瀉白糖漿中杏仁水的質量研究

王 靜，周 軍

（天津市藥品檢驗研究院，天津 300070）

瀉白糖漿為兒童中藥制劑，由石膏、桑白皮、瓜蔞子、葶藶子、麻黃、甘草、前胡、紫菀、款冬花、川貝母、苦杏仁、紫蘇葉油、薄荷腦共十三味藥組成。該品種具有宣肺解熱，化痰止咳的功效。用于傷風咳嗽，痰多胸滿，口渴舌干，鼻塞不通。該制劑收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準》中藥成方制劑第十五冊，現行標準的【制法】項下要求“苦杏仁提取杏仁水備用”。但目前國家標準中沒有統一制備杏仁水的方法，各廠家提取方法各有不同。該制劑中也未對杏仁水制定相關質量標準，經查閱相關文獻發現，苦杏仁中主要有效成分為苦杏仁苷［1-3］，因苦杏仁苷屬芳香族氰苷，其化學名為苯羥基乙氰-β-D-葡萄糖-6-O-β-D-葡萄糖苷，該成分性質不穩定，在β-葡萄糖苷酶或加熱作用下生成葡萄糖和杏仁腈，而杏仁腈可以自發或經羥基腈裂解酶作用產生氫氰酸和苯甲醛［4］。故杏仁水的主要有效成分為苯甲醛和氫氰酸。小劑量氫氰酸對呼吸中樞有鎮靜作用，可以麻痹咳嗽中樞，體現苦杏仁的止咳平喘等效果；而大劑量的氫氰酸進入人體后則發生中毒，氫氰酸系劇毒物質，人體內氰化物急性中毒劑量為0.5～3.5 mg/kg［5］。為了保證兒童用藥的安全有效，本試驗分別建立了苦杏仁苷的檢查方法、氫氰酸和苯甲醛的含量測定方法，以期為完善該制劑的質量標準提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-20AD 高效液相色譜儀；DAD 檢測器；LC Solution 工作站。Agilent 6890N 氣相色譜儀；NPD 檢測器；安捷倫7697A 頂空進樣器。XS205 電子分析天平（瑞士梅特勒公司）。Milli-QA10 型超純水儀（美國Millipore 公司）。

1.2 試藥 苦杏仁苷（中國食品藥品檢定研究院，批號110820-201808，供含量測定用，含量以88.2%計）；苯甲醛（北京曼哈格生物科技有限公司，批號B0002957，供含量測定用，含量以99.8%計）；水中氰標準溶液（中國計量科學研究院，批號21044，供含量測定用，濃度：50.0 μg/ml）；甲醇、乙腈（色譜純，默克股份有限公司）；磷酸（色譜純，天津市贏達稀貴化學試劑廠）；水為Milli-Q 超純水；樣品分別購自A、B、C 3 個廠家共計18 批次。

2 方法與結果

2.1 苦杏仁苷的檢查（HPLC 法）

2.1.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：SHISEIDO CAPCELL PAK C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：以甲醇為流動相A，水為流動相B，按照表1進行梯度洗脫；檢測波長為210 nm，流速：1.0 ml/min；柱溫：40 ℃，進樣量：10 μl。

表1 梯度洗脫程序

2.1.2 溶液的制備

2.1.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取苦杏仁苷對照品適量，加甲醇制成每1 ml 含40 μg 的溶液，即得。

2.1.2.2 供試品溶液的制備 精密量取樣品5 ml，置50 ml 量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm 微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.1.2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方配比，取除苦杏仁外其他藥材，按【制法】項下的工藝制成制劑，再按“2.1.2.2”項下制備方法制得陰性樣品溶液。

2.1.3 測定方法 分別取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果詳見圖1。

2.1.4 樣品測定 對本次抽驗的3 家生產企業共計18 批樣品按照“2.1.2.2”項下供試品溶液制備操作，按“2.1.1”項下色譜條件分析，結果均未檢出苦杏仁苷。

2.2 氫氰酸的含量測定（GC 法）

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：Agilent HP-PLOT/Q（30 m×0.53 mm，40.0 μm）色譜柱；程序升溫：初始溫度100 ℃，保持2 min，以10 ℃/min 的速率升溫至200 ℃，保持2 min。進樣口溫度：220 ℃；檢測器溫度：250 ℃；分流比：1∶1；頂空瓶平衡溫度：85 ℃；平衡時間：30 min。

圖1 對照品（A）A 廠家供試品（B）B 廠家供試品（C）C 廠家供試品（D）陰性樣品（E）HPLC 色譜圖

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對照品溶液的制備 精密吸取對照品溶液1 ml，加水制成每1 ml 中含1 μg 的對照品溶液。

2.2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取本品5 ml，置10 ml 量瓶中，加50%磷酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2.3 陰性樣品的制備 按處方配比，取除苦杏仁外其他藥材，按【制法】項下的工藝制成制劑，再按“2.2.2.2”項下方法制得陰性樣品溶液

2.2.2.4 測定方法 精密量取上述對照品溶液2 ml置于頂空瓶中，快速加入50%磷酸溶液2 ml，密封，搖勻；分別精密量取上述供試品溶液、陰性樣品溶液各4 ml 置于頂空瓶中密封，將上述對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液頂空進樣，記錄色譜圖。結果見圖2。

圖2 對照品（A）供試品（B）陰性樣品（C）空白溶劑（D）HPLC 色譜圖

2.2.3 標準曲線的制備 精密量取水中氰標準溶液，加水分別制成0.005、0.20、0.50、1.00、1.70、2.50 和3.20μg/ml 的對照品溶液，按“2.2.2.4”項下方法進樣測定，以峰面積為縱坐標（Y），濃度為橫坐標（X）繪制標準曲線，回歸方程為Y=89.497 0X-33.239 2（r=0.999 8）。結果表明，氫氰酸在0.005～3.20 μg/ml 濃度范圍內，線性關系良好。

2.2.4 檢出限與定量限 精密量取水中氰標準溶液加水制成0.005 μg/ml 的對照品溶液，并進行測定，按信噪比3∶1 確定檢出限。精密量取水中氰標準溶液加水制成0.015 μg/ml 的對照品溶液，并進行測定，按信噪比10 ∶1 確定定量限。

2.2.5 重復性試驗 取同一批樣品（A 廠家，批號300099）6 份，按照“2.2.2.2”項下方法操作，按“2.2.2.4”項下測定方法進樣測定，樣品中氫氰酸平均值為0.950 5 μg/ml，RSD 為1.9%，符合要求。

2.2.6 精密度試驗 取同一批樣品（A 廠家，批號300099），按照“2.2.2.2”項下方法操作，按“2.2.2.4”項下測定方法進樣測定，連續進樣6 次，測定樣品中氫氰酸峰面積值的RSD 為1.9%，精密度符合要求。

2.2.7 穩定性試驗 取同一批樣品（A 廠家，批號300099），按照“2.2.2.2”項下方法操作，按“2.2.2.4”項下測定方法進樣測定，分別于0、2、4、8、12 和24 h 進樣，測得氫氰酸峰面積的RSD 為1.7%，結果表明，供試品溶液在24 h 內測定穩定。

2.2.8 加樣回收率試驗 取同一批樣品（A 廠家，批號300099）6 份，每份精密量取2.5 ml，加入與供試品中各組分濃度相當的對照品溶液，按“2.2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2.2.4”項下測定方法進樣測定，計算回收率，結果氫氰酸平均回收率為84.06%，RSD 為3.4%。結果見表2。

2.2.9 樣品測定 對本次抽驗的3 家生產企業共計18 批樣品按照“2.2.2.2”項下方法操作，按“2.2.2.4”項下測定方法進樣測定，測定氫氰酸含量。結果見表3。

2.3 苯甲醛含量測定（HPLC 法）

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：OSAKA SODA CAPCELL PAK C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液為流動相B，按表4 進行梯度洗脫；流速：1.0 ml/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：250 nm；進樣量：10 μl。理論板數按苯甲醛峰計算應不低于5 000。

2.3.2 溶液的制備

2.3.2.1 對照品溶液的制備 取苯甲醛對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 ml 含20 μg的溶液，即得。

表2 氫氰酸加樣回收率試驗結果（n=6）

表3 樣品測定結果

表4 梯度洗脫程序

2.3.2.2 供試品溶液的制備 取本品原液濾過，取續濾液，即得。

2.3.2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方配比，取除苦杏仁外其他藥材，按【制法】項下的工藝制成制劑，再按“2.3.2.2”項下方法制得陰性樣品溶液。

2.3.2.4 測定方法 分別取上述對照品溶液、供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果見圖3。

圖3 對照品（A）供試品（B）陰性樣品溶液（C）空白溶劑（D）HPLC 色譜圖

2.3.3 標準曲線的制備 取苯甲醛對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1 ml 含苯甲醛0.391 2、0.978 0、1.956 0、3.912 0、9.780 0、19.560 0、29.340 0、39.120 0、48.90 0 和78.244 0 μg 的系列溶液，分別精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，按“2.3.1”項下色譜條件測定峰面積，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積值為縱坐標，繪制標準曲線并計算回歸方程：Y=6 536 181.351 2X+6 224.320 5（r=1.000 0）。結果表明苯甲醛進樣量在0.003 91～0.782 44 μg 之間，線性關系良好。

2.3.4 重復性試驗 取同一批號樣品（批號300069）6 份，按照“2.3.2.2”項下方法操作，按“2.3.1”項下色譜條件分析，測定，樣品中苯甲醛平均值為12.799 μg/ml，RSD 為0.4%，符合要求。

2.3.5 精密度試驗 取“2.3.4”項下供試品溶液1 份，按“2.3.1”項下色譜條件分析，精密吸取供試品溶液10 μl，連續進樣6 次，測得苯甲醛峰面積值的RSD 為0.6%，精密度符合要求。

2.3.6 穩定性試驗 取“2.3.4”項下供試品溶液1 份，分別于0、2、4、8、12、16、20 和24 h 進樣，按“2.3.1”項下色譜條件分析，測得苯甲醛峰面積的RSD 為1.2%，結果表明，供試品溶液在24 h 內測定穩定。

2.3.7 加樣回收率試驗 取同一批號（300069）樣品6 份，精密量取5 ml，置10 ml 量瓶中，分別精密加入每1 ml 中含苯甲醛對照品31.536 8 μg 的甲醇溶液2 ml，加水稀釋至刻度，搖勻，制得供回收率用的供試品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件分析，計算回收率，結果苯甲醛平均回收率為100.77%，RSD 為0.4%。結果見表5。

2.3.8 樣品測定 對本次抽驗的3 家生產企業共計18 批樣品按照“2.3.2.2”項下方法操作，按“2.3.1”項下色譜條件分析，測定苯甲醛含量。結果見表6。

表5 苯甲醛加樣回收率試驗結果（n=6）

表6 樣品測定結果

3 討論

3.1 瀉白糖漿中的苦杏仁以蒸餾芳香水入藥，理論上不應該含有苦杏仁苷，經查閱并參考相關文獻，本試驗采用高效液相色譜法，采用50%甲醇為提取溶劑［6］，以甲醇-水為流動相［7］，采用梯度洗脫方式進行測定，檢查該制劑中是否存在苦杏仁苷成分，目的是考查3家生產企業的制備工藝是否存在不按【制法】嚴格制備情況。經試驗發現，3 家生產企業均未檢出苦杏仁苷成分，證明不存在苦杏仁直接投料現象。

3.2 苦杏仁苷的最終分解產物為氫氰酸和苯甲醛，理論上兩者含量成正比（摩爾比為1∶1）。氫氰酸的沸點低，極易揮發，且無紫外吸收，含量測定非常困難。經查閱文獻發現，氫氰酸的測定一般多用于食品和司法鑒定方面，有的采用頂空進樣器注入氣相色譜儀進行分離，電子捕獲檢測器進行檢測食品中氰化物含量［8］；有的同樣采用氣相色譜電子捕獲檢測器，利用制品中氰化物在酸性條件下用氯胺T 將其衍生為氯化氫進行測定［9］；有文獻報道采用離子色譜法，電導檢測器測定飲用水中的氰根等陰離子［10］。但本文經過查閱司法相關文獻［11］發現，采用氣相色譜，氮磷檢測器方法，應用磷酸酸化樣品，使氫氰酸釋放出來再進行檢測，該方法相對于氣相色譜-電子捕獲器檢測方法更簡便。經試驗發現，A 廠家均檢出氫氰酸；B 廠家4 批次樣品檢出氫氰酸，2 批次樣品未檢出；C 廠家均未檢出氫氰酸。含量測定結果顯示，氫氰酸的檢出量均很低。

3.3 苯甲醛作為另一個指標成分，從側面能反映氫氰酸的含量，故本試驗對制劑中苯甲醛含量進行測定，結果顯示：3 家生產企業均檢出苯甲醛，但含量差異懸殊，C 企業苯甲醛均檢出，但含量極低，B 企業苯甲醛含量最高。結合氫氰酸含量比較，并未呈現出正比例關系。且根據《中國藥典》一部苦杏仁中苦杏仁苷限度理論推算，與苦杏仁苷分解理論值也相差很大。分析原因可能為：①企業投料苦杏仁質量較差，苦杏仁苷含量極低；②企業制備苦杏仁水未提取完全；③企業制備的杏仁水儲存不當，造成氫氰酸和苯甲醛的揮發。

綜上所述，瀉白糖漿存在一定的質量問題，分析原因可能主要與各企業的杏仁水制備工藝和投料質量控制不嚴有關。建議相關部門加強監管并提升法定標準。本研究建立了苦杏仁苷的檢查方法，氫氰酸和苯甲醛的含量測定方法，可為該制劑的質量標準升級提供參考依據。