CTA參數聯合miR-21、miR-140-3p對冠狀動脈狹窄的診斷價值

張燁

陸軍軍醫大學第二附屬醫院放射科，重慶 400000

冠心病主要由冠狀動脈血管粥樣硬化所致的血管狹窄/阻塞引發，而血管腔狹窄/阻塞作為冠心病患者心絞痛、心律失常、心肌梗死等臨床癥狀發生誘因，嚴重威脅患者生命健康，因此有效診斷干預對提供患者生存質量具有重要裨益[1-2]。冠脈數字減影血管造影術（coronary angiography, CAG）作為臨床評估冠心病狹窄程度的金標準，具有一定創傷性，且檢查費用檢查較高，臨床應用中存在一定局限性[3]。隨臨床檢查技術發展，螺旋CT 冠脈造影術（computed tomography angiography, CTA）在疾病檢查中得到廣泛應用[4]。研究表明，CTA 檢查可對冠脈管腔狹窄程度作出直觀反映，也可對斑塊病變作出準確評估，為臨床冠心病診斷及治療提供重要依據[5-6]。而微小RNA（miRNA）作為單鏈小分子RNA，可介導細胞分化、增殖、凋亡等病理生理過程。相關學者指出，miRNA 水平異?？赡芙閷毖孕呐K病的發生[7]?；谏鲜霰尘?，本研究選取2020年3月—2021年3月于陸軍軍醫大學第二附屬醫院就診的89 例冠心病患者作為研究對象，分析CTA 參數、miR-21、miR-140-3p 聯合對冠狀動脈狹窄的診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院就診的89 例冠心病患者作為研究對象，包括男47 例，女42 例；年齡49～70 歲，平均（59.50±8.92）歲。本研究得到院內醫學倫理委員會批準，患者知情同意本研究。

1.2 納入與排除標準

納入標準：符合《非ST 段抬高型急性冠狀動脈綜合征基層診療指南（2019年）》[8]中冠狀動脈狹窄相關診斷標準；心律整齊且控制在80 次/min 以下；存在胸悶、心前區不適、心電圖異常表現；CAG 檢查確診為冠狀動脈粥樣硬化。

排除標準[9]：合并肝腎等臟器功能不全者；呼吸功能障礙者；此前接受經冠狀動脈介入、搭橋術史、起搏器安裝或瓣膜置換者；合并瓣膜性心臟病者；合并血液系統疾病、全身免疫性疾病者；惡性腫瘤者；實驗檢查過敏者。

1.3 方法

CTA 檢查：采用西門子SOMATOM Definition Flash及AS 128 層螺旋CT，檢查前，要求患者保持空腹狀態，指導受檢者練習呼吸，使受檢者再一次CT 掃描中可以屏氣，避免呼吸運動偽影。掃描前舌下含0.5 mg 硝酸異山梨酯（國藥準字 H37022795），采用雙筒高壓注射器經外靜脈注射造影劑（碘美普爾）（國藥準字 H20067799）40～80 mL（按體質指數換算），隨后追加50 mL 生理鹽水（國藥準字 S10870001），注射速率為5 mL/s。采用Bolus Tacking 觸發掃描，感興趣區放在主動脈弓層面，延遲6 s后跟蹤觸發，閾值為100 Hu，采用回顧性心電門控技術（有期前收縮者采用前瞻性心電門控技術），以氣管隆突下1 cm 至膈下2 cm 為掃描范圍，設置管電壓參數為120 kV，采用自動管電流技術，準直器寬0.6 mm，螺距0.2～0.5，層厚0.75 mm，重建間隔0.5 mm，采集矩陣512×512，顯示矩陣1 024×1 024。卷積函數值班B26f，延遲時間5 s，屏氣時間7～10 s，檢查完畢后通過處理工作站進行分析、重建。采用syngo，via 軟件，用容積再現重建（volume rendering, VR）、最高最大密度投影（maximum intensity proj ection, MIP）、多平面重組、曲面重建（curvey plain reconstruction, CPR）等多種重建方法，多角度觀察冠狀動脈CT 血管成像參數。

miR-21、miR-140-3p 檢查：于接診當日抽取所有受試者5 mL 空腹外周靜脈血，離心處理20 min（轉速2 500 r/min，離心半徑10 cm），分離上清于為含RNA 酶試管內，-80℃低溫保存待檢。采用RT-PCR法測定miR-21、miR-140-3p 水平，采用microRNA 提取分離試劑盒分離血清內miR-21、miR-140-3p 細胞總RNA，采用TaqMan microRNA 反轉錄試劑盒及SYBR Premix ExTaq Ⅱ kit 分別做microRNA 逆 轉 錄 及定量PCR 反應，設置反應條件為預火95℃，預變性30 min，取出降溫至90℃，變性5 s，迅速降溫至58℃，退火20 s，溫度保持60℃，延伸45 s，40 個循環，重復實驗3 次。 內參為U6（上游引物：5`-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3`；下游引物：5`-GCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3`），采用2-△△Ct方法計算miR-21、miR-140-3p 相對水平倍數。miR-21 上游引物：5`-ACTCTCCAGCTGGGTAGCTTATCAGACTGAT-3`；下游引物：5`-ACTGGTGTCGTGGAGTCG-3`；miR-140-3p上游引物：5`-ACACTCCAGCTGGGAGGCGGGGCGCCG CGGGA-3；下游引物：5`-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3`。

1.4 觀察指標

①CTA 評估標準：輕度狹窄：冠脈斑塊短小、無軟斑，狹窄計算指數得值為25%～50%；中度狹窄：冠脈存在肺鈣化斑和/或混合斑塊，狹窄計算指數得值為51%～75%；重度狹窄：冠脈存在非鈣化斑和/或混合斑塊，狹窄計算指數得值＞75%。狹窄計算指數公式：（狹窄部位近心端的血管直徑-最狹窄管腔的直徑）/最狹窄管腔近心端血管直徑×100.00%。②以CGA 為金標準，比較不同檢查方式冠狀動脈狹窄檢出情況。③采用ROC 曲線分析CTA 參數、miR-21、miR-140-3p 及3 項聯合對冠狀動脈狹窄的診斷價值。

1.5 統計方法

采用SPSS 21.0 統計學軟件進行數據處理，計數資料以頻數和百分比（%）表示，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CTA 影像學分析

右冠狀動脈主干近、中段以非鈣化斑塊為主，同時存在混合斑塊，管腔內重度狹窄及部分管腔全閉。見圖1。

圖1 CPR 圖像、MIP 圖像Figure 1 CPR image， MIP image

2.2 不同檢查方式冠狀動脈狹窄檢出情況比較

4 種診斷方式對冠狀動脈狹窄總檢出結果比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；相比CTA 參數、miR-21、miR-140-3p 檢查，3 項聯合檢查冠狀動脈狹窄檢出率較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同檢查方式冠狀動脈狹窄檢出情況比較Table 1 Comparison of coronary artery stenosis detection by different examination modalities

2.3 不同檢查方式與CGA 結果相比

本文研究中CGA 檢查顯示，89 例冠心病患者中冠脈輕度狹窄患者39 例、冠脈中度狹窄患者28 例、冠脈重度狹窄患者22 例。CTA 參數、miR-21、miR-140-3p及3 項聯合對冠狀動脈狹窄檢查結果見表2。

表2 不同檢查方式與CGA 結果相比Table 2 Comparison of different examination methods with CGA results

2.4 ROC 曲線分析CTA 參數、miR-21、miR-140-3p 及3項聯合對冠狀動脈狹窄的診斷價值

與CTA 參數、miR-21、miR-140-3p 相比，3 項聯合對冠狀動脈狹窄的診斷價值較高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 ROC 曲線分析CTA 參數、miR-21、miR-140-3p 及3 項聯合對冠狀動脈狹窄的診斷價值Table 3 ROC curve analysis of CTA parameters, miR-21, miR-140-3p and the combination of the three on the diagnostic value of coronary artery stenosis

3 討論

冠狀動脈疾病作為復雜心血管疾病，主要由血管腔狹窄/閉塞、動脈粥樣硬化引發，嚴重影響患者生存質量[10]。研究表明，冠脈病變患者缺乏典型臨床表現，冠脈病變程度差異較大，極大增加了臨床病情診斷難度，而CAG 作為冠心病冠脈狹窄評估的金標準，會對患者機體產生一定創傷，可能會引發嚴重并發癥，故探尋更為準確、安全的診斷方式對患者干預及預后具有獨特意義[11-12]。

本文研究指出，通過CTA 參數、miR-21、miR-140-3p 聯合應用對冠狀動脈狹窄患者檢查具有良好的診斷價值，可準確反映患者冠狀動脈狹窄情況，為治療方案選擇提供重要參考。研究表明，miRNAs 可通過與靶基因結合而沉默靶基因水平，抑制下游信號通路活性，從而發揮作用，同時miRNAs 可通過外泌體實現細胞間信號傳遞，參與細胞間信息交流[13-14]。部分miRNs 已證實在維持內皮細胞穩定、保護心肌細胞等方面發揮重要作用，是心血管疾病潛在的生物標志物[15]。研究表明，冠脈斑塊不穩定可誘發冠狀動脈病變，miR-21 參與動脈粥樣硬化過程，與炎癥相關的miENAs 通過調控炎性細胞因子而啟動、影響炎癥反應，導致炎癥遞質對冠脈內斑塊穩定性造成影響[16]。相關學者表明，miR-21 水平與Gensini 評分存在相關性，且隨冠心病患者疾病程度增加而增加，由此表明miR-21 可造成冠狀動脈供血異常[17]。而miR-140-3 作為TLR4 上游miRNAs，兩者呈負調控關系。相關研究表明，冠心病患者外周血中miR-140-3p 呈異常低水平，且冠脈狹窄患者miR-140-3p 水平低于無狹窄患者，由此表明血液循環中miR-140-3p 水平可能與冠心病、冠狀動脈粥樣硬化相關[18]。相關研究表明，CTA 可準確反映較小冠狀動脈血管病變，并通過VR、MPR、CPR 等技術對血管進行多角度觀察，極大提高冠狀動脈狹窄的診斷準確性[19]。而斑塊數、非鈣化斑塊體積、鈣化斑塊體積、總斑塊體積等CT血管成像分析定量參數均反映了冠狀動脈的狹窄程度，相關研究表明，冠心病患者斑塊數、非鈣化斑塊體積、鈣化斑塊體積、總斑塊體積等參數明顯高于健康者，由此表明通過監測CTA 參數變化可對冠狀動脈狹窄患者冠脈狹窄程度做出有效診斷[20]。CTA 參數、miR-21、miR-140-3p 檢查在冠狀動脈狹窄診斷各具有優勢，綜合性診斷更能為臨床診斷提供準確依據，證實上述檢查方式聯合應用診斷價值更高?？偟膩碚f，相比CTA 參數（69.66%）、miR-21（49.43%）、miR-140-3p（50.56%）檢查，3 項聯合檢查冠狀動脈狹窄檢出率較高（89.88%）（P＜0.05），該結果和陳漢章[21]的結果大致相同，其研究結果表明：CTA 聯合診斷，其符合率為75.00%，高于單一方法檢測的符合率（46.05%、35.53%）（P＜0.05）。

綜上所述，CTA 參數、miR-21、miR-140-3p 聯合應用可有效檢出冠狀動脈狹窄情況，明確冠脈狹窄程度，為干預、預后評估提供重要參考，值得臨床推廣與應用。但研究中樣本量選取較少，且未對CTA 參數、miR-21、miR-140-3p 與患者預后情況進行分析，導致研究存在局限性，需進一步增加樣本量進行多中心研究證實。