無菌操作在食品微生物檢驗中的應用效果

魏茂琪

摘要：目的 分析無菌操作在食品微生物檢驗中的應用效果。方法 選取本市62例肉類食品，時間2021年04月-2022年04月，用隨機數字表法平均分為對照組31例，包括16例豬肉，15例牛肉，行常規方法檢驗;觀察組31例，包括17例豬肉，14例牛肉，行無菌操作檢驗，比較兩組檢驗效果。結果 觀察組的豬肉、牛肉菌落總數均明顯低于對照組（P<0.05）。 結論 在食品微生物檢驗中執行無菌操作，能夠顯著提升檢驗效果，具有推廣價值。

關鍵詞：無菌操作;食品;微生物檢驗

近些年來，在食品微生物檢驗中存在各種問題，超標現象屢禁不止，尤其多發生于肉類食品，威脅到食品安全，成為當下一種熱議話題，產生嚴重影響。提升食品安全質量的關鍵在于微生物檢驗，不同檢驗方法取得結果各不相同，以往常應用常規方法檢驗，該方式缺乏規范化流程，未嚴格執行無菌操作，容易致使檢驗結果出現偏差。本次研究以肉類食品為對象，分析無菌操作的應用效果。

1 資料和方法

1.1一般資料

選取本市62例肉類食品，時間2021年04月-2022年04月，樣品來源為昆明市盤龍、官渡、五華、西山四個主城區規范化農貿市場，采取隨機抽樣的方式。用隨機數字表法平均分為對照組31例，包括16例豬肉，15例牛肉;觀察組31例，包括17例豬肉，14例牛肉。提前將乳糖、氯化鈉和磷酸氫二鉀等準備好，做好標記處理。

1.2方法

1.2.1菌落總數檢驗方法

以無菌操作稱取25g樣品置盛有225mL稀釋液的無菌均質袋中，用均質器拍1min;若樣品為液態，不需要均質，震蕩混勻，制成1：10的樣品勻液。取1mL1：10稀釋液注入含有9mL稀釋液的試管中，制備1：100稀釋液。如上法依次制備10倍系列稀釋樣品勻液。選擇2個～3個適宜的稀釋度各吸取1mL稀釋液于滅菌平皿，每個稀釋度做兩個平皿。同時分別取1mL樣品稀釋液加入2個無菌平皿作空白對照。傾注平板計數瓊脂，混勻，瓊脂凝固后倒置在恒溫培養箱36℃培養，48小時后計數（水產品30℃培養72h）。選取菌落數在30CFU～300CFU的平板，按公式N=∑C/（n1+0.1n2）d計算，結果“四舍五入”后采用兩位有效數字報告。

1.2.2菌落總數計算公式

若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時，按以下公式計算：N=∑C/（n1+0.1n2）d

式中：N——樣品中菌落數;

∑C——平板（含適宜范圍菌落數的平板）菌落數之和;

n1——第一稀釋度（低稀釋倍數）平板個數;

n2——第二稀釋度（高稀釋倍數）平板個數;

d——稀釋因子（第一稀釋度）

1.2.3測定菌落總數

以《GB4789.2-2016食品安全國家標準食品微生物學檢驗菌落總數測定》為標準，對菌落總數述展開測定，對樣本進行稀釋，倍數為10倍，選擇2個～3個適宜的稀釋度各吸取1mL稀釋液于滅菌平皿，每個稀釋度做兩個平皿，設置空白對照和陰性對照。

1.2.4操作方法

對照組行常規方法檢驗，按照流程展開各項操作，未遵循無菌理念。觀察組行無菌操作檢驗：①在無菌室內，將操作時間和緩沖時間設置好，確保潔凈度達到1萬級，定時清掃室內衛生，保證干凈整潔，不存在雜物。②采取新潔爾滅溶液，濃度為0.1%，酒精，濃度為75%，展開消毒處理。③對于各項儀器，需嚴格展開高壓滅菌處理，嚴密包扎。④在檢驗過程中，應用陰性作為對照，在進行接種時，先采取火焰灼燒方式，展開滅菌處理。⑤選取新潔爾滅溶液，濃度為5%，對吸管和含有菌液的試管進行浸泡，時間為24h，然后沖洗。⑥待營養瓊脂培養基融化，并且經過冷卻處理達到56℃ 后，注入，含量為15毫升，等到其凝固后，放置于培養箱中，溫度為36℃，過48h后，將其取出，確保無菌。展開空白對照，選取空氣稀釋液1毫升，將其注入營養瓊脂培養基中，對器皿發揮出的消毒功效展開評價，判斷無菌環境以及存儲方式是否符合要求，同時空白對照，能夠對無菌技術實施方式提供參考。

1.3觀察指標

評價兩組菌落總數檢出情況：觀察兩組檢出豬肉和牛肉的菌落總數，展開組間對比。

1.4統計學分析

錄入SPSS23.0統計學軟件中處理。

2 結果

觀察組的豬肉、牛肉菌落總數均明顯低于對照組，P<0.05。詳見表1。

3 討論

在無菌環境下，對取得的食品樣本展開微生物檢驗，采取無菌設備，分析食品中微生物情況，落實細胞接種技術，促使檢驗水平提高，避免檢驗環境或者食品樣本中涌入外界微生物。

針對環境，需要確保操作環境潔凈且無菌，定時對實驗室展開消殺處理，確保無菌防塵，避免樣本受到污染。檢驗員進入室內后，需要少說話、少走動，嚴格遵循相關標準，執行無菌操作。針對檢驗員，其需要先將無菌鞋服穿戴好，然后進入室內，對手部展開消毒處理，不能將未經過消毒處理的任何事物帶到室內。在對食品進行采集時，需要和樣本保持距離，預防自身攜帶的微生物會對樣本產生污染。另外，檢驗員需要確保動作準確、快速，預防樣本在空氣中長久暴露，避免雜菌感染。在進行檢驗前，需要應用高壓滅菌、乙醇擦拭等方法，消毒滅菌平板、樣本瓶、無菌檢驗設備、試管和玻片等。將物品擺放好，按照要求將各種物品擺放好，做好維護工作，每次應用前，消毒，引入無菌操作技術。

綜上所述，在食品微生物檢驗中執行無菌操作，能夠顯著提升檢驗效果，具有推廣價值。

參考文獻：

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