正常組織中陽性表達率為13%和20%，兩組陽性表達率間的差異具有統計學意義(P<0.05)(表1)。

圖1 Ki-67在口腔腺樣囊性癌中的表達(400×)Figure 1 Expression of Ki-67 in oral adenoid cystic carcinoma(400×)

圖2 PTEN在口腔腺樣囊性癌中的表達(400×)Figure 2 Expression of PTEN in oral adenoid cystic carcinoma(400×)

圖3 Ki-67在癌旁組織中的陽性表達(200×)Figure 3 The positive expression of Ki-67 in paracancerous tissues(200×)

圖4 PTEN在癌旁組織中的陽性表達(200×)Figure 4 The positive expression of PTEN in paracancerous tissues(200×)

圖5 Ki-67在淋巴結組織中的陽性表達(200×)Figure 5 The positive expression of Ki-67 in lymph node tissue(200×)

圖6 PTEN在淋巴結組織中的陽性表達(200×)Figure 6 The positive expression of PTEN in lymph node tissue(200×)

表1 Ki-67和PTEN在口腔正常組織和口腔腺癌組織中的表達(n，%)Table 1 The expression of Ki-67 and PTEN in normal tissues and OACC(n，%)

2.2 Ki-67及PTEN表達與OACC臨床病理特征的關系

Ki-67及PTEN的表達與口腔腺樣囊性癌的TNM分期、組織學類型、淋巴結轉移、神經侵犯有關(P<0.05)，與性別、年齡、腫瘤位置無關(P>0.05)(表2)。

2.3 Ki-67與PTEN在口腔腺樣囊性癌中表達的關系

口腔腺樣囊性癌中Ki-67與PTEN的表達存在相關性(φ=0.394，P<0.05)(表3)。

表3Ki-67及PTEN的相關性檢驗
Table3The correlation of Ki-67 with PTEN expression

Ki-67PTEN+-Totalχ2P+217284．5710．033-4812Total251540

表2 Ki-67及PTEN表達與口腔腺樣囊性癌臨床病理特征的關系Table 2 The relationship between the expression levels of Ki-67 and PTEN in OACC and clinicopathological features

3 討論

口腔腺樣囊性癌是常見的惡性腫瘤，早期即可向周圍組織侵襲并通過血源性途徑向遠處轉移。但其侵襲轉移機制不清[1-4]。Ki-67蛋白是增殖細胞標記物，在細胞周期的所有活躍階段均表達。Ki-67的陽性腫瘤細胞的分數(Ki-67標記指數)與癌癥的進展有關[5-6]。PTEN是一種近年來新識別的基因，可以抑制多種基因的活性，對腫瘤的轉移、侵襲抑制基因的作用尤為明顯，體現在PTEN可以有效促進腫瘤細胞的侵襲及轉移[7-8]。

在本研究中Ki-67和PTEN在口腔腺樣囊性癌中的表達明顯高于正常腺體組織，與腫瘤的分期、轉移和神經侵犯密切相關(P<0.05)。并且口腔腺樣囊性癌組織各分期間表達強度隨著分期越高，表達率越高；轉移侵襲越遠，表達越活躍。Ki-67、PTEN二者在口腔腺樣囊性癌中的表達呈顯著的相關性。這與近年來在胃癌、子宮內膜癌、乳腺癌等進行的研究結果相似[9-10]。

Ki-67的活化和表達與許多癌前病變和惡性疾病有關，可以促進腫瘤細胞的發生、增殖、黏附、侵襲、轉移和血管生成，甚至抑制腫瘤細胞的凋亡。PTEN在調節腫瘤細胞的生長、分化、轉移等各方面均具有重要作用。(1)通過對細胞信號傳導的影響來阻滯細胞生長的周期；(2)PTEN能夠增加細胞的凋亡率；(3)抑制細胞的聚集、分化、轉移、擴散；(4)減少腫瘤血管的生成。這些結果說明口腔腺樣囊性癌中Ki-67、PTEN對腫瘤的發生、發展可能起到協同作用。由于本實驗的病例數有限，實驗經費及研究時間限制，不能進一步探討整個通路在口腔腺樣囊性癌發生發展中起到的作用，檢測的結果可能存在一些不足，希望更多的學者搜集更多的病例進一步研究相關的問題。

綜上所述，Ki-67和PTEN可能在口腔腺樣囊性癌的發生、發展過程中發揮著重要作用，可能是口腔腺樣囊性癌的標志物。在臨床工作中檢測Ki-67和PTEN這兩種蛋白可能對評估口腔腺樣囊性癌的惡性程度、預后具有重要意義。

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6 Czyzewska J，Guzińska-Ustymowicz K，Lebelt A，et al.Evaluation of proliferating markers Ki-67，PCNA in gastric cancers[J].Rocz Akad Med Bialymst，2004，49(Suppl 1)：64-66.

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9 Czyzewska J，Guzińska-Ustymowicz K，Lebelt A，et al.Evaluation of proliferating markers Ki-67，PCNA in gastric cancers[J].Rocz Akad Med Bialymst，2004，49(Suppl 1)：64-66.

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ExpressionofKi-67andPTENinoraladenoidcysticcarcinomaanditsclinicalsignificance

WANGJiana1，SHENJianjun1，ZHANGYanhong1，WANGJiatian1，LIWenxiu1，PANJunying2

1.Heilongjiang University of TCM，Jiamusi 154007，China；2.The First Affiliated Hospital，Heilongjiang University of Chinese Medicine

ObjectiveThe aims of this study were to determine the expression of Ki-67 and PTEN in oral adenoid cystic carcinoma(OACC)and its relationship with clinicopathological features，and to explore the relationship between the expression of Ki-67 and PTEN.MethodsForty cases of oral adenoid cystic carcinoma were collected from the pathological laboratory in our hospital.Another 15 cases of normal gland in patients with oral adenoid cystic carcinoma were selected as the control group.The expression of Ki-67 protein and PTEN in adenoid cystic carcinoma was detected by immunohistochemistry.ResultsThe positive rate of Ki-67 protein in oral adenoid cystic carcinoma was 70%(28/40)，which was significantly higher than that in the control group(2/15)(P<0.05).The positive rate of PTEN in oral adenoid cystic carcinoma was 63%(25/40)，which was significantly higher than that in the control group 20%(3/15)(P<0.05).They were associated with histological types，metastasis，lymph node metastasis and neural invasion，and not correlated with age，gender and tumor location.The expression of Ki-67 and PTEN in oral adenoid cystic carcinoma may have a significant correlation.ConclusionThe expression of Ki-67 and PTEN in adenoid cystic carcinoma is high，and their occurrence and development in adenoid cystic carcinoma play an important role in the process of evolution and metastasis.Ki-67 and PTEN proteins may be markers of oral adenoid cystic carcinoma.

Adenoid cystic carcinoma of the oral cavity；Ki-67；PTEN；Immunohistochemistry

黑龍江中醫藥大學科研基金面上項目(201722)

1.黑龍江中醫藥大學(佳木斯 154007)；2.黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院

王佳娜，女，(1973-)，本科，高級實驗師，從事中醫藥抗腫瘤的研究。

潘軍英，E-mail：pjy19810621@163.com

R739.87

A

10.11904/j.issn.1002-3070.2017.06.002

(收稿：2017-01-14)