眉山市7135例孕早期孕婦紅細胞葉酸及血清維生素B12檢測結果分析及正常參考值建立

羅 艷 劉緒義 秦 琦 戴 凱 劉 玲

四川省眉山市婦幼保健院(620010)

葉酸和維生素B12是妊娠期女性不可或缺的維生素，共同參與了機體DNA、氨基酸、蛋白質、磷脂的合成和代謝，與細胞分裂也密切相關[1-3]。孕早期婦女缺乏葉酸會大大增加胎兒出現唇腭裂、21-三體綜合征、神經管畸形概率[1,4-5]；維生素B12缺乏會引起孕婦發生巨幼細胞性貧血及嬰兒神經系統異常[6-7]。大量研究發現，葉酸和維生素B12缺乏與妊娠期高血糖、高血壓、貧血、流產、早產密切相關[8-12]。我國經濟發達的東莞地區，孕婦葉酸缺乏率為6.1%，維生素B12缺乏率仍高達10.4%，隨著孕周增加葉酸、維生素B12缺乏率升高[2]。目前采用羅氏化學發光法檢測機體維生素B12水平，其參考范圍僅為歐洲和美國人群的研究結果，缺少適用于中國人群的參考值范圍，尤其缺少對孕早期孕婦的研究數據。我國幅員遼闊，各地區差異很大。因此，有必要在統一檢測方法的基礎上，建立適用于本地區孕婦的紅細胞葉酸和維生素B12的正常參考范圍，這也是精準醫療的具體實施。本研究通過測定眉山地區孕早期(8～12周)孕婦的紅細胞葉酸和血清維生素B12水平，以了解本地區孕婦營養狀況并建立參考范圍，為本地區開展孕期管理提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年1月-2021年2月在本院產前檢查的孕早期(8～12周)孕婦紅細胞葉酸及血清維生素B12檢測結果。納入標準：同意簽署知情同意書并愿意接受檢測，年齡18～45歲。排除標準：胃腸切除手術史、患嚴重消化系統疾病、肝腎功能不全；患有甲狀腺疾病、糖尿病、冠心病、惡性腫瘤、血液系統或免疫系統疾??；臨床上需要補服大劑量葉酸或維生素B12治療，其他不能配合參加。本研究經過院倫理委員會審批。

1.2 檢測方法

均采集孕婦空腹靜脈血2管，分離膠真空管5 ml 1管，EDTA-K2抗凝管3 ml 1管；采用Roche cobas e411全自動電化學發光免疫分析儀測定紅細胞葉酸和血清維生素B12濃度，試劑為羅氏配套檢測試劑、定標液及質控液等。按試劑盒說明書和儀器操作規程進行。紅細胞葉酸濃度=分析結果/%紅細胞比容×100。采用國際通用標準，紅細胞葉酸<400 ng/ml判定為低于預防NTDs最適濃度[13]。

1.3 統計學處理

采用SPSS 17.0數據分析。正態性檢驗，樣本量≤5000采用Shapiro-Wilk檢驗，>5000采用Kolmogorov-Smirnov檢驗。P<0.05表明資料不服從正態分布，用2.5%～97.5%表示參考范圍，組間比較采用Kruakal Waliis檢驗；P>0.05表明資料服從正態分布，用均數±標準差表示95%參考范圍，組間比較采用方差分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 數據分析

共納入早期妊娠孕婦7135例，均行紅細胞葉酸檢測；6296例行血清維生素B12檢測。紅細胞葉酸水平和血清維生素B12的參考值范圍經過Kolmogorov-Smirnov檢驗，數據均不服從正態分布，用2.5%～97.5%百分位數法表示參考范圍。

2.2 參考范圍確定

經統計分析，本次孕早期孕婦紅細胞葉酸參考范圍為606.11～1492.69ng/ml, 中位數為1045.22 ng/ml;血清維生素B12參考范圍為 201.0～927.3 pg/ml，中位數為499.60 pg/ml。

2.3 不同年齡段孕婦紅細胞葉酸水平參考范圍

將18～45歲孕婦分為5組，不同年齡段孕早期孕婦紅細胞葉酸水平百分位點分布見表1。各年齡組紅細胞葉酸水平參考范圍分別為：18～25歲992.81(585.4～1417.0)ng/ml，26～30歲1068.56(620.1～1500)ng/ml，31～35歲1093.48(656.38～1542.42)ng/ml，36～40歲1097.31(611.24～1571.68)ng/ml，41～45歲1034.02(566.07～1501.97)ng/m。紅細胞葉酸水平百分位點濃度，18～25歲組與26～30歲組、31～35歲組、36～40歲組有差異(χ2=146.842、157.262、53.860，均P=0.000)，26～30歲組與31～35歲組有差異(χ2=9.748，P=0.002)，其余組間無差異(P>0.05)。

表1 各年齡段孕婦紅細胞葉酸不同百分位點濃度分布(ng/ml)

2.4 不同年齡段孕婦血清維生素B12水平參考范圍

不同年齡段孕婦維生素B12水平百分位點分布見表2。各年齡段孕婦血清維生素B12水平參考范圍：18～25歲2433例，參考范圍495.31(206.5～924.0)pg/ml; 26～30歲2499例,參考范圍506.19(200.9～932.3)pg/ml; 31～35歲1075例, 參考范圍498.97(197.4～941.3)pg/ml; 36～40歲277例，參考范圍483.24(193.8～844.6)pg/ml; 40～45歲12例，參考范圍398.5(54.37～742.63)pg/ml。18～25歲組與26～30歲組維生素B12水平百分位點位濃度比較有差異(P<0.05),其余各組比較無差異。

表2 各年齡段孕婦血清維生素B12不同百分位點濃度分布(pg/ml)

2.5 不同年齡段孕婦血清維生素B12缺乏情況

本次調查的孕早期孕婦血清維生素B12<191 pg/l占比為2.3%(146/6296)，血清維生素B12缺乏隨年齡增長呈升高趨勢。血清維生素B12水平<191 pg/l比例在各年齡段分布有差異(χ2=584,P<0.05)，見表3。血清維生素B12水平<191 pg/L者集中在18～35歲，占95.2%(139/146)。

表3 各年齡段孕婦血清維生素B12水平分布[例(%)]

3 討論

《增補葉酸預防神經管缺陷項目管理方案》[23]提出，妊娠后3個月的孕早期對孕婦進行葉酸和維生素B12監測具有重要意義。紅細胞葉酸是較理想的葉酸營養狀況反映指標。但目前，由于孕期紅細胞葉酸檢測方法學不同以及不同地區、不同民族檢測參考范圍相差較大。

3.1 與我國其他地區孕早期孕婦紅細胞葉酸水平比較

本次研究的孕早期孕婦紅細胞葉酸水平中位數1045.2 ng/ml(羅氏試劑)，高于南京市、北京市、江蘇張家港、湖州市、云南、安徽省池州市及貴池區，考慮可能與方法學及樣本量不同有關。湖州市4500例樣本紅細胞葉酸中位數297.0 ng/ml，采用全自動時間分辨熒光分析(芬蘭生產試劑)檢測[14]；南京1793例樣本紅細胞葉酸748.1 ng/ml[15]、北京3458例樣本紅細胞葉酸中位數806.5ng/ml[16]、江蘇張家港665例樣本紅細胞葉酸中位數672.0 ng/ml[17]、云南123例樣本紅細胞葉酸中位數518.6 ng/ml[18]、安徽省池州市貴池區182例樣本紅細胞葉酸中位數368.7 ng/ml[19]、均采用貝克曼微粒子化學發光分析儀檢測，試劑來自于貝克曼公司。通過比較發現，采用時間分辨法檢測的參考范圍偏低，且低于世界衛生組織推薦預防神經管畸形的最佳水平400 ng/ml，而采用貝克曼化學發光法檢測的5個地區中，只有貴池地區葉酸水平低于WHO推薦值，考慮除方法學影響因素外，可能與樣本量及地區差異有關。有研究報道，青海地區藏族、漢族與回族間紅細胞葉酸和血清維生素B12參考范圍有所不同[24]。各地區飲食習慣、生活環境不同可能是造成地區差異的原因之一。而不同檢測方法對結果的影響較大，因此，有必要建立本地區、本實驗室的孕早期孕婦紅細胞葉酸水平的參考范圍，為臨床提供葉酸補充的精準依據。

3.2 與我國不同地區孕早期孕婦血清維生素B12水平比較

本次分析的國內各地區均采用化學發光法檢測，但檢測儀器生產廠家不同。本次6296孕婦血清維生素B12水平參考范圍為499.60(201.0～927.3)pg/ml(羅氏)；廣州湛江市30例孕早期孕婦維生素B12水平為368.69±23.52 pg/ml[10](新產業)；北京市113例孕早期孕婦維生素B12水平為457.55±160.68 pg/ml[20](未注明)；西安地區65例孕早期孕婦維生素B12水平為359.2±117.8 pg/ml[21](未注明)；天津市35例孕早期孕婦維生素B12水平427.92±41.08 pg/ml[22](貝克曼)。本次研究維生素B12水平高于上述地區。我國其他地區樣本量均較少，僅有幾十例，缺少大數據分析結果。因此，維生素B12是否受不同地區、不同民族、飲食和生活習慣的影響，有待大數據研究。在羅氏試劑說明書中，僅對歐洲和美國人群進行了維生素B12參考范圍設定，缺少對我國人群尤其是孕期女性參考范圍的研究，本次研究彌補這一不足。

3.3 不同年齡段孕早期孕婦葉酸、維生素B12缺乏狀況

本次眉山地區不同年齡段孕早期孕婦紅細胞葉酸濃度隨年齡增長而升高，與國內其他地區人群葉酸水平研究[15]結果相一致。主要原因可能是隨著年齡增長和社會閱歷增加，高年齡孕婦健康意識更強，或高齡二胎孕婦有更多的經驗積累，更懂得選擇科學、健康的孕期飲食習慣。本研究中，僅有7例(0.098%)紅細胞葉酸樣本低于預防NTDs的最低水平(400 ng/ml)，低于國內其他地區的報道[15]。說明眉山市孕早期孕婦葉酸營養狀況較好。維生素B12水平妊娠期會下降30%，根據2014年英國血液學標準委員會(BCSH)發布的《關于維生素B12和葉酸障礙的診斷和指南》[25]，對于維生素缺乏無特異性癥狀者，若維生素B12水平低于150 ng/l，應按照貧血管理進行治療；若維生素B12水平在150～200 pg/l 時，應再次監測1～2個月，同時聯合對血清同型半胱氨酸、甲基丙二酸和全反鈷胺素進行評估。同時，根據羅氏化學發光試劑說明書，參照歐洲人群的參考范圍191～661 pg/ml。本研究血清維生素B12<191 pg/l水平孕婦占比為2.3%，集中在18～35歲，維生素B12的缺乏隨年齡增長呈升高趨勢。因此，在孕早期進行維生素B12篩查，能及時發現低水平者并及時給予補充，具有重要意義。

綜上所述，本次研究建立了本地區孕早期孕婦紅細胞葉酸和維生素B12的正常參考值，納入樣本量較大，提高了結果的可信度和真實性，對指導本地區孕期保健具有針對性指導意義。