市售天麻膠囊的質量評價*

王發英，吳查青，毛菊華，余秋花，王偉影

(麗水市質量檢驗檢測研究院，浙江 麗水 323000)

天麻膠囊是由天麻、羌活、獨活、杜仲(鹽炒)、牛膝、粉萆薢、附子(制)、當歸、地黃、玄參等10味藥材組成，具有祛風除濕、疏經通絡、活血止痛等功效，臨床用于肢體拘攣、手足麻木、腰腿酸痛[1]。天麻和羌活為處方中主要藥物，天麻具有息風止痙，平抑肝陽，祛風通絡之功效，其主要有效成分為天麻素[2-4]。羌活具有解表散寒，祛風除濕，止痛之功效?，F代藥理研究表明，羌活具有抑制癌細胞增殖、抗氧化、抗炎、抗心律失常、免疫抑制等作用[5]。香豆素、烯炔、酚酸和酚酸酯類化合物是羌活中的主要成分類型，香豆素類異歐前胡素和羌活醇是《中國藥典》中的指標性成分，具有較強的抗炎活性；紫花前胡苷為鎮痛抗炎的有效單體化合物[6]。酚酸酯類的阿魏酸苯乙醇酯是羌活中抗氧化和抗血栓的主要活性成分[7]。通過國家局網站批準文號查詢，全國范圍內天麻膠囊的生產企業共130家，批準文號133個?，F行標準為國家食品藥品監督管理局國家藥品標準WS3-B-0500-91-2004。本文擬通過法定標準與含量測定(天麻素、羌活醇、異歐前胡素、紫花前胡苷和阿魏酸苯乙醇酯)對市售天麻膠囊進行質量調研，為天麻膠囊的質量評價與臨床應用提供參考數據。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器

Agilent 1260高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；XS105DU、XS104電子天平，瑞士梅特勒公司；DL-360D智能超聲波清洗器，上海精宏實驗設備有限公司；Milli-Q Advantage A10超純水儀，默克。

1.2 試 劑

天麻素對照品(批號：110807-202010，質量分數95.5%)、羌活醇對照品(批號：111820-201705，質量分數99.9%)、異歐前胡素對照品(批號：110827-201812，質量分數99.2%)、紫花前胡苷對照品(批號：11821-201604，質量分數99.6%)，均購自中國食品藥品檢定研究院；阿魏酸苯乙醇酯對照品(批號：010037-202009，質量分數≥98%)購自上海鴻永生物科技有限公司；甲醇、乙腈(色譜純，默克)，磷酸(色譜純，麥克林)，其余試劑均為分析純，水為自制超純水。

天麻膠囊，市場隨機購入40批次，涉及18家生產企業。樣品信息見表1。

表1 天麻膠囊基本信息

2 方法與結果

2.1 法定標準檢驗

現行法定標準國家食品藥品監督管理局國家藥品標準WS3-B-0500-91-2004，檢驗項目包括性狀、薄層鑒別、高效液相鑒別、裝量差異、水分、微生物限度。按照法定標準檢驗，40批樣品均符合所執行的標準規定，合格率為100%。

2.2 含量測定 天麻素

2.2.1 色譜條件[8-9]

色譜柱：Inertsil ODS-3 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)(日本島津公司)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min；檢測波長：220 nm；流動相：乙腈-0.2%磷酸溶液(3∶97)；進樣量：10 μL。

2.2.2 對照品溶液的制備

取天麻素對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL含1.020 mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備

取天麻膠囊裝量差異項下的內容物，混勻，研細，取1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，浸泡過夜，超聲處理40 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.2.4 陰性對照溶液的制備

以相同的處方比例制得不含天麻的樣品。按“2.2.3”項下的制備方法制成陰性對照溶液。

2.2.5 系統適用性試驗

分別精密吸取對照品、供試品、陰性對照溶液各10 μL，按“2.2.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖1。由圖1可見，在該色譜條件下，天麻素與相鄰雜質峰均達到良好分離，分離度大于1.5，陰性無干擾，理論塔板數按天麻素計算均在10 000以上。

圖1 HPLC圖譜

2.2.6 線性關系考察

精密量取“2.2.2”項下的對照品溶液1 mL，分別置于5 mL、10 mL、20 mL、50 mL、100 mL的量瓶中，加50%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，制成系列濃度標準溶液，分別進樣測定，以峰面積(Y)對濃度(X，μg/mL)進行線性回歸，得回歸方程Y=175 53X+6.362 4，r=1.000 0。結果表明天麻素在10.20～204.0 μg/mL濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.2.7 精密度試驗

精密吸取同一對照品溶液10 μL，按“2.2.1”項下的色譜條件，連續進樣6次，記錄峰面積，計算峰面積RSD為0.86%，結果顯示儀器精密度良好。

2.2.8 重復性試驗

取同一廠家同一批號的天麻膠囊6份，按“2.2.3”項下供試品溶液制備方法制備并依法測定，結果供試品中天麻素含量為0.24 mg/粒，RSD為1.65%。

2.2.9 穩定性試驗

取同一天麻膠囊供試品溶液，分別于0、8、16、24、36、48 h進樣，進樣6次，記錄峰面積，計算峰面積RSD為1.06%，表明供試品溶液48 h內穩定性良好。

2.2.10 回收率試驗

取已知含量的天麻膠囊(編號1)，共6份，各取0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，均精密加入“2.2.2”項下的對照品溶液1 mL，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件測定，計算天麻素的含量，計算回收率，結果其回收率平均值98.92%，RSD=1.07%(n=6)。

2.2.11 樣品含量測定

取表1中的40批樣品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.1”項下色譜條件測定，計算天麻素的含量，結果見表2。

表2 天麻膠囊中天麻素、紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、異歐前胡素的測定結果(n=2)

2.3 含量測定(羌活醇、異歐前胡素、紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯)

2.3.1 色譜條件[10-12]

色譜柱：Inertsil ODS-3 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)(日本島津公司)；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：210 nm；流動相為乙腈-0.2%磷酸溶液，梯度洗脫：0～25 min，15% A；25～45 min，38%～50% A；45～55 min，50%～75% A；55～70 min，75%～85% A；70～80 min，85% A；進樣量：10 μL。

2.3.2 混合對照品貯備液的配制

精密稱取紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、異歐前胡素對照品適量，分別加70%甲醇制成每1 mL含1 690.0 μg，1 562.0 μg，1 360.0 μg，1 305.0 μg溶液，作為對照品貯備液，分別精密量取各對照品儲備液適量，置同一10 mL量瓶中，加70%甲醇制成每1 mL含紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、異歐前胡素分別為422.5 μg，312.4 μg，272.0 μg，261.0 μg的溶液，作為混合對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的配制

取天麻膠囊裝量差異項下的內容物，混勻，研細，取1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20 mL，浸泡過夜，超聲處理40 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

2.3.4 陰性對照溶液的制備

以相同的處方比例制得不含羌活的樣品。按“2.3.3”項下的制備方法制成陰性對照溶液。

2.3.5 系統適用性試驗

分別精密吸取對照品、供試品、陰性對照溶液各10 μL，按“2.3.1”項下色譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖2。由圖2可見，在該色譜條件下，紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、異歐前胡素與其他成分可達到基線分離，分離度大于1.5，陰性無干擾，理論塔板數均在30 000以上，具有良好的分離效果。

圖2 HPLC色譜圖 A-對照品B-供試品C-陰性對照

2.3.6 線性關系考察

精密量取混合對照品溶液1.0 mL，分別置于5 mL、10 mL、50 mL、100 mL的量瓶中，加70%的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，制成系列濃度標準溶液，分別進樣測定，以峰面積(Y)對濃度(X，μg/mL)進行線性回歸，得紫花前胡苷回歸方程為Y=42.257 8X+2.546 2，r=0.999 9，阿魏酸苯乙醇酯回歸方程為Y=27.115 3X+1.224 8，r=0.999 6，羌活醇回歸方程為Y=25.852 9X-2.435 9，r=0.999 9，異歐前胡素回歸方程為Y=30.919 5X-1.886 6，r=0.999 9。結果表明：紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、異歐前胡素分別在4.225～422.5 μg/mL、3.124～312.4 μg/mL、2.720～272.0 μg/mL、2.610～261.0 μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.3.7 精密度試驗

精密吸取同一混合對照品溶液10 μL，按“2.3.1”項下的色譜條件，連續進樣6次，記錄峰面積，計算紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、異歐前胡素峰面積RSD分別為1.22%，0.65%，1.52%，0.87%，結果顯示儀器精密度良好。

2.3.8 重復性試驗

取同一廠家同一批號的天麻膠囊6份，按“2.3.3”項下供試品溶液制備方法制備并依法測定，結果供試品中紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、異歐前胡素含量為0.321 8 mg/粒、0.877 5 mg/粒、0.131 0 mg/粒、0.555 3 mg/粒，RSD分別為1.33%、0.98%、1.56%、1.84%。

2.3.9 穩定性試驗

取同一天麻膠囊供試品溶液，分別于0、8、16、24、36、48 h進樣，進樣6次，記錄峰面積，計算紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、異歐前胡素峰面積RSD分別為1.36%，1.44%，1.56%，1.81%，表明供試品溶液48 h內穩定性良好。

2.3.10 回收率試驗

取已知含量的天麻膠囊(編號20)，共6份，各取0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，均精密加入紫花前胡苷對照品儲備液(1 690.0 μg/mL)0.2 mL、阿魏酸苯乙醇酯對照品儲備液(1 562.0 μg/mL)0.5 mL、羌活醇對照品儲備液(1 360.0 μg/mL)0.1 mL、異歐前胡素對照品儲備液(1 305.0 μg/mL)0.5 mL，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件測定，計算紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、異歐前胡素的含量，計算回收率，結果其回收率平均值依次為紫花前胡苷100.12%(RSD=1.38%，n=6)、阿魏酸苯乙醇酯99.02%(RSD=1.16%，n=6)、羌活醇98.89%(RSD=1.64%，n=6)、異歐前胡素99.45%(RSD=1.05%，n=6)。

2.3.11 樣品含量測定

取表1中的40批樣品，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件測定，計算紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、異歐前胡素的含量，結果見表2。

3 討 論

3.1 按法定標準檢驗結果

按照現行法定標準檢驗，40批樣品均符合所執行的標準規定。

在檢驗過程中，性狀描述內容物為棕色顆粒，結果有個別樣品顏色過深，顏色較深的樣品用棕色描述欠妥。發現薄層色譜鑒別獨活和當歸的專屬性不足，易被羌活的斑點干擾，不能鑒別出是否含有獨活和當歸，因此該方法需要改進。

在檢驗完成后發現，原來粉狀的膠囊內容物開始出現結塊現象，不過鋁塑袋沒有開封的樣品，狀態完好，說明包裝可靠，打開包裝后，要及時服用。

3.2 天麻素的含量測定

40批樣品中每粒含天麻素為0.019～0.323 mg，平均值為0.167 mg，最大值與最小值相差17倍?！吨袊幍洹?020年版一部，天麻項下含量測定項下規定，天麻素和對羥基苯甲醇總量應不得少于0.25%；按照處方，每粒膠囊或片中含有天麻細粉約0.06 g，則規定天麻素含量應不得低于0.10 mg，參考其他制法類似和天麻處方用量類似的制劑，確定每粒含天麻素應不得低于0.10 mg，結果有4批樣品低于天麻素含量限度要求。

3.3 紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇和異歐前胡素的含量測定

羌活為傘形科植物羌活NotopterygiumincisumTingexH.T.Chang或寬葉羌活NotopterygiumfranchetiiH.deBoiss.的干燥根及根莖，羌活油潤，有棕色油點，氣味更為濃烈，寬葉羌活顏色較淺，氣味較淡。查閱相關文獻[13-15]，均指明羌活中羌活醇與異歐前胡素的比值大于1，在寬葉羌活中比值小于1。根據含量測定結果表，18個廠家40批樣品中只有3個廠家計8批樣品使用了質量更好的羌活。

《中國藥典》2020版一部羌活含量測定項下規定，羌活醇和異歐前胡素的總量應不得少于0.40%；按照處方，每粒膠囊中含有羌活細粉0.05 g，按照轉移率實驗的結果，天麻膠囊中羌活醇和異歐前胡素應不得少于0.2 mg/粒，則有20批樣品不合格，不合格率為50%。

40批樣品中每粒含紫花前胡苷為0.003～0.408 mg，平均值為0.183 mg，最大值與最小值相差136倍，表明不同生產企業的產品中紫花前胡苷含量差別極大；未檢出羌活醇的有11批，其中4批未檢出異歐前胡素，2批未檢出阿魏酸苯乙醇酯；另外有1批未檢出阿魏酸苯乙醇酯；其中羌活醇、異歐前胡素、阿魏酸苯乙醇酯均為檢出的樣品有2批。眾多廠家的樣品中沒有羌活醇或許并非都是提取未完全的影響，本研究收集到的羌活飲片中，產于甘肅蘭州和甘肅天水的寬葉羌活飲片羌活醇幾乎未檢出，因此有理由相信11批發現羌活醇含量為零的天麻膠囊中，或許使用了不合格的原料。

4 結 論

按照所執行的標準檢驗，40批天麻膠囊的合格率為100%，顯示市售天麻膠囊的質量情況較好。但是，項目組通過對40批樣品的天麻素、紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇和異歐前胡素含量的測定，發現不同生產企業的天麻膠囊質量差異甚大，產品穩定性、均一性較差。為了更好控制天麻膠囊的質量，建議盡快提升該品種的法定標準。本研究建立的天麻素、羌活醇、異歐前胡素、紫花前胡苷和阿魏酸苯乙醇酯指標成分含量測定的HPLC法簡便、準確、重復性好，可為該制劑的質量標準升級提供參考依據。