薏苡仁油軟膠囊對移植于裸鼠的人體肝癌HepG2的抑制作用

李翔 李大鵬 潘綿立 沈龍海 李炳生

摘要：目的研究薏苡仁油軟膠囊單用及合并索拉菲尼對移植于裸鼠的人體肝癌HepG2的抑制作用。方法制備移植于裸鼠的人體肝癌HepG2模型，分別按計劃方案給藥，動態觀察和測量腫瘤大小及荷瘤鼠體重，按金氏公式計算腫瘤抑制率及相對腫瘤增長率。結果單用薏苡仁油軟膠囊三個劑量組對移植于裸鼠的人體肝癌HepG2抑瘤率分別為45.67%、40.07%、37.20%，薏苡仁油軟膠囊（三個劑量）合并索拉菲尼對應抑瘤率分別為52.33%、49.20%、46.80%。結論在本實驗條件下，單用薏苡仁油軟膠囊三個劑量組對移植于裸鼠的人體肝癌腫瘤細胞具有很好的抑制作用，合并索拉菲尼具有明顯相加作用。

關鍵詞：薏苡仁油軟膠囊;裸鼠;肝癌HepG2;金氏公式

薏苡仁油注射液（商品名：康萊特注射液）是中國工程院院士李大鵬教授研制開發的中藥二類抗腫瘤藥物，是從禾本科植物薏苡仁中提取天然有效抗癌活性物質薏苡仁油制備而成的脂肪乳劑，大量臨床研究已證實其具有明顯的廣譜抗腫瘤作用[1-3]。薏苡仁油軟膠囊是在該注射液產品基礎上對劑型進行改進后開發而成的口服制劑，相對于注射劑型，更方便患者服用，主要用于原發性非小細胞肺癌的治療。索拉菲尼（如多吉美）為當前臨床廣泛應用的用于治療無法手術或遠端轉移肝細胞癌（HCC）的一線靶向藥物，然而該藥在肝癌治療中存在的原發性或獲得性耐藥情況愈發突出，影響了肝癌的療效[4]，如何有效應對此類疾病一線藥物耐藥后的治療選擇，逐漸成為熱點問題。鑒于前述薏苡仁油乳劑的廣譜抗癌作用，筆者進行了薏苡仁油軟膠囊單用及合并索拉菲尼對移植于裸鼠的人體肝癌HepG2的抑制作用實驗，初步探索薏苡仁油軟膠囊單用及聯合索拉非尼治療肝癌的效果，為緩解索拉菲尼耐藥問題提供新的思路與依據。

1.??? 實驗材料

1.1? 實驗藥物

薏苡仁油軟膠囊（含薏苡仁油99.5%，維生素E0.5%）（浙江康萊特藥業有限公司，薏苡仁油軟膠囊原液直接灌胃使用）;多吉美（甲苯磺酸索拉菲尼，拜耳醫藥）;生理鹽水。

1.2? 實驗動物

BALB/C裸鼠（SPF級），上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，動物合格證號：SCXK（滬）20121-0002。

1.3? 瘤源

人體腫瘤肝癌HepG2由上海醫藥工業研究院藥理室傳代。

2.??? 實驗方法

取液氮凍人體腫瘤肝癌HepG2細胞株，復蘇后，置37℃、5%CO2條件下培養。經傳代培養后，取對數生長期的細胞，用生理鹽水制備成（1-2）×106細胞·mL·1濃度的細胞懸液，接種于裸鼠右腋皮下。待腫瘤生長至1g以上時，無菌條件下取體內生長旺盛的人體腫瘤肝癌HepG2第 2代異種移植模型的腫瘤組織，切割成1～2mm3大小的均勻小塊，用套管針于每只裸小鼠右腋皮下接種一塊。待接種腫瘤被觸及后，隨機分組，按實驗設計方案給藥，見表1。

所應用的飼料、墊料、籠具及接觸的器械等均應高壓消毒后使用，裸鼠置于層流架中SPF條件飼養，動態觀察和測量腫瘤大小及荷瘤鼠體重，每 5d用卡尺測量各裸鼠腫瘤的短徑（a）及長徑（b），按（a2×b）/2公式計算腫瘤體積。根據測量計算的腫瘤體積計算出相對腫瘤體積（RTV），RTV=Vt/V0。其中V0為隨機分組（即d0）時的腫瘤體積，Vt為每一次測量（即dn）時的腫瘤體積。四周左右處死各組動物，剖取腫瘤稱重，按下列公式計算腫瘤抑制率及相對腫瘤增長率。

腫瘤抑制率%=[（對照組平均瘤重- 給藥組平均瘤重）/對照組平均瘤重]×100%

相對腫瘤增殖率%=（給藥組RTV/對照組RTV）×100%

合并用藥的效應根據金氏公式計算Q值：

Q=Ea+b/（Ea+Eb-Ea×Eb）

Ea+b為合并用藥的抑瘤率，Ea和Eb分別為A藥和B藥的抑瘤率。如Q值0.85-1.15為相加（+），﹥1.15為增強（++）。

3.??? 實驗結果：

按照實驗方法操作，實驗結果見表1 及表2。

根據金氏公式計算Q值，結果顯示薏苡仁油軟膠囊聯合索拉菲尼具有相加作用：

薏苡仁油軟膠囊10mL·kg-1合并索拉菲尼100mg·kg-1，Q值0.8805（+）。

薏苡仁油軟膠囊5mL·kg-1合并索拉菲尼100mg·kg-1，Q值0.8905（+）。

薏苡仁油軟膠囊2.5mL·kg-1合并索拉菲尼100mg·kg-1，Q值0.8812（+）。

4.??? 實驗結論

薏苡仁油軟膠囊劑量10，5，2.5mL·kg-1， 按照連續灌胃給藥14d，1次·d-1的方案單獨給藥，對移植于裸鼠的人體肝癌HepG2的生長有明顯抑制作用。

薏苡仁油軟膠囊劑量10，5，2.5mL·kg-1，分別合并索拉菲尼100mg·kg-1，對移植于裸鼠的人體肝癌HepG2的抑瘤作用明顯強于薏苡仁油軟膠囊或索拉菲尼單獨給藥，兩藥合并有明顯的相加作用。

5.??? 討論

肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，據國家癌癥中心2015年惡性腫瘤流行病學估算結果顯示，肝癌當年新發病例約37萬，居惡性腫瘤第4 位，死亡約32.6萬，居惡性腫瘤第2 位。2015年肝癌發病率位居男性第3 位，女性第7 位;死亡率居男性第2 位，女性第3 位[5]。而據全球癌癥負擔估計結果顯示，在全球185個國家或地區中，中國的惡性腫瘤發病、死亡位居中等偏上水平，其中如食管癌、胃癌、肝癌等惡性腫瘤的發病和死亡約占全球的一半[6]，整體防控形勢嚴峻。

對于晚期肝癌病人，有效的系統治療可減輕腫瘤負荷，改善腫瘤相關癥狀，提高生活質量，延長生存時間。多激酶抑制劑索拉非尼是被美國食品藥品監督管理局批準的用于治療晚期肝癌的一線分子靶向藥物。國家衛健委頒布的原發性肝癌診療規范（2019年版）及CSCO發布的原發性肝癌治療指南（2018年版）均將索拉非尼推薦為晚期HCC的一線治療藥物[7，8]。多項臨床研究表明，索拉非尼對不同國家地區、不同肝病背景的晚期肝癌病人都具有一定的生存獲益[9]。而相對于肝功能Child-Pugh B級，Child-Pugh A級的病人生存獲益更明顯[10]。然而，部分HCC對其耐藥性的出現影響了總體療效，耐藥分為原發性（HCC原本就對索拉非尼缺乏敏感性）和獲得性（開始敏感，治療過程中出現耐藥）兩類，相關機制研究尚未達成統一認識[11]。如何有效應對此類疾病一線療法耐藥后的治療方式選擇，成為一線臨床醫生所面臨的新問題，形成了新的臨床需求。

HepG2是肝癌藥效學實驗中常用瘤株。從本次實驗結果看，薏苡仁油軟膠囊不僅單用可明顯抑制其生長，合并索拉非尼更具有明顯相加作用。此外，薏苡仁油軟膠囊還具有增強免疫、降低化療藥物不良反應的效果，其原料薏苡仁屬藥食同源，在中國已有上千年應用歷史，多年臨床經驗亦證實其安全性良好。綜上所述，薏苡仁油軟膠囊對于提高晚期HCC的治療水平具有較大潛力，有望成為晚期HCC患者另一治療用藥選擇，值得進一步臨床研究與探討。

參考文獻：

[1] 李大鵬.康萊特抗腫瘤研究論文集[M].杭州：浙江大學出版社，1998.

[2] 李炳生，陳秀華，任文龍等.康萊特注射液的抗腫瘤作用[J].中國醫藥工業雜志，1998，29（10）：456-458.

[3] 周萌，王瑞，米田.康萊特注射液在惡性腫瘤綜合治療中的應用效果[J].臨床醫學研究與實踐，2019（26）：43-44.

[4] 高彥君，姚頤，宋啟斌等.原發性肝癌索拉非尼耐藥機制的研究進展[J].腫瘤學雜志，2019（09）：836-840.

[5] 鄭榮壽，孫可欣，赫捷等.2015年中國惡性腫瘤流行情況分析[J].中華腫瘤雜志，2019，41（1）：19-28.

[6] Bray F，Ferlay J，，et al.Global cancer statistics，2018：GLOBOCAN esti-mates of incidence and mortality worldwide for36cancers in185countries[J].CA Cancer J Clin，2018，68（6）：394-424.

[7] 中華人民共和國衛生健康委員會.原發性肝癌診療規范（2019年版），中國實用外科雜志，2020（02）：11-138.

[8] CSCO指南工作委員會.原發性肝癌診療指南（2018.V1）[M].北京：人民衛生出社，2018.

[9] Llovet JM，Ricci S，et al.Sorafenib in advanced hepatocellular carcinoma[J].N Engl J Med，2008，359（4）：378-90.

[10] Pressiani T，Boni C，et al.Sorafenib in patients with Child-Pugh class A and B advanced hepatocellular carcinoma：a prospective feasibility analysis[J].Ann Oncol，2013，24（2）：406-11.

[11] 胡倍源，覃偉，董瓊珠，欽倫秀.肝細胞癌（HCC）對索拉非尼耐藥相關機制的研究進展[J].復旦學報（醫學版），2018（06）：884-888.