豬常見細菌性病原檢測方法研究進展

李璐

（遼寧省農業發展服務中心，遼寧 沈陽 110299）

豬的細菌性疾病是目前生豬養殖過程中最為常見的一類傳染性疾病，是由一些具有致病性的細菌引發的疾病，這類疾病可以導致豬的個體在呼吸、生殖、消化、泌尿、循環等系統發生各類疾病。雖然隨著生豬養殖管理水平的不斷提高，細菌性疾病的發病率有所下降，但是細菌性疾病已經由單一的細菌感染逐漸轉變成多細菌感染的狀況，同時細菌的耐藥情況不斷嚴重，這就導致臨床上出現臨床癥狀簡單化變的復雜化，更是難以治療，嚴重威脅我國的生豬生產。細菌性病原檢測在目前的生豬生產中就顯得尤為重要，病原檢測可以快速準確的明確感染的細菌種類，是控制細菌性疾病發生發展的重要手段。細菌的分離培養鑒定一直是細菌感染診斷的最為傳統方法，這種方法的特點是較為準確直觀，但是由于這種檢測方法耗時較長，操作過程較為繁雜，尤其是一些生長條件苛刻的細菌更是難于鑒定，導致這種方法不能作為一種快速診斷的方法進行應用。一些常見的免疫學檢測方法如：凝集試驗、補體結合試驗、中和試驗等，雖然能作為細菌檢測的常用方法，但是存在特異性較差、靈敏性不高等特點，不能大面積的推廣應用到生產實踐中。隨著科學技術的不斷發展，細菌檢測技術也在不斷的進步，目前已經從傳統的檢測手段朝著更高層次發展，如：免疫膠體金標記技術、免疫磁珠分離技術、實時熒光定量PCR法、DNA雜交技術等，這些新的檢測技術適用于快速診斷應用，能夠較為準確的為我國生豬細菌性疾病的診斷提供快速診斷的新方法。

1 免疫膠體金標記技術（ICS）

免疫膠體金標記技術是一種較為新型的檢測技術，主要采用膠體金作為檢測中的標記物。這種技術主要是根據免疫學中的抗原抗體之間的關系，采取毛細管作用或者滲濾作用又將其分為膠體金免疫層析法（GICA）和斑點免疫滲濾法（DIGFA）。目前這種方法可以應用在金黃色葡萄球菌、結核分枝桿菌、鏈球菌、大腸桿菌、沙門氏菌等一些細菌的檢測。其特點是不需要特別的實驗室設備支持，操作簡單，特異性較高，成本較低等。但是同時也存在穩定性不是非常高，眼觀判斷主觀性較高等問題。易兵[1]建立了一種豬肺炎支原體膠體金快速診斷試紙，共檢測了54份樣品，與傳統的ELISA進行了對比，發現這種膠體金快速診斷試紙的陽性率為83.8%，ELISA的陽性率為90.7%。隨著科技的不斷發展，尤其是一些與檢測相關的新型材料的發展，這種檢測方法的準確率和特異性將會得到進一步的提升。

2 免疫磁珠分離技術（IMS）

免疫磁珠分離技術是通過細菌中某些特異性抗原存在一定超順磁性，這些特異性抗原與一些化學基團形成親和性的磁珠，最終形成免疫復合物，再通過磁場將其分離出來，使其濃縮純化。目前這種方法可以檢測多種細菌，如胸膜肺炎放線菌、鼠傷寒沙門氏菌、霍亂弧菌等。該方法具有細菌分離速度快、特異性強、效率高等特點，隨著不斷的深入研究，這種檢測方法的應用前景將更為廣闊。白莉等[2]采用免疫磁珠分離技術和實時熒光定量PCR技術檢測志賀毒素大腸埃希菌，效果較好。李倩茹等[3]采用免疫磁珠分離技術與熒光微球免疫層析法檢測鼠傷寒沙門氏菌進行檢測，結果顯示其靈敏度非常高，比單一的檢測方法效率提高了30倍。

3 實時熒光定量PCR法

實時熒光定量PCR法是采取熒光標記的探針對產物進行了標記，然后通過制作好的專門軟件對檢測的細菌樣品進行分析。目前這種檢測方法可以檢測多種細菌，如沙門氏菌、豬附紅細胞體、副豬嗜血桿菌、豬鏈球菌、豬傳染性胸膜肺炎放線菌、豬支原體等。該方法具有特異性高、敏感性強等多種優點。但是也存在一定的不足，如需要專業設備，操作要求較高，費用高，這就導致這種特異性強的檢測方法在基層使用過程中受到了一定的限制。

4 DNA雜交技術（DNAH）

DNA雜交技術是一種核酸分子雜交技術，2007年由美國的一家公司開發上市。該檢測方法與一些傳統的檢測方法相比，其特點是樣品處理較為簡單，不存在提取核酸等環節，特異性強、靈敏度高、假陽性率低等特點。劉亞娟等[4]建立了沙門氏菌等的DNA雜交技術檢測方法，試驗結果顯示這種方法的檢測最低限較低，靈敏度較高。

5 LAMP

LAMP技術屬于恒溫核酸擴增方法，在65℃反應30～60min，結果可直接可視化判定，與常見的PCR比省去了高溫變性的環節，節省時間，其靈敏度和特異性等方面明顯優于普通PCR。目前這種方法可檢測多種細菌，如鏈球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、霍亂弧菌、金黃色葡萄球菌、炭疽芽孢桿菌等。蔡樹東等[5]應用LAMP技術對多種基因型的大腸桿菌進行檢查，其靈敏度較高，能夠較為準確的鑒定出大腸桿菌的類型。雖然這種方法已經成為常用的檢測方法之一，但是偶爾也會出現假陽性的現象，隨著科技的不斷進步，LAMP技術會與一些其他檢查技術集成于一體，更廣泛的應用于多種微生物的檢測。

6 POCT技術

POCT技術又稱為即時檢測技術，是一種集計算機、納米、生物等于一體的檢測技術。這種技術簡易、即時、自動化、智能化，不需要大型的檢測設備，在養殖現場即可進行檢測，幫助獸醫即時進行臨床初步檢測。該技術可檢測鏈球菌、結核桿菌、艱難梭菌等多種微生物，隨著這種技術的不斷發展，相信在我國未來POCT技術將成為檢測微生物的領頭羊。

7 細菌質譜鑒定技術

細菌質譜鑒定技術是較為先進的一種細菌鑒定技術，通過鑒定細菌自身特有的蛋白，檢測出細菌的特有的蛋白質圖譜，在與數據庫的數據進行對比，可較為準確的鑒定出細菌的種類，甚至亞型。這種技術可鑒定臨床上常見的多種細菌，如大腸埃希菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、李斯特氏菌等，操作簡單，結果準確，但是也存在一定的局限性，如果數據庫中沒有需檢測細菌的數據，鑒定將不能完成。