東北野生軟棗獼猴桃組織培養試驗

白 鵬，韓宏義，趙慧穎，鄭 靜

（遼寧省丹東農業科學院，遼寧 丹東 118100）

軟棗獼猴桃（Actinidia arguta）別名軟棗子，有“水果之王”的美譽，維生素C 含量高達450 mg/100 g，是蘋果、梨的80～100 倍，柑橘的5～10 倍；還含有氨基酸、類胡蘿卜素及鎂、鐵、鉀、鈉等多種營養成分。軟棗獼猴桃處于開發階段，目前在東北的栽培面積較小，大部分處于野生狀態，面臨著資源枯竭等問題。利用植物組織培養對其進行快速繁殖，有利于優秀野生資源的保存和大規模繁殖推廣，還可以進行組培脫毒，具有很高的經濟價值。

本試驗利用野生獼猴桃的嫩莖段誘導成芽，再由芽產生重生芽，進而培育植株，以期建立野生軟棗獼猴桃的組織快繁體系，為野生軟棗獼猴桃的大規模繁殖提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗時間、地點

試驗于2013 年在丹東農業科學院生物技術中心的植物組織培養實驗室進行。

1.2 試驗材料

選擇長勢旺盛、無病蟲害的健壯植株，采取帶嫩芽的莖段作為試驗外植體。6-BA、赤霉素、NAA、IBA、蔗糖、瓊脂等材料由實驗室統一提供。

1.3 試驗方法

1.3.1 材料消毒。選擇新發無病枝條，去葉后用軟刷刷去莖段表面塵土，剪成帶有2～3 個嫩芽的小段，用飽和潔爾滅溶液浸泡10 min 后，用流水沖洗30 min，然后用75%酒精滅菌30 s，無菌水快速沖洗4～5 次，再用0.1%氯化汞滅菌6 min，無菌水沖洗3 次，最后用無菌剪刀修剪莖段兩端后放入培養基中[1]。

1.3.2 培養基及培養條件。以MS 為基本培養基，添加不同濃度的6-芐氨基嘌呤（6-BA）、赤霉素（GA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA），詳見表1、表2、表3、表4。蔗糖用量為30 g/L，瓊脂用量為4.9 g/L[2]。

培養溫度24±2℃，每日光照14 h，光照強度2200 lx[3]。

1.3.3 培養方法

1.3.3.1 誘導培養。將滅好菌的莖段接種于以MS 為基本培養基附加不同濃度6-BA、GA、NAA 的培養基中，詳見表1，每瓶3 點，接種10 瓶。

1.3.3.2 繼代培養。將誘導后的小芽接種于以MS 為基本培養基附加不同濃度6-BA、GA 的培養基中，詳見表2，每瓶3 點，接種10 瓶。

1.3.3.3 壯苗培養。將繼代培養后的小苗接種于以MS 為基本培養基附加不同濃度6-BA、GA、NAA 的培養基中，每瓶3 點，接種10 瓶，詳見表3。

1.3.3.4 生根培養。將經過壯苗培養的組培苗接種于以MS為基本培養基附加不同濃度IBA、NAA 的培養基中，每瓶3 點，接種10 瓶，詳見表4[4]。

1.4 測定內容

接種4～5 天后觀察記錄誘導成芽數，計算發芽率。繼代培養接種1 周后，觀察記錄重生芽數量，計算增值系數。壯苗培養接種后觀察記錄幼苗生長情況。生根培養接種5 天后，觀察并記錄組培苗生根數，計算生根率。

2 試驗結果與分析

2.1 不同激素組合對誘導成芽的影響

在接種4～5 天后，莖段上有小芽長出，由表1 可以看出，培養基MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.05 mg/L 培養效果最佳。培養過程中沒有出現褐化，誘導30 天后可進行繼代培養。

表1 不同激素組合對誘導成芽的影響

2.2 不同激素濃度對繼代培養的影響

接種1 周后，小芽明顯生長，20 天后可以出現重生芽。由表2 可以看出，培養基MS+6-BA1.0 mg/L 效果最佳，重生芽數量明顯多于其他幾種組合。培養過程中沒有玻璃化現象，大概20 天左右可進行1 次繼代培養。

表2 不同激素濃度對繼代的影響

2.3 不同激素組合對壯苗培養的影響

接種10 天后，可長至2 cm 左右，30 天后可長至5 cm 以上，且苗較粗壯，可進行生根培養。由表3 可以看出，培養基MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.02 mg/L 組培苗生長最佳。

表3 不同激素組合對壯苗培養的影響

2.4 不同激素濃度對生根的影響

接種5 天后，可以看見苗的底部出現小白點，10 天左右有根長出。由表4 可看出，不加任何激素的培養基MS 生根效果最好。25 天左右根系長度可達到移栽標準，可進行煉苗移栽。

表4 不同激素濃度對生根的影響

煉苗移栽時將組培瓶移至煉苗室放置1～2 天后打開瓶蓋，去蓋后放置5～7 天，然后將組培苗栽植在溫室苗床上[5]。苗床配比為草炭土：園土：細砂=7：2：1。室內溫度不能超過28℃，前期注意遮陽保水[6]。

3 結論與討論

3.1 組培中褐化產生原因及解決措施

組培中出現苗木褐化問題可能是滅菌過程中酒精或氯化汞的使用時間過長；光照溫度對褐變影響也較大，溫度高光照強易產生褐變。產生褐變問題可適當降低培養溫度，遮光或暗培養一段時間；或進行連續移瓶，也可有效減輕組培苗褐化[7]。

3.2 組培中玻璃化產生原因及解決措施

組培中出現苗木玻璃化問題可能是由于培養中激素濃度高，導致苗增殖過快，培養基中吸收養分不足，且吸收大量水分，從而造成玻璃化問題。溫度變化對苗木的玻璃化影響較大，溫度變化較大時，組培瓶壁上產生大量水珠；另外，消毒方法、光照等也對苗木玻璃化有一定影響[8]。

3.3 苗木移栽成活率低原因及解決措施

煉苗時間過短，移栽到溫室后遮陽保濕不佳，是造成移栽后成活率低的主要原因。煉苗時間不應低于5 天，移栽后應保證遮陽保濕15～20 天，移栽苗完全成活后適當遮陽即可。

野生軟棗獼猴桃品種很多，但真正各項性狀都比較優秀的品種很少。本試驗研究東北地區野生獼猴桃的組培快繁技術，可大大加快野生軟棗獼猴桃優良品種的篩選及繁殖推廣速度，為東北地區野生軟棗獼猴桃資源開發及其優良品種選育奠定基礎[9]。