Sysmex CA 7000和CA 1500全自動血凝儀性能評價及實驗室比對

曹 坤，謝 楠，劉麗萍，鄭大偉，王松松,高 選

山東大學生殖醫學研究中心/國家輔助生殖與優生工程技術研究中心/生殖內分泌教育部重點實驗室(山東大學)，山東濟南 250001

隨著高新技術的發展,醫學檢驗技術和醫學檢驗儀器不斷更新,臨床檢驗工作已從以手工為主逐步向自動化發展。只有檢測系統的分析性能符合臨床使用要求,才可以將檢測系統用于臨床。穩定的檢測系統必須保證其誤差在臨床可接受范圍之內,這是保障檢驗結果質量的前提。目前,臨床實驗室對凝血常規指標的檢測仍然是通過全自動血凝儀進行，為了保證檢測結果的準確性，依據《臨床檢驗方法確認與性能評價》[1]、WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》及WS/T 407-2012《醫療機構內定量檢驗結果的可比性驗證指南》的相關要求，本研究對本實驗室內Sysmex CA 7000全自動血凝儀(下稱Sysmex CA 7000)和Sysmex CA 1500全自動血凝儀(下稱CA 1500)的批內精密度、日間精密度、線性驗證、臨床可報告范圍、準確性及正確度等性能指標評價，為保障儀器間結果的一致性，進行2套檢測系統間實驗室比對，以便對使用的檢測系統做全面評估。

1 材料與方法

1.1標本來源

1.1.1批內精密度試驗 血漿為本實驗室兩種水平(正常、中度異常)的臨床標本。

1.1.2日間精密度試驗 凝血4項檢測使用正常質控血漿Dade Control 1(批號：548060)和異常質控血漿 Dade Control 2(批號：548274)，D-二聚體(D-D)檢測使用質控血漿INNOVANCE D-Dimer Controls(批號：47275)。

1.1.3CA 7000和CA 1500準確性驗證試驗 試驗血漿分別為2018年衛生和計劃生育委員會臨床檢驗中心第1次室間質量評價用血漿和2018年山東省臨床檢驗中心第2次室間質量評價用血漿。

1.1.4正確度驗證試驗 試驗血漿為檢測結果在參考區間內的臨床標本，線性驗證和臨床可報告范圍驗證試驗血漿為高值血漿標本。上述血漿標本處理用0.109 mmol/L枸櫞酸鈉1∶9抗凝 ，1 500×g離心力離心15 min。

1.2儀器與試劑 試驗前分別對CA 7000和CA 1500 2套檢測系統進行校準。試劑、校準品、質控品為CA 7000和CA 1500配套產品。

1.3方法與判定標準

1.3.1批內精密度驗證 根據美國臨床和實驗室標準協會(CLSI)EP15-A2文件[2]選取兩種水平(正常、中度異常)的臨床標本(枸櫞酸鈉抗凝血漿)，按常規方法分別在CA 7000和CA 1500上連續檢測11次，計算后10次檢測結果的算術平均值和標準差，計算變異系數(CV)，纖維蛋白原(FIB)異常標本的水平要求>6.0 g/L或<1.5 g/L,凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、FIB、D-D 的CV要求見表1。

表1 批內精密度驗證各項目CV要求(%)

1.3.2日間精密度驗證 使用兩種水平(正常、異常)的質控品，按常規方法分別在CA 7000和CA 1500上檢測，連續測定20 d，每天一次，計算在控數據的CV,各項目CV要求見表2。

表2 日間精密度驗證各項目CV要求(%)

1.3.3線性驗證 選取1份接近預期上限的高濃度血漿(H)，按常規方法分別在CA 7000和CA 1500上檢測，按照80%、60%、40%、20%、10%的比例進行稀釋，每種稀釋度重復測定2次，計算均值，將實測值與理論值進行比較，計算Y=aX+b，驗證線性范圍，要求r≥0.975，a=1.00±0.05。

1.3.4臨床可報告范圍 選取1份接近預期上限的高濃度血漿(H)，按照1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128……的比例進行稀釋，每種稀釋度重復測定2次，將2次實測結果的均值與理論值進行比較得出R，R在0.8～1.2的最大稀釋度為可報告范圍。

1.3.5準確性驗證 使用5份質評物進行單次檢測，計算每份標本檢測結果與靶值的相對偏差，每個項目的相對偏差符合要求的比例應≥80%。

1.3.6正確度驗證 使用10份檢測結果在參考區間范圍內的臨床標本，每份標本檢測2次，計算20次檢測結果的均值，以參加原中華人民共和國衛生部室間質量評價并且結果合格的CA 7000為靶機，以其檢測均值為標準，計算偏倚。WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》只對FIB進行要求，故本實驗室只對FIB進行驗證，要求偏倚≤10%。

1.3.72套系統間實驗室數據比對 CLSI EP9-A2[3]文件提供的方法，每個項目的檢測選擇30份標本，其中包含正常、異常結果的標本，均無重度黃疸、脂血和溶血的標本。PT、APTT、FIB、TT、D-D這5個項目在2套檢測系統上同時測定。把CA 7000檢測值作為參考，進行2套檢測系統臨床可接受性判斷，偏倚必須符合CLIA′88規定的允許誤差的1/2(PT、APTT≤7.5%,TT、FIB、D-D≤10%)，偏倚符合標準比率≥80%，最后對檢測結果計算r、回歸方程，觀察各檢測結果間差異有無統計學意義。

2 結 果

2.1批內精密度 CA7000和CA1500所測得的正常標本和異常標本的PT、APTT、FIB的批內精密度結果均符合WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》。其他項目正常標本和異常標本的檢測結果均在廠家標識的要求范圍內，驗證通過，見表3。

表3 CA 7000和CA 1500批內精密度試驗結果

2.2日間精密度 CA 7000和CA 1500所測得的正常標本和異常標本的PT、APTT、FIB的日間精密度結果均符合WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》。其他項目正常標本和異常標本的檢測結果均在廠家標識的要求范圍內，驗證通過，見表4。

表4 CA 7000與CA 1500日間精密度試驗結果

2.3線性驗證 CA 7000和CA 1500檢測FIB和D-D時按照比例稀釋進行線性驗證，線性驗證得出的a及r結果均滿足要求，驗證合格，見表5。

表5 CA 7000和CA 1500儀器線性驗證結果

2.4臨床可報告范圍 CA 7000和CA 1500檢測FIB和D-D時按照倍比稀釋，2套檢測系統的FIB和D-D最大稀釋倍數分別為16倍和32 倍，均具有較寬的臨床可報告范圍，見表6。

表6 CA 7000和CA 1500臨床可報告范圍試驗結果

2.5準確性驗證 CA7000和CA1500檢測質評物的結果均在允許范圍內，CA7000參加2018年衛生和計劃生育委員會臨床檢驗中心第1次室間質量評價、CA1500參加2018年山東省臨床檢驗中心第2次室間質量評價均滿分通過，驗證通過。見表7。

表7 CA 7000和CA 1500準確性驗證偏倚結果(%)

2.6正確度驗證 本實驗室按照《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》對FIB進行正確度驗證，2套檢測系統間的偏倚符合文件要求， 見表8。

表8 CA 7000和CA 1500檢測FIB正確度驗證試驗結果

2.7系統間實驗室數據比對 2套檢測系統相同標本相同項目檢測結果比較分析，以CA 7000為參考， CA 1500的檢測結果與CA 7000的檢測結果進行比較，偏倚在1/2CLIA′88 TEa范圍內的比例均≥80%。2套檢測系統回歸方程的r2結果均>0.95，比對結果相關性良好，檢測結果間差異無統計學意義(P>0.05)，見表9、表10。

表9 CA 7000和CA 1500系統間實驗室數據比對結果

表10 CA 7000和CA 1500 2套檢測系統檢測結果

3 討 論

隨著凝血常規檢測標本的日益增加及臨床對凝血項目檢測的需求，檢測速度快的全自動血凝儀成為大部分臨床檢驗實驗室的首選。凝血4項和D-D檢測作為實驗室的常規檢測項目，在止凝血、抗凝治療、溶栓治療和止血及血栓疾病的診斷和治療中可提供可靠的檢測依據，因此，儀器的穩定及檢測結果的準確就顯得尤為重要[4-5]。本實驗室同時配備CA 1500和CA 7000這2臺全自動血凝儀，2套檢測系統使用的都是原產公司的質控品和試劑，既能滿足常規檢測的要求，又可以保證實驗室急診項目標本周轉時間。

為了保證實驗室結果的可靠性，在保證CA 1500和CA 7000 2套檢測系統定期維護及定期校準的前提下，本實驗室按照原中華人民共和國衛生部頒布的《醫療機構臨床實驗室管理辦法》和ISO15189的要求[6]，對2套檢測系統同時進行性能評價，并進行了2套檢測系統之間的實驗室比對。

性能評價驗證結果表明，CA 7000批內精密度為0.76%～4.34%，日間精密度為1.99%～6.04%，CA 1500批內精密度為0.80%～5.04%，日間精密度為3.61%～9.68%，2套檢測系統各個項目的批內精密度和日間精密度均在WS/T 406-2012《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》的最小允許范圍內。實驗數據也顯示，較先進的CA 7000批內精密度和日間精密度明顯優于CA 1500。2套檢測系統均進行了FIB和D-D 2個項目的線性范圍驗證，2套檢測系統r≥0.975，a均在1.00±0.05范圍內，線性評價良好。在臨床可報告范圍性能評價中，選取本實驗室1份接近預期上限的高濃度血漿，進行比例稀釋后分別進行了FIB和D-D檢測，結果表明， CA 1500和CA 7000 2套檢測系統均具有較寬的臨床可報告范圍，可以同時滿足臨床檢測需求。分析FIB檢測數據，認為依據《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》，2套檢測系統的正確度評價合格。在準確性性能評價中，CA 7000和CA 1500 2套檢測系統分別參加2018年衛生和計劃生育委員會和山東省臨床檢驗中心凝血試驗室間質量評價，均滿分通過，PT、APTT、FIB、TT 4個項目的偏倚系數也均在廠家要求的范圍內，說明2套檢測系統準確性良好。本實驗室準確性性能評價采用的是參加室間質量評價的結果數據，室間質量評價的標本靶值是通過不同實驗室使用同一儀器同一方法，剔除離群值后獲得的所有結果的平均值，通過本方法進行準確性性能評價更容易識別實驗室存在的問題，即識別系統誤差，然后制訂相應的預防及補救措施。借助室間質量評價來進行準確性評價，不僅方便，而且可以對檢測方法的有效性和可比性進行相應監控。

對于同一實驗室用2套及以上檢測系統檢測同一項目時，為保證檢測結果的穩定性和持續一致性，ISO15189準則要求，實驗室必須定期進行同一檢測項目不同檢測系統之間的結果比對，這也是實現實驗室間結果互認的保障。實驗室內或實驗室間不同檢測系統相同檢測項目檢驗結果的互認，既可以節約醫療資源，又可以便利患者的就醫行為，目前已成為醫療發展的趨勢。有學者認為，可以用新鮮血漿對不同血凝儀進行比對，采用偏倚≤1/2 CLIA′88規定的允許總誤差作為不同檢測系統之間檢測結果可比性及臨床可接受性的判斷標準[7-11]，依據此標準，本實驗室CA 7000和CA 1500 2套檢測系統間實驗室數據比對偏倚符合標準數≥80%，且檢測結果相關性好，由此證明2套檢測系統間檢測結果具有較好的可比性。

綜上所述，本實驗室CA 1500和CA 7000 2套檢測系統均具有良好的批內精密度、日間精密度、準確性、正確度，線性范圍和臨床可報告范圍滿足臨床需求[12]，而且2套檢測系統間的數據一致性高，具有良好的可比性[13]，均符合ISO15189標準化實驗室的質量管理要求，2套檢測系統均能滿足實驗室檢測的要求。