仔豬水腫病病原分離鑒定及免疫防治研究

張葉茹

摘要：仔豬水腫?。‥D）在全球流行廣泛，嚴重影響著畜牧業的發展和人類的飲食健康。本文通過對仔豬水腫病研究發現， 引起豬斷奶后腹瀉（PWD）和水腫?。‥D）的大腸桿菌菌株僅限于若干血清群，其中滴定檢測法和微陣列檢測法是較為常見的兩種檢測方法。這兩種方法可以有效對地方養豬場豬糞樣品進行檢測和驗證，還可以對患有水腫病的仔豬進行大腸桿菌篩查。

關鍵詞：仔豬；水腫??；腹瀉；檢測法

仔豬水腫病是造成斷奶仔豬產生巨大損失的一種嚴重疾病。大腸埃希菌，也被稱為大腸桿菌（VTEC），被認為是豬只患水腫病的主要病因。這些菌株克隆了斷奶仔豬的腸道，并在腸道中產生對細胞致命的毒素，因此被稱為大腸桿菌。大腸桿菌中的毒素也被稱為志賀樣毒素（SLT），因為它們與痢疾志賀菌產生的志賀毒素關系密切。目前，根據與志賀氏菌毒素的關系命名為志賀氏菌毒素（Stxl，Stx2，Stx2c，Stx2e），產生毒素的大腸桿菌菌株命名為志賀氏菌產毒大腸桿菌（STEC）。在豬身上，水腫病可能發展為異能血癥，這是斷奶仔豬易患的一種疾病，通常在斷奶后一周內發生，是由于在斷奶后立即給仔豬喂食含藥物的飼料混合物造成感染，老年動物大多不會出現這種情況。在發生水腫病的豬群中，一窩中的一只仔豬受影響會傳染所有的仔豬，但是也有個別仔豬根本不受這種病的影響。因此可以使用抗毒血清防治水腫病，血清是用從Stx2e類毒素和脂類調節劑制備的。

志賀毒素檢測的滴定試驗在VERO細胞上進行。將加熱至56℃滅活30分鐘的血清連續稀釋，并添加抗生素。向所有稀釋液中加入等量的含有志賀毒素的大腸桿菌上清液（濃度為10%），細胞毒性劑量會對50%的vero細胞系產生細胞病變效應，將混合物放在室溫下靜置。第二天，將60微升不同稀釋度的混合物加入平板孔中，并加入90微升濃度為3×10/毫升的Vero細胞懸浮液。在37℃條件下孵育后，通過掃描電子顯微鏡微鏡下對結果進行評估。72小時后對樣品進行最后一次血清稀釋，抑制Vero細胞變性50%，提高中和抗體滴度，得到檢測結果。

當微陣列檢測法直接應用于豬糞便樣本時，可以用于豬場監測或特定地區的流行病學調查，是一種有效的初步篩選方法。第一步是使用微陣列直接用豬糞便樣本檢測是否存在潛在的致病性O血清群。一旦發現致病血清群，可進行進一步平板接種以分離目標血清群菌落。然后可以通過相同的微陣列檢查分離的菌株，以確定毒力基因模式。雖然微陣列可直接用豬糞便樣本同時檢測致病血清群和毒力基因，但血清群特異性和毒力基因可能來自不同的宿主菌株。PWD和ED疾病通常發生在斷奶后14天內的仔豬身上。攜帶具有相關毒力基因的PWD和ED相關血清群菌株的成年豬本身可能不會表現出任何癥狀，但卻可以成為仔豬的感染源。由于病原體的快速傳播，導致大型豬場爆發PWD和ED，因此在開始繁殖或購買仔豬時，使用這種微陣列對PWD和ED相關大腸桿菌菌株進行初步篩選非常重要。這是檢測PWD和ED的首個可全面檢測大腸桿菌血清型和致病型的DNA微陣列，并有望作為一種新的診斷工具，用于調查散發性感染和暴發以及監測這些菌株在不同地理位置的血清群/病理型分布。

對已經發病仔豬在飼料中加入鹽類瀉劑連用2天。病初可采用亞硒酸鈉和維生素E，對癥治療?？捎每敲顾?、硫酸新霉素或硫酸鏈霉素，每天2次，連續注射2～3天。利用分離的病原菌制備高免血清，給仔豬口服或注射，可用于預防或緊急治療。治療要今早，提倡采用綜合防治方法。一旦發現仔豬患水腫病，要整窩、全群用藥，特別對感染但未表現臨床癥狀的豬只，以爭取更多的治療時間。增加飼料中多種維生素、硒等的含量，以提高抗應激水平。進行藥敏試驗，有針對性地使用抗菌藥物，同時要用地塞米松、高滲葡萄糖等加強抗炎與解毒治療。靜注、腹腔注射效果要好于肌注效果。降低日糧蛋白，有利于控制疾病。