基質金屬蛋白酶-2在非小細胞肺癌血清及組織中的表達

田鳳霞

（河北省灤州市人民醫院，河北 唐山）

0 引言

為更深入了解MMP-2在非小細胞肺癌（Non-small Cell Lung Cancer, NSCLC）的血清、組織當中的具體表達以及臨床引導價值[1]，通過不同手段對其進行檢測，通過歸納非小細胞肺癌患者的血清以及癌組織當中的MMP-2表達情況，分析該指標對于轉移評估、預后質量判斷的關聯性[2]，希望能為臨床收治非小細胞肺癌患者的治療方案制定提供可靠數據，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017～2019年在本院接受診治的非小細胞肺癌患者且符合選擇標準群體的為分析對象，在其中隨機抽取85例設為觀察組，該組所有患者均接受手術或者支氣管鏡確診病情，在本次研究前患者并無接受放療、化療、免疫治療等方案控制病情。納入患者中男女所占例數分別為69例、16例；年齡 43～80歲，平均（61.31±3.14）歲；腫瘤類型中鱗癌與腺癌例數分別為48例、37例；有64例患者出現淋巴結轉移情況。對患者應用1997年國際抗癌協會相關腫瘤臨床分期標準，如下：Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期例數對應為15例、29例、26例、15例。另隨機在同期就診確診為肺良性病變患者群體中抽取20例設為對照組，男女所占例數分別為15例、5例；年齡42～79歲，平均（60.57±2.77）歲。兩組患者在性別、年齡等基本數據分布方面經統計學軟件處理后提示并無顯著差異（P＞0.05），可做對比。

1.2 方法

所有研究對象受檢前10～12 h禁食，術前1 d、術后10 d于清晨空腹狀態下抽取肘靜脈血量為3 mL，用3000 r/min速度做離心處理，時間為10 min，分離所得新鮮血清并放置于-80 ℃環境中保存備用。

本次研究所用主要試劑如下：MMP-2ELISA試劑盒、鼠抗人MMP-2單克隆抗體，相關免疫組化試劑盒。

實驗操作方法具體如下：分別在觀察組患者手術治療前后對其血清當中的MMP-2指標進行檢測，根據試劑盒說明說嚴格操作ELISA檢驗法。完成血清的收集后在96孔板當中加入稀釋液，加樣，孵化，時間為2 h，使用緩沖液清洗后加入MMP-2結合物，再加入底物以及終止液，應用酶標儀檢測并記錄相關數據[3]。

將兩組患者的手術切除病理組織使用石蠟包埋塊，常規完成脫蠟以及水化處理，加入3%雙氧水后微波抗原修復，10%正常羊血清封閉[4]。滴入比例為1:200的MMP-2抗體，放置于4 ℃環境中過夜，再滴加辣根過氧化酶標記兔抗鼠IgG，放置在37 ℃環境中1 h，輔以DAB達到顯色效果，然后對其應用蘇木素復染，透明樹膠封片，陰性對照物使用PBS代替，對照片進行同步操作以得到陽性。

1.3 免疫組化判斷依據

MMP-2陽性細胞標準：腫瘤細胞膜或者是胞漿經復染后成為了棕黃色，使用高倍鏡輔助所得視野之下對4個不同的視野進行觀察，在所有視野當中對200個細胞進行計數觀察，其中判定依據如下：（-）為無存在陽性細胞，（+）提示陽性細胞所占比例不足30%，（++）提示陽性細胞所占比例在30%～50%，（+++）提示陽性細胞所占比例超過50%，其中（++）、（+++）為陽性表達[5]。

1.4 統計學方法

采用統計學軟件SPSS 20.0處理此次研究數據，計數資料由卡方檢驗，輸出顯示為（%）；計量資料使用t檢驗，以（±s）的形式描述，P＜0.05說明計數/計量數據間差異大，有統計學意義。

2 結果

2.1 血清中MMP-2表達情況

術前觀察組患者血清MMP-2檢測所得數據顯著高于對照組，術后觀察組患者血清MMP-2檢測所得數據與對照組無明顯差異，詳情請見表1。

表1 兩組納入研究對象患者血清MMP-2指標比較（±s, ng/mL）

表1 兩組納入研究對象患者血清MMP-2指標比較（±s, ng/mL）

組別 例數 水平指標對照組 20 242.15±30.44觀察組術前 85 529.24±57.15觀察組術后 85 260.44±24.22

2.2 基線數據對MMP-2表達影響

觀察組患者的腫瘤直徑、腫瘤類型、腫瘤分期、淋巴結是否出現轉移等對MMP-2有明顯影響，詳情請見表2。

表2 非小細胞癌患者基線數據與MMP-2表達情況比較（±s, ng/mL）

表2 非小細胞癌患者基線數據與MMP-2表達情況比較（±s, ng/mL）

項目 例數 MMP-2性別 男 69 529.32±59.41女16 528.88±47.87年齡（歲） ≤50 32 539.31±60.51＞50 53 523.14±54.73腫瘤直徑（cm） ≤3 61 514.24±55.14＞3 24 567.34±43.45病理類型 鱗癌 48 515.82±58.83腺癌 37 550.48±47.80分化程度 高-中 63 532.32±55.34低22 520.31±62.62腫瘤分期 Ⅰ～Ⅱ 44 515.11±55.57Ⅲ～Ⅳ 41 545.10±55.35是否有淋巴結轉移 - 21 484.24±41.64+64 543.98±53.95

2.3 血清MMP-2余癌組織MMP-2蛋白表達關聯性

MMP-2蛋白陽性表達受到腫瘤直徑、腫瘤類型、臨床分期、淋巴結是否轉移等有關聯，詳情請見表3。

表3 非小細胞癌患者MMP-2指標與病理參數關聯性（n）

2.4 血清MMP-2與癌組織表達關系

觀察組患者MMP-2蛋白陽性表達群體，自身血清MMP-2指標（560.36±45.04）ng/mL，顯著高于組內陰性表達群體（490.71±46.27）ng/mL，差異有統計學意義（P＜0.05）。

3 討論

在全球各種惡性腫瘤疾病當中，肺癌無論是發病率還是致死率均居于首位，大部分的肺癌患者死因為腫瘤轉移、浸潤等影響[6]，腫瘤轉移是一個復雜過程，需要考慮到多種步驟和因素，基質金屬蛋白酶（Matrix Metalloproteinases, MMPs）屬于細胞外蛋白水解酶，其作用在于能夠將幾乎所有細胞外基質當中的相關蛋白成分進行降解。

肺癌在當前臨床收治各類惡性腫瘤疾病中，其發病率、致死率均相對偏高，肺癌對患者的致死威脅大部分為腫瘤轉移、浸潤等變化，腫瘤轉移涉及到復雜的生理變化，其中有多種步驟、因素影響，基質金屬蛋白酶（Matrix Metalloprotei-nases, MMPs）為細胞外蛋白水解酶，能夠將大部分存在于細胞外基質的蛋白成分降解?；|金屬蛋白酶-2（Matrix Metalloproteinase-2, MMP-2）是其中的一個重要家庭成員，在基底膜降解、加快新生血管形成當中扮演重要角色，在腫瘤細胞的浸潤以及遷移中也發揮著不可忽視的作用[7]。

在本次研究中通過不同檢查手段檢測MMP-2指標于非小細胞癌患者中的血清還有癌組織表達關系，在所得數據當中可知此類患者血清MMP-2數據顯著高于肺部良性病變群體，在手術治療后指標明顯下降且與對照組數據無顯著差異，提示了該指標可作為判斷療效的一個標準。兩種檢測所得數據基本一致。MMP-2蛋白表達受到了腫瘤體積、病理類型、腫瘤分期以及淋巴結轉移等因素影響，提示可將其作為評估腫瘤惡性進展的重要標志物[8]。

綜上所述，為非小細胞肺癌患者進行MMP-2檢測，在血清中與癌組織當中蛋白表達數據無顯著差異，可將MMP-2指標作為判斷腫瘤浸潤、轉移的一個重要指標，為患者治療方案制定與調整做引導。