IL-8基因rs4073位點與新疆維吾爾族男性高尿酸血癥患者關聯性研究

張 蓓，陸 影，瑪伊娜·卡哈爾，迪麗達爾·庫德熱提，田 戈，宋睿睿，張曉波，楊珊珊，孫玉萍△

(新疆醫科大學：1.基礎醫學院；2.第一附屬醫院； 3.附屬中醫醫院/新疆呼吸病重點實驗室；4.研究生學院；5.第五附屬醫院檢驗科，新疆烏魯木齊 830011)

痛風是終生性疾病，高尿酸血癥期是痛風的前期，只有大概10%的高尿酸血癥患者會發展為痛風。白細胞介素-8(IL-8)作為重要的趨化因子與急性和慢性炎癥過程的起始和級聯放大效應有關，且已有研究證實，IL-8與痛風具有顯著的相關性[1-2]。IL-8的基因位于染色體4q13-q21，含4個外顯子、3個內含子和1個近側啟動區[3]。有研究表明，rs4073位點與IL-8的轉錄水平有關[4-8]。新疆是多民族聚居地區，不同的民族有其不同的遺傳背景，然而迄今為止，尚沒有研究對新疆維吾爾族高尿酸血癥與白介素基因多態性之間的關系進行探討，本研究對維吾爾族IL-8基因rs4073位點的基因多態性進行了檢測，并分析了與高尿酸血癥的關系，旨在探索高尿酸血癥患者急性痛風發作可能的遺傳標記物，為今后高尿酸血癥患者發展為痛風起到預警作用，并提供科學依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2012年2月至2013年9月新疆醫科大學第一附屬醫院、喀什第一人民醫院、吐魯番醫院、托里縣人民醫院體檢中心進行體檢的維吾爾族男性1 168例作為研究對象，年齡20～60歲，3代直系血親在采樣地區穩定居住20年以上，相互之間無血緣關系，其中健康維吾爾族男性594例(對照組)，高尿酸血癥維吾爾族男性574例(高尿酸血癥組)。要求所有研究對象自愿參加，并知情同意。高尿酸血癥診斷標準和相關定義[9]：空腹血清尿酸(SUA)超過417 μmol/L。排除標準：(1)任何可導致核酸代謝亢進的血液系統疾病，腫瘤放、化療后及藥物所致的尿酸升高的患者；(2)因嘌呤代謝酶導致的尿酸代謝缺陷，檢測尿液中的尿酸與肌酐比值等指標；(3)近期服用過易引起血尿酸水平上升的藥物(阿司匹林、噻嗪類利尿劑、吡嗪酰胺類藥物等)的患者。

1.2主要儀器與試劑 實時熒光定量PCR儀(美國伯樂BIO-RAD CFX96 touch)、核酸自動提取儀(北京百泰克生物有限公司)等。

1.3方法 采集研究對象清晨空腹靜脈血5 mL，其中2 mL置于無菌乙二胺四乙酸抗凝采血管中用于DNA的提取，分裝在2 mL的EP管中并置于-80 ℃冰箱保存備用。另外3 mL置于另一促凝管中用于生化指標的測定。Taqman探針和引物由生命技術公司合成。探針和引物合成及實時熒光定量PCR引物序列上游引物：5′TTATCTAGAAATAAAAAAGCATACA3′，下游引物：5′TTGATAATTCACCAAATTGTGGAGC3′，長度312 bp。均由美國Invitrogen公司合成。實時熒光定量PCR反應體系：DNA樣品為1 μL，Taqman探針為1 μL，PCRmix為5 μL，無DNase水3 μL，10 μL的終體積。反應循環體系：95 ℃、3 min，95 ℃、15 s，60 ℃、1 min，40個循環。

2 結 果

2.1IL-8基因rs4073位點的Hardy-Weinberg檢驗 利用擬和優度χ2檢驗分析對照組基因型頻數分布，SNPs位點基因型的頻數分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)，說明所選用的樣本具有群體代表性，均可用來作為遺傳標記分析IL-8基因與高尿酸血癥的關系。見表1。

表1 IL-8基因rs4073位點Hardy-Weinberg遺傳平衡 定律檢測(n=594)

2.2IL-8基因rs4073位點基因型與尿酸的關系 對照組該位點各基因型比較，差異無統計學意義(P>0.05)，高尿酸血癥組該位點各基因型TT>AA>AT，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.3兩組組研究對象IL-8基因rs4073位點分布頻率比較 高尿酸血癥組與對照組該位點AT基因頻率均最高，對照組AA型次之，TT型最低，高尿酸血癥組則TT型次之，AA型最低，兩組研究對象基因型頻率比較差異有統計學意義(P<0.05)；與野生型AA比較，TT基因型具有最高的高尿酸血癥發病風險(OR=1.61)，AT基因型則具有保護性(OR=0.814)。兩組研究對象等位基因頻率比較，差異有統計學意義(P<0.05)；A等位基因較T等位基因具有較高的高尿酸血癥發病危險(OR=1.309)。見表3。

表2 IL-8基因rs4073位點基因型與尿酸的關系

2.4IL-8基因rs4073位點基因型相關性分析 將logistic回歸模型分析結果中的危險因素作為協變量，進行基因模型分析做引入協變量前后對比，結果顯示，協變量調整后IL-8基因rs4073位點的相加模型TT基因型，隱性模型TT基因型較AA基因型患高尿酸血癥的風險增高(OR=1.610、1.832，95%CI：1.178～2.200、1.416～2.370，P<0.05)。見表4。

表3 兩組研究對象IL-8基因rs4073位點分布頻率比較

表4 基因型相關性分析

3 討 論

高尿酸血癥是痛風的前期，外界因素可誘發急性痛風性關節炎的發生。在歐美等西方發達國家，男性平均有1%～2%的人受到痛風的影響[9]。美國成年人高尿酸血癥和痛風患病率分別達21%、3.9%[10]。相關數據顯示，在我國，高尿酸血癥和痛風患病率也呈現上升趨勢。20世紀80年代痛風還屬少見疾病，而2006年對山東省沿海城市(青島、煙臺、威海、日照、東營)的調查發現，該區域20歲以上居民有13.19%的人血尿酸升高，1.14%被確診為痛風患者[11]。其他沿海及內陸一些城市也發現，成年人高尿酸血癥及痛風患病率呈類似的上升趨勢。除飲食結構和生活習慣外，基因因素也在高尿酸血癥和痛風的病理機制中具有重要作用。炎癥細胞因子具有多種生物學效應,是一類主要由免疫系統細胞生成的內源性多肽，亦可介導多種免疫反應。

本研究結果顯示，維吾爾族高尿酸血癥組患者IL-8基因rs4073位點各基因型TT>AA>AT，差異有統計學意義(P<0.05)。IL-8基因rs4073位點顯示，突變型基因罹患高尿酸血癥的風險大于野生型。T等位基因攜帶者罹患高尿酸血癥的危險是攜帶A等位基因的1.309倍。從生化指標和基因頻率分布可見，TT基因型尿酸值高于其他基因型，由此推測，T基因突變是維吾爾族高尿酸血癥的發病風險基因型。

IL-8作為一種重要的致炎性細胞因子，屬嗜中性粒細胞因子，具有對嗜中性粒細胞的趨化和激活作用，進而調節免疫炎性反應。IL-8屬調節炎癥的介質，在抗感染、炎癥和免疫過程具有重要的調節作用，與多種炎癥性疾病的發生、發展存在緊密聯系[12-15]。本研究結果顯示，IL-8基因rs4073位點的突變與尿酸值的增高和高尿酸血癥的發病風險具有密切的關系，推測該位點與由高尿酸血癥發展為痛風也具有密切的關系。

總之，高尿酸血癥是一種多基因疾病，其可誘發急性痛風性關節炎。高尿酸血癥期患者無明顯臨床癥狀，而一旦發展為痛風性關節炎便是終身疾病，急性發作期患者疼痛難忍，因此，篩查炎癥相關因子——IL-8 rs基因4073位點的基因多態性，找到高尿酸血癥發展為痛風的遺傳標志物，對今后可能發展為痛風的高尿酸血癥患者具有一定的預警和預防作用，因此，可在不同地域人群中進行類似研究，以消除地域偏倚，以便發現高尿酸血癥發展為痛風的遺傳標志物是勢在必行的。

4 結 論

維吾爾族高尿酸血癥組IL-8基因rs4073位點基因型分布頻率與對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)，攜帶IL-8基因rs4073位點TT基因型人群罹患高尿酸血癥的危險性增加，IL-8rs基因4073位點的基因多態性可作為高尿酸血癥患者遺傳標記物在不同地域人群中進行進一步研究。