角調音樂對高血壓肝火亢盛證大鼠血壓及行為學的影響

張思童 劉婧瑋 李君玲 李玉波 周 倩 楊 佩 王 田 趙慧輝 馬雪玲 王 偉

(1 北京中醫藥大學，北京，102446； 2 首都醫科大學中醫藥學院，北京，100069； 3 中國中醫科學院，北京，100700)

高血壓，也稱原發性高血壓，是以體循環動脈壓升高為主要臨床表現的綜合征。中醫學理論中高血壓屬于“眩暈”的范疇，《素問·至真要大論》曰：“諸風掉眩，皆屬于肝”，認為“眩暈”的發生發展與“肝”有著密切的關系。中醫學認為，高血壓肝火亢盛證受情緒影響明顯且與肝關系密切，其發病與藏象理論中五臟之一的肝臟功能失調密切相關。肝之陽氣升發太過，沖逆于上，是肝火亢盛證發生的主要病機，而長期情志不暢導致肝失疏泄，肝氣郁結，郁而化火則是肝火亢盛證的主要病因，眩暈、頭痛、易怒焦慮則是肝火亢盛證的主要臨床表現。

當前高血壓的主要治療方法分為藥物治療與非藥物治療2種，藥物治療是控制高血壓疾病的主要方法，但因其藥物種類繁多，需長期定時服用、不良反應較大等缺點，藥物療法的臨床效果日漸受到限制，非藥物治療方法開始備受關注。肝火亢盛證作為早期高血壓中醫證候的主要證型，其治療方式也是一直以來的研究熱點。易怒焦慮情緒是高血壓肝火亢盛證的特征性臨床表現，而音樂療法屬于心理干預方法的一種，有研究證明，藥物與音樂療法相結合的治療效果要優于單純藥物治療，音樂療法在住院、日間醫院和門診服務這3類醫院環境下可以改善患者就醫的體驗、減少不良情緒的產生，并對患者的生命質量有直接影響，音樂療法對于改善Ⅰ期高血壓患者生命質量和在控制血壓上起著很重要的作用[1-3]。

音樂被用于治療疾病已有幾千年歷史，早在春秋時期的《黃帝內經》中便有以五音應五臟為核心的記載，詳細闡述了遠古時代的音樂治療理念。中醫學認為，五音療法是利用某一主調音樂的聲波波動與其所歸的經絡產生共振,利用經絡循行來影響臟腑氣血和調節情志的作用[4]。高血壓肝火亢盛證的治療原則主要以平肝潛陽和疏肝解郁為主。角調音樂，是以角音為主音，輔以其他四音而組成的曲子；其具有“木”的特性，對應人體的肝、膽，入肝膽之經，可以清泄肝膽之火，達到疏肝理氣，平肝潛陽從而降低血壓的作用。有研究發現[5]，角調音樂與常規藥物治療相結合的方法能夠有效降低高血壓肝陽上亢證患者的血壓，其降壓效果優于單純藥物治療。

課題組前期研究發現，自發性高血壓大鼠(SHR)是目前為止最接近于人類原發性高血壓的動物模型，肝火亢盛證是自發性高血壓大鼠早期最常見的中醫證型且14～18周齡為SHR較為穩定的肝火亢盛證證候時間窗[6-7]。因此本課題采用角調音樂干預高血壓肝火亢盛證大鼠以探討其對血壓、心率及行為學的影響，為進一步探究角調音樂作用于高血壓肝火亢盛證的機制研究打下基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 選用由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供的健康狀況良好，清潔級、13周齡、雄性自發性高血壓大鼠(SHR)20只。常規飼養于北京中醫藥大學SPF級實驗動物中心。飼養溫度控制在20～26 ℃，濕度保持在40% ～60%，光照節律：早時6點至晚時18點，保持通風良好。

1.1.2 試劑與儀器 自制敞箱(1 m×1 m×0.4 m)，周壁、底均勻涂黑，反應箱底用白線劃分為面積相等的25個矩形(曠場試驗反應箱按照國際通用標準制定而成)；SoftronBP-2010A型大鼠智能尾動脈無創血壓測量儀(北京軟隆科技有限責任公司)；大鼠平衡旋轉儀(上海繼德教學實驗器材廠，JD-SH)；五行音樂生命律動儀(北京樂先藥后科技有限公司，SW528C)；羅技攝像頭。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 13周齡自發性高血壓(SHR)大鼠20只，適應性喂養1周后，從第14周開始，測基線血壓，并根據高血壓肝火亢盛證病證結合動物模型的診斷標準[1]進行證候屬性判別，動態監測血壓、心率，采集宏觀表征，行為學試驗(曠場試驗及旋轉耐受時間對其精神狀態進行評估)等，判別大鼠的證候屬性；篩選出高血壓肝火亢盛證的大鼠16只并按照隨機數字表分為高血壓肝火亢盛證角音干預組和高血壓肝火亢盛證對照組。

1.2.2 干預方法 高血壓肝火亢盛證角音干預組采用角音治療，30～45 min/次，1次/d，于中午13:00—15:00時間段(根據子午流注表及大鼠夜間生物活動規律)，無噪聲且舒適環境進行。角音干預時將2組大鼠分別置于2個隔音效果好的房間；角音干預期間，肝火亢盛證對照組不采用任何干預措施。

1.2.3 檢測指標與方法

1.2.3.1 血壓及心率的測定 采用Softron大鼠無創尾動脈測壓儀測量安靜狀態下大鼠尾動脈血壓。在正式測壓前進行為期1周的測血壓訓練；測量時操作間室溫保持在25～26 ℃，室內保持安靜。測量時將智能無創血壓儀主機與電腦連接，依據大鼠的大小選擇合適鼠袋；調試無創血壓儀主機溫度設置，應確保鼠袋內部溫度在37～38.5 ℃；動作輕柔，盡量使保持大鼠安靜清醒狀態尾壓。待機器預熱15 min后，無創血壓儀開啟測量模式，當血壓波形趨于穩定時開始進行測量，每只大鼠連續測量3次，取其均值，記錄測量結果。每次測量在相同條件下進行，以盡量減小測量誤差確保結果穩定性，實驗開始后測量時間固定于每周一、五08：00-12:00安靜環境下測量大鼠血壓。

1.2.3.2 行為學試驗方法 曠場試驗將大鼠放置于清潔敞箱中央，底面劃分為5×5格，用攝像頭記錄大鼠在底面穿梭情況，以動物行為記錄分析系統(荷蘭)合并人工記錄，統計在安靜環境下，大鼠的活動總距離、穿越格數、直立次數等指標，測定時間為3 min/次，每只大鼠測試結束后，需清理敞箱內壁及底面大鼠的尿、便，噴灑乙醇去除前一只大鼠留下氣味，待乙醇揮發后繼續下一只大鼠的測試。

1.2.3.3 旋轉耐受實驗 采用平衡旋轉儀實，驗前調整旋轉儀轉速為1 r/s，設置旋轉1次時長為120 s，將大鼠置于平衡旋轉儀旋轉盤正中央平臺[8]上，開動電源，當大鼠從旋轉盤上跌下平臺時，準確記錄下顯示器上的時間。若滿120 s仍不跌下，則停止測試，測定時間記錄為120 s。

1.3 統計學方法 采用SPSS 20.0統計軟件進行統計學分析；各組均用計量數據進行分析，組間比較采用t檢驗和方差齊性檢驗，不滿足正態分布時用非參數檢驗。

2 結果

2.1 血壓及心率結果 從實驗結果整體來看，對照組大鼠血壓及心率與角音干預組比較偏高；實施角音干預第1周時2組大鼠血壓及心率比較，差異無統計學意義(P>0.05)，干預第2～4周時高血壓肝火亢盛證角音干預組大鼠血壓以及心率水平均較對照組低，其中干預第3～4周時2組大鼠血壓、心率比較,差異有統計學意義(P<0.05)。見表1、表2。

2.2 曠場試驗結果

2.2.1 直立次數和曠場活動總距離 高血壓肝火亢盛證角音干預組大鼠直立次數隨著干預時間的延長逐漸減少，在角音干預后第4周時曠場試驗中直立次數和曠場活動總距離與肝火亢盛證對照組大鼠比較均明顯減少(P<0.01)。見表3、圖1，穿格次數與對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見圖2。

圖1 2組大鼠曠場活動總距離結果(cm)

注：與肝火亢盛證對照組比較，*P<0.05

圖2 2組大鼠穿格次數結果

注：與肝火亢盛證對照組比較，*P<0.05

2.2.2 行為軌跡圖結果 2組大鼠進行實驗四周行為軌跡如圖3所示，從圖中可以看出，角音干預后第1周2組大鼠行為路徑無明顯差異，干預4周后高血壓肝火亢盛證角音組大鼠與肝火亢盛證對照組大鼠比較其行為軌跡簡化，經角音干預4周后角音組大鼠行為軌跡轉變為周圍型，而對照組大鼠的行為軌跡仍然為中央型且其軌跡仍舊雜亂。

圖3 2組大鼠行為軌跡圖結果

注：A高血壓肝火亢盛證角音干預組(第1周);B高血壓肝火亢盛證角音干預組(第4周);C肝火亢盛證對照組(第1周);D肝火亢盛證對照組(第4周)

2.3 旋轉耐受時間測定結果 實驗結果顯示，高血壓肝火亢盛證角音干預組大鼠旋轉耐受時間隨干預時間的延長而增長，與肝火亢盛證對照組大鼠比較，第1周2組之間比較，差異無統計學意義(P>0.05)，但隨著角音干預時間的延長，角音干預組大鼠在第2周至第4周旋轉耐受時間均明顯增加(P<0.05)，其中干預第3周時旋轉耐受時間增加更為明顯。對照組大鼠旋轉耐受時間隨周齡增加呈現縮短趨勢。見圖4。

3 討論

高血壓肝火亢盛證在臨床上主要表現為在外部環境等因素的刺激下，患者不僅會出現頭暈頭痛、目眩、乏力，還會出現緊張、煩躁不安、焦慮等情緒上的變化且易反復、持續時間較長[9]?！独碛羼壩摹分星宕t吳師機曰：“七情之病也，看花解悶，聽曲消愁，有勝于服藥者矣”。而傳統的五音療法不僅可以感染、調節情緒，還可以通過與五臟經絡共振來調節人體的陰陽盛衰及氣機變化，從而達到治療情志類疾病的目的。有研究表明[10]，角音輔助治療原發性高血壓患者總體療效優于單純藥物治療效果且其價格廉價、操作簡易。Vaajoki等[11]研究發現，音樂療法可以明顯降低患者的血壓、心率。這可能與音樂干預人體神經內分泌調節、與人體形成同步共振來調節生物節律以及改善高血壓患者的自主神經平衡狀態等有關[12-14]。

表1 2組大鼠血壓測量結果

注：與同周齡高血壓肝火亢盛證對照組比較，*P<0.05

表2 2組大鼠心率測量結果次/min,n=8)

注：與同周齡高血壓肝火亢盛證對照組比較，*P<0.05

表3 2組大鼠直立次數隨周齡變化次，n=8)

注：與同周齡提前偶素要求肝火亢盛證對照組大鼠比較，*P<0.01

圖4 2組大鼠旋轉耐受時間結果(s)

注：與肝火亢盛證對照組比較，*P<0.05

高血壓病的發生發展過程中，腎上腺素分泌增加，使心肌收縮加強，心輸出量增加，導致心率加快；去甲腎上腺素分泌增加使得全身小動脈血管收縮，外周阻力增加，動脈血壓增高。有研究認為音樂播放維持一定時間可以促進褪黑素分泌，抑制腎上腺素和去甲腎上腺素的分泌，降低神經興奮性，有一定鎮靜催眠作用，從而到達心率下降的效果[15-20]。在本實驗中，14～18周齡高血壓肝火亢盛證大鼠作為觀察對象，實施角音干預后第2～4周時高血壓肝火亢盛證角音干預組大鼠血壓以及心率水平較對照組低，其中干預后第3～4周時2組大鼠血壓、心率比較，差異有統計學意義(P<0.05)。實驗結果表明，實施角調音樂對高血壓肝火亢盛證大鼠的血壓及心率有一定影響。

近年來研究發現，高血壓的發生與發展不僅受遺傳及環境因素的影響，社會心理因素也是高血壓發病的重要誘因，情緒變化對高血壓患者有明顯影響并多伴有一定程度情緒障礙，不良情緒甚或心理應激都會影響到高血壓病的臨床療效[21-23]。隨著“生物-心理-社會-醫學”模式的提出和發展，提示心理精神因素在疾病的發生、發展及預后中扮演著重要角色，非藥物治療手段也因此參與到臨床治療中來。中醫學對情緒的認知早在戰國時期便有記載，《素問·陰陽應象大論》中提到“人有五臟化五氣，以生喜怒悲憂恐”“肝在志為怒”，“志”即情志，相當于現代心理學中的“情緒”一詞。情志在一定程度上反映了人體五臟六腑、氣血精液狀態，當情志作為一種致病因素時，則可依據五行規律進行傳變，導致機體臟腑陰陽失衡從而引發疾病。當機體處于負性情緒時可刺激交感神經興奮，垂體-腎上腺素皮質軸活動增加，類固醇分泌增多，從而引起血壓升高。本研究中隨著SHR大鼠血壓的升高，負性情緒如緊張、煩躁不安、焦慮等開始出現。

有研究顯示[24-25]，合適的經典音樂可以明顯降低高血壓患者的收縮壓，緩解高血壓患者緊張、焦慮的情緒。在中醫學理論中，角調音樂為春音，屬木，主生，該曲調描繪了春回大地、萬物蓬勃生長、積極樂觀的美好畫面，令人心情舒暢，研究表明[26-28]，此類音樂有刺激積極情緒產生、提振情緒的作用，從而使皮質醇水平降低，肌肉得到松弛，焦慮得以緩解。在本研究中，曠場試驗結果顯示，角調音樂干預4周后，高血壓肝火亢盛證大鼠的直立次數和曠場活動總距離與對照組大鼠比較均明顯減少(P<0.01)，穿格次數與對照組比較，差異無統計學意義(P>0.05)，干預4周后高血壓肝火亢盛證角音干預組與肝火亢盛證對照組比較其行為軌跡簡化，角音干預組大鼠行為軌跡逐漸轉變為周圍型，對照組大鼠行為軌跡無明顯變化。實驗結果表明，經角調音樂干預的大鼠情緒趨于緩和，煩躁焦慮出現減少，具體表現為與對照組比較直立次數和曠場活動總距離明顯減少，行為軌跡簡化。

頭暈目眩是高血壓患者的主要癥狀，依據高血壓病肝火亢盛證臨床證候診斷標準的等效轉化[6]，旋轉耐受時間是觀察SHR大鼠頭暈目眩的主要指標。本研究結果發現，高血壓肝火亢盛證角音干預組大鼠在干預后第1周2組之間比較，差異無統計學意義(P>0.05)，第2周至第4周旋轉耐受時間與對照組比較均明顯增加(P<0.05)，結果提示，經角調音樂干預一定的時間后能夠有效減輕高血壓肝火亢盛證大鼠的眩暈程度。

結合本研究結果及課題組前期研究結果高血壓肝火亢盛證—臨床癥狀與動物證候的等效轉換[6]提出以下觀點：1)角調音樂干預對改善高血壓肝火亢盛證大鼠的血壓、心率有顯著效果，可為用于臨床輔助控制和調節高血壓肝火亢盛證患者的血壓和心率提供參考；2)角調音樂干預對延長高血壓肝火亢盛證大鼠旋轉耐受時間效果顯著，可為用于臨床減輕高血壓肝火亢盛證患者的眩暈、頭痛癥狀提供參考；3)角調音樂干預對減少高血壓肝火亢盛證大鼠的礦場行為學直立次數及行為軌跡效果明顯，可為用于臨床改善高血壓肝火亢盛證患者的煩躁、焦慮程度提供參考。

綜上所述，角調音樂干預對調節高血壓肝火亢盛證大鼠的血壓、心率和改善其旋轉耐受程度、躁動不安有一定效果，但針對臨床上干預早期高血壓患者的血壓、心率、眩暈頭痛癥狀以及煩躁焦慮程度的具體療效有仍待于進一步的研究。此外，本研究僅探討了角調音樂干預對調節肝火亢盛證SHR大鼠的血壓及行為學的影響，證明了角調音樂對高血壓肝火亢盛證大鼠血壓心率及行為學有一定積極的影響，但對于角調音樂降低大鼠的血壓心率及對其行為學的影響機制尚不明確，課題組下一步擬對角調音樂降低血壓、心率及行為學變化的作用機制做進一步深入研究。