溫菲菲 何 雙 許曉陽 李揚揚 吳淑華
(濱州醫學院附屬醫院,山東 濱州 256603)
PI3K/AKT 通路作為重要途徑之一, 多類腫瘤的發生與其失調有關。 PI3KCA、PIK3CB 編碼的p110α、p110β 存在于機體內, 當其表達增多,PI3K/AKT 通路失調[1]。 在許多HPV 相關人類癌癥中,亦存在PI3K/Akt 途徑的失調。 Syrjanen 等人第一次發現部分食管癌的發生與HPV 有關[2]。 在高危HPV 不斷感染中,HPV E6/E7 的表達增加可能會干擾細胞周期控制,使pRb 失活,導致p16 表達增加。 因此,針對 p16 表達的免疫組化(IHC)被作為診斷是否有HPV 感染的替代檢法[3]。
本研究在食管正常黏膜、鱗癌病例中,檢測p16、PI3Kp110α、p110β 蛋白的表達差異及相關性, 探討p16 與 PI3Kp110α、p110β 蛋白的作用,以期發現新的靶標與思路指導食管鱗癌的治療。
收集2014 年1 月至2015 年12 月于濱醫附院病理科根治切除的食管鱗癌病例137 例、 正常黏膜32例。 由2 位消化亞??撇±磲t生參照《WHO 消化系統腫瘤分類》(2019 版)[4],對其閱片分類。
1.2.1 免疫組織化學
應用免疫組化染色, 一抗濃度 PI3Kp110α (1∶150)、p110β(1∶250)、p16 應用即用型工作液。 陰性對照為 PBS;p16、PI3Kp110α、p110β 指標的陽性對照分別為宮頸癌切片、正常腦組織切片、扁桃體切片。
1.2.2 結果判斷
p16 陽性在鱗癌細胞質和細胞核中;PI3Kp110α、p110β 陽性在鱗癌的細胞膜和細胞質。 對所染切片,鏡下觀察10 個高倍視野。 p16 指標評判標準:鱗癌細胞陽性表達面積≥70%判定為陽性。 PI3Kp110α、p110β 的評判標準如表 1 所示。
表1 PI3Kp110α、p110β 的免疫組化評判標準表
統計學處理采用SPSS 23.0 軟件。 正常食管黏膜與鱗癌組間蛋白的表達采用 χ2檢驗;p16、PI3Kp110α、p110β 與各臨床病理因素間、 不同蛋白間的表達的相互關系均應用Spearman 相關性分析; 顯著性檢驗標準為P≤0.05。
采用 χ2檢驗,p16、PI3Kp110α、p110β 在鱗癌中的表達,與正常黏膜相比,表達量顯著增多(P<0.05,見圖1、表2)。
圖1 p16、PIKp110α、p110β 在食管鱗癌中的表達
表2 p16、PI3Kp110α、p110β 在食管鱗癌中的表達差異
在食管鱗癌中,p16 的表達與發病部位、 分化程度、淋巴結轉移具有相關性。 其中相對于食管中段與下段,頸段與上段p16 表達高,差異均具有顯著性(P<0.05)。PI3Kp110α、p110β 與淋巴結轉移呈顯著正相關(P<0.05,見表 3)。
表3 p16、PI3Kp110α、p110β 與臨床特征的相關性
p16 與PI3Kp110α 在食管鱗癌中有顯著相關性(r=0.177,P=0.039); 然而,p16 與 PI3Kp110β 在食管鱗癌中的表達無相關性(P=0.760,見表4)。
表4 p16 與 PI3Kp110α、p110β 表達的相關性
食管癌是一種極具侵襲性的腫瘤,由于缺乏特定的初始癥狀,通常在晚期診斷,5 年生存率僅為15%~34%[5,6]。 食管鱗癌的治療主要是手術輔以放化療,但對于臨床分期Ⅲ~Ⅳ期的患者,預后仍然較差[7]。 因此,研究能夠預警食管癌發生的分子指標迫在眉睫。 本實驗中,鱗癌組織中p16 蛋白的陽性率為34.3%,明顯高于食管正常黏膜的陽性率0, 表明食管鱗癌的發生與HPV 的感染有關。 同時分析顯示,p16 與食管部位有明顯相關性。 筆者認為,食管頸段與上段距離外環境近, 更易感染HPV。 分化程度高的食管鱗癌病例中,p16 的表達高,提示在HPV 感染誘導的腫瘤中,分化程度較高。 在無淋巴結轉移的病例中,p16 的表達高,HPV 感染以后,腫瘤分化程度較高,發展相對緩慢,進而淋巴結轉移率低。
HPV 的持續感染,病毒多量復制,會異常激活多種信號途徑[8,9]。在本實驗中,與正常黏膜相比,PI3Kp110α、p110β 在食管鱗癌中表達增多, 提示在食管鱗癌中,PIK3CA、CB 被激活。研究亦顯示,PI3Kp110α、p110β 與食管鱗癌的轉移有關。 筆者認為,PIK3CA、CB 蛋白異常表達會使PI3K/AKT 途徑失衡,失衡后的PI3K/AKT途徑可導致mTOR 的異常表達,進而調控內皮細胞生長,導致腫瘤的轉移。 p16 蛋白的表達均與PIK3CA 呈正相關,當食管發生HPV 的持續感染時,HPV 感染刺激 IL-17 誘導 Mcl-1 突變,導致 PIK3CA 的激活,PI3K途徑失衡,誘導了腫瘤進展。
總之,在食管鱗癌的發生中,會有HPV 的感染,同時存在PI3K/AKT 信號途徑失衡。聯合檢測PIK3CA和p16 可能有助于優化食管鱗癌的治療。