普門電化學發光儀檢測降鈣素原的性能分析

陳繼德，汪志學

（重慶市璧山區人民醫院檢驗科，重慶402760）

降鈣素原（procalcitonin，PCT）是降鈣素的前肽物質，其為116個無激素活性氨基酸構成的糖蛋白，是近年來臨床日益重視的新型炎癥標志物之一［1］。相較于WBC、IL-6、CRP等感染監測指標，PCT擁有較高的靈敏度和特異性，可有效地區別細菌感染和病毒感染等其他炎癥過程，并可指導臨床上的抗菌藥物應用［2-4］。目前PCT的檢測方法很多，但普門eCL8000作為國內首款電化學發光儀，其分析性能如何尚不清楚。本研究為了解普門eCL8000電化學發光儀的性能，以PCT為檢測指標，從批內精密度、批間精密度、正確度（方法學比對）、線性范圍、生物參考區間等方面評價其在臨床應用方面的可行性與可靠性。

材料和方法

1 材料

收集本醫院門、急診和住院患者及健康體檢者的肝素抗凝樣本，3500r／min離心5min，分離血漿后-20℃保存備用。

2 儀器與試劑

深圳普門科技股份有限公司eCL8000電化學發光儀及其配套PCT試劑（批號為L0118001，有效期至20190415）。比對前做好項目校準，檢測期間做好室內質控。

3 方法

3.1 批內精密度和批間精密度 根據美國臨床和實驗室標準協會（CLSI）《EP5-A2定量測量方法的精密度性能評價——批準指南》文件要求，選取2個濃度水平的樣本分裝5管，每天解凍1管，連續5天檢測，每一樣本重復測試10次，計算標準差（SD）和偏倚（CV），判斷是否低于行業標準。

3.2 正確度（方法學比對） 根據CLSI《EP9-A2用患者樣本進行方法學比對及偏倚評估——批準指南》文件要求，先對實驗數據進行方法間離群值檢驗分析，再以羅氏電化學發光檢測系統Cobas e601為參考，用普門試劑與羅氏試劑分別檢測40例不同濃度的相同血清樣本PCT，樣本濃度覆蓋醫學決定水平，并盡可能在線性范圍內均勻分布，計算結果偏倚（Bias）與可接受標準的比較，并對兩方法進行線性擬合分析。

3.3 線性范圍 根據CLSI《EP 6-A定量測量方法的線性評價——統計方法》文件，用降鈣素原（PCT）試劑盒測試接近檢測上限的高值人血清樣本（H）與低值樣本（L），按H：L不同比例（1∶0、1∶4、2∶3、3∶2、4∶1、0∶1）混合成6個梯度濃度樣本，每個樣本重復測定3次，計算均值，再用平均斜率的方法驗證線性范圍。

3.4 生物參考區間 收集20份健康人的標本，用降鈣素原（PCT）試劑盒連續上機測定。根據CLSI C28-A3c《臨床實驗室如何定義、建立和驗證參考區間》方案，至少90%的檢測值在參考范圍內為合格。

4 統計學處理

本研究數據均用Microsoft Office Excel 2016軟件進行處理與分析。

結 果

1 批內精密度

通過對PCT 2個不同濃度水平樣本檢測后的不精密度CV值分析，參考《YY／T 1175-2010腫瘤標志物定量測定試劑（盒）（化學發光免疫分析法）》標準，以變異系數CV≤7.5%為判定標準。本研究結果顯示CV值均低于標準，提示批內精密度可以接受。結果如表1所示。

表1 2個濃度水平樣本檢測的批內精密度

2 批間精密度

根據CLSI《EP10-A2定量臨床試驗方法的初步檢驗批準指南》文件要求，以變異系數CV≤10.0%為判定標準。本研究結果顯示批間不精密度CV值均低于標準，提示批間精密度可以接受。結果如表2所示。

表2 2個濃度水平樣本檢測的批間精密度

3 正確度（方法學比對）

本研究共測試40例血清樣本，首先對實驗數據進行方法間離群值檢驗，經統計分析，本研究離群樣本0個，離群率0%。再以羅氏檢測系統測定濃度為橫坐標，以普門檢測系統測定濃度為縱坐標作散點圖，進行線性擬合，得到相關系數。本研究驗證結果為相關系數R2＝0.9977，斜率K＝1.0014，數據如下圖所示。以羅氏系統檢測結果為參考，計算普門儀器檢測結果的偏倚，結果如表3所示，最大偏倚為14.29%。美國CLIA′88《能力比對檢驗的分析質量要求》并沒有規定PCT的允許誤差（TEa），根據衛生部室間質評標準設定TEa＝30%，本實驗最大偏倚≤1／2TEa，提示正確度符合要求。

圖1 普門和羅氏系統檢測PCT結果比對分析

表3 羅氏e601與普門eCL8000檢測PCT結果比較

4 線性范圍

用降鈣素原（PCT）試劑盒測試接近檢測上限的高值人血清樣本與低值樣本，按要求混合成6個梯度濃度樣本并測試，結果顯示，線性相關系數R2＝0.9993，斜率K＝1.0131。線性相關系數R2、斜率均滿足實驗要求，如圖2所示。

圖2 PCT預期值與測量均值相關性分析

5 生物參考區間

本研究經測試20例健康人血清，其中20例測試值在0～0.05ng／mL范圍內，0例大于0.05ng／mL，有95%的測量值在參考范圍內，測試結果合格，廠家提供參考區間可接受。

討 論

臨床檢驗結果的質量與患者的診治及預后緊密相關，檢驗結果必須準確、可靠，否則會影響臨床醫生的判斷。而檢驗結果與其檢測系統有著密不可分的關系。根據《醫療機構臨床實驗室管理辦法》及ISO15189《醫學實驗室質量和能力認可準則》，在檢測系統應用臨床前，應評估所用方法和程序是否滿足臨床需要［5-6］。定量檢測分析是評價儀器工作性能的主要方式，是確保有效質量控制的前提。通過對精密度、準確度等性能特征的分析，不僅反映分析方法的性能，也反映了分析儀器的狀態、室內質控、操作規程及人員能力等影響檢測中質控要求的各因素。因此，判斷儀器性能是否可接受是臨床應用前必不可少的工作。

在臨床工作中，PCT常為急診檢驗項目，其濃度上升是細菌性炎癥和真菌感染的特異性指標，也是膿毒血癥的靈敏指標，PCT檢測結果能為臨床醫生及時提供是否使用抗菌藥物診斷依據［7］。為保證質量，本研究對普門檢測系統進行分析性能驗證，包括精密度、正確度、線性范圍、參考區間等，觀察其性能是否達到標準。

精密度既是臨床檢驗的方法評價，也是儀器性能評價的重要指標之一，能反映分析過程中隨機誤差的大?。?］。本研究結果顯示，不論是批內精密度還是批間精密度，其不精密度的CV值均低于標準，提示普門eCL8000符合實驗室要求。正確度指由測試結果與接受參照值間的一致程度。通常以偏倚來表示，偏倚小說明正確度高［9］。本研究結果顯示最大偏倚低于1／2TEa，且普門儀器檢驗結果與羅氏檢測系統結果的相關性非常高（R2＝0.9977），說明與羅氏檢測系統相比，普門儀器的結果能夠被臨床接受。但表3也呈現正偏倚數據較多（85%），提示檢測系統存在一定的系統誤差，可能是兩種不同檢測系統的差異造成的。線性范圍反映的是一種檢驗能力，在一定測量區間內可提供測量結果與樣本中測量物的量值直接成比例［10］。本研究中普門檢測系統對不同濃度樣本的檢測相關系數R2＝0.9993，表明檢測范圍內線性良好。生物參考區間又稱為參考范圍、正常范圍等，是參考值分布的中間95%區間，根據CLSI C28文件設計驗證方案，普門eCL8000發光儀有95%的測量值在參考范圍內，測試結果合格，說明本儀器檢測PCT的參考區間可接受。

總之，根據CLSI的各項文件要求來看，普門eCL8000電化學發光儀具有良好的精密度，與羅氏檢測系統相比，正確度能夠接受，線性范圍及參考區間等與均廠家提供的資料相一致，均達到廠家聲稱的性能標準，符合臨床質量要求。同時，普門eCL8000電化學發光儀操作簡單，能快速檢測PCT，可以滿足臨床早期診斷和及時判斷的需求。