鹽酸頭孢甲肟原料及制劑聚合物雜質的分析方法

王利沙

摘要：目的：分析鹽酸頭孢甲肟原料及制劑聚合物雜質的方法。方法：運用高濃度溶液降解法制備鹽酸頭孢甲肟降解溶液，用高效凝膠色譜法（TSK G2000 SWxl）、柱切換-LC/MS法為鹽酸頭孢甲肟降解溶液聚合物質雜質進行分離，并對結構進行鑒定，評判高效凝膠色譜法分離聚合物雜質的專屬性。用Kromasil100-5C18型色譜柱，按水-乙腈-冰醋酸為流動相洗脫梯度，創建鹽酸頭孢甲肟聚合物的RP-HPLC剖析方法，借助二維色譜法、柱切換-LC/MS法分析專屬性，剖析實際供試品。結果：鹽酸頭孢甲肟降解物判斷為鹽酸頭孢甲肟脫第3位側鏈二聚體水解物。高效凝膠色譜法對鹽酸頭孢甲肟聚合物雜質在分離時，容易遭受小分子雜質影響，定量準確性容易受到影響。RP-HPLC法對鹽酸頭孢甲肟聚合物雜質分析時，可測定鹽酸頭孢甲肟二聚體，具有優良的專屬性。結論：高效凝膠色譜法無法科學質控鹽酸頭孢甲肟聚合物雜質，創建反相色譜法剖析鹽酸頭孢甲肟聚合物雜質具有優良的專屬性，可用鹽酸頭孢甲肟降解溶液作為聚合物雜質系統適用性溶液。

關鍵詞：鹽酸頭孢甲肟原料;制劑聚合物;雜質

【中圖分類號】 R97 【文獻標識碼】 A? ? ? 【文章編號】2107-2306（2022）04--01

β-內酰胺類抗生素內源性聚合物雜質易誘發過敏反應，人們用藥安全備受威脅，這類雜質會在運輸、存儲期間出現，藥物安全備受影響，需對β-內酰胺類抗生素聚合物雜質科學控制。葡聚糖凝膠G10（G10）色譜法、高效液相色譜法（HPSEC法）等均可在聚合物雜質質控應用。聚合物分析技術發展下，聚合物質控理念漸漸由控制聚合物總量發展向精準控制指針性聚合物雜質，鹽酸頭孢甲肟是第三代半合成頭孢菌素，主要用在治療敏感菌引起的肝膽系統位置的感染[1]。我國藥典最早采用G10凝膠色譜法開展聚合物雜質控制，收載該品種，聚合物雜質難以得到科學控制，未對其進行控制。葡聚糖凝膠G10系統可有效分析聚合物雜質，應用期間漸漸出柱效低下，分離時間長，分離度不佳，容易遭受藥物輔料影響。HPSEC法即傳統葡聚糖凝膠G10系統升級技術，科學解決G10色譜系統柱效低下，但是這種方式分離聚合物雜質峰受極性小分子雜質影響較大，測定的聚合物雜質含量較高，專屬性受影響較大。RP-HPLC法主要是測定藥物含量，研究要點是分析聚合物。前期研究發現：用RP-HPLC法對各類抗生素的聚合物雜質展開分析，了解不同藥物指針性聚合物物質，創建RP-HPLC法對聚合物雜質進行分析[2]。本研究中，用二維液相色譜法（2D-HPLC）、柱切換（LC/MSn）法研究HPSEC法分離聚合物雜質的專屬性。分析創建RP-HPLC法質控聚合物雜質，對聚合物整體的含量進行控制?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 HPSEC法

色譜柱：TSK-gel G2000SWxl;流動相：A相是磷酸鹽緩沖液（pH 7.0），B相是乙腈，A-B（85：15）;流速0.8ml·min-1;檢測波長：231nm;柱溫：30℃;進樣量：20μL。稀釋溶液：流動相A;供試品溶液質量濃度：3.0mg·mL-1。聚合物雜質的分析采用HPSEC法。

1.2 RP-HPLC法

色譜柱：Kromasil 100-5C18（4.6mm×250mm，5μm）;流動相：A相是水-乙腈-冰醋酸（93：7：1.7），B相是冰醋酸-乙腈（100：17），梯度洗脫：0-10.0minA相是100.0%，10.0-40.0minA相降低為0%，50.0-60.0min A相保持100%。流速1.0mL·min-1。柱溫：30℃;檢測波長：254nm。用于對鹽酸頭孢甲肟原料、制劑指針性聚合物雜質進行剖析。

1.3 2D-HPLC法

色譜系統I和HPSEC法相同，色譜系統2與RP-HPLC法相同。切換程序：①設置切換閥為A位置，用色譜系統1分離供試品，用色譜系統2預平衡RP-C18色譜柱;②色譜系統1分離的目標雜質出峰后，設置切換飯為B位置。③用色譜系統2將柱子和定量環中目標雜質洗脫到第2根色譜柱，用色譜系統2分離分析。利用HPSEC系統分離弱保留值雜質于RP-HPLC色譜系統定位。

1.4 柱切換-LC/MSn法

色譜系統5，與RP-HPLC色譜系統。柱溫30℃，流速0.5mL·min-1。切換閥：六通閥A、B;切換用定量環體積：500μL。因創建的聚合物分析用RP-HPLC法用流動相所含的緩沖鹽為揮發性緩沖鹽，直接用在LC/MS剖析，直接用于弱保留值雜質的脫鹽處理，開展質譜定性分析。

1.5 溶液配制

鹽酸頭孢甲肟降解溶液：精密稱取鹽酸頭孢甲肟原料約75mg，放置在25mL量瓶中，加入0.1mol·L-1磷酸鹽緩沖液2mL溶解后，用水稀釋至刻度，搖晃均勻，室溫下置放12h，即大約3mg·mL-1。

鹽酸頭孢甲肟原料供試品溶液：精密稱取鹽酸頭孢甲肟原料約75mg，放置在25mg量瓶中，加水溶解并稀釋到刻度，搖晃均勻，制成質量濃度3mg·mL-1溶液。

鹽酸頭孢甲肟原料對照溶液：精密量取鹽酸頭孢甲肟原料供試品溶液1mL，放置在100mL量瓶中，用水稀釋到刻度，搖晃均勻，制成質量濃度為30μL·mL-1溶液。

注射用鹽酸頭孢甲肟溶液：精密稱取注射用鹽酸頭孢甲肟適量（相當于鹽酸頭孢甲肟75mg），放置在25mg量瓶中，加水溶解并稀釋到刻度，搖晃均勻，制成質量濃度為3mg·mL-1溶液。

注射鹽酸頭孢甲肟對照溶液：精密量取注射用鹽酸頭孢甲肟供試品溶液1mL，放置100mL量瓶內，用水稀釋到刻度，搖晃均勻，制成質量濃度為30μg·mL-1溶液。

2 結果

2.1 高效凝膠色譜法分離雜質

鹽酸頭孢甲肟降解溶液，用HPSEC法進行分析，結果在鹽酸頭孢甲肟主峰前分離獲取弱保留值雜質HPSEC，后用柱切換-LC/MS法推動各組分化學結構，推定雜質結構，雜質歸屬見表1。

2.2 HPSEC-1

用柱切換-LC/MS法于弱保留值雜質HPSEC-1中分離取得2個未知雜質，命名為HPSEC-1a、HPSEC-1b。

3 討論

柱切換-LC/MS法剖析頭孢甲肟降解溶液數據得出：鹽酸頭孢甲肟降解溶液中所含有的各結構位置小分子雜質，未出現三聚體與較高聚合態雜質。聚合物雜質均與頭孢甲肟主峰前出來，表示HPSEC法可分離聚合物雜質，但降解濃溶液中存在小分子，HPSEC色譜系統難以科學分離聚合物，聚合物雜質的含量準確性會受到影響[3]。所以，HPSEC法剖析聚合物雜質方式專屬性差。

用RP-HPLC法對鹽酸頭孢甲肟原料和注射劑的聚合物含量的分析，用頭孢甲肟脫四氮唑二聚體充當指針性聚合物雜質，采用對照法對聚合物的含量進行計算，數據展現，鹽酸頭孢甲肟原料聚合物含量為0.08%，制劑聚合物含量為0.16%，明顯比HPSEC法低，兩者差異是因HPSEC法分離的弱保留值雜質中含有小分子雜質導致，可能和其他不同原理技術定量有關系，需逐步證明[4-5]。

綜上所述，本研究采用不同方法等現代色譜分析方式建立聚合物的測定方法，結果表明HPSEC法對鹽酸頭孢甲肟原料和制劑聚合物雜質分析專屬性不佳，RP-HPLC 法對鹽酸頭孢甲肟聚合物雜質分析靈敏度較高，且具有較強專屬性，可科學質控聚合物。

參考文獻：

[1]夏佳，席時東.UPLC測定鹽酸頭孢甲肟原料藥及注射劑的有關物質[J].中國現代應用藥學，2019，36（22）：2769-2772.

[2]李進姚.鹽酸頭孢甲肟原料及制劑的聚合物雜質分析[J].藥物分析雜志，2021， 41（1）：11.

[3]劉玲，陳博，劉曈.鹽酸頭孢甲肟無菌粉結晶工藝優化[J].化學與生物工程，2018， 35（8）：3.

[4]董曉松.呋喃妥因聯合頭孢甲肟治療兒童復發性尿路感染的臨床研究[J].現代藥物與臨床，2021，36（9）：1940-1943.

[5]夏佳，席時東.UPLC測定鹽酸頭孢甲肟原料藥及注射劑的有關物質[J].中國現代應用藥學，2019，36（22）：2769-2772.

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