HER-2基因拷貝數與胃癌病人術后生存關系分析

宋婷婷 劉寧 宋姍愛 李瀟簫 劉自民 史明鵬

［摘要］ 目的 探討人表皮生長因子受體2（HER－2）陽性胃癌病人HER－2基因拷貝數變化與預后的關系。

方法 將2013年1月—2017年12月在青島大學附屬醫院接受手術治療的HER－2陽性的87例胃癌病人納入本研究。應用二代測序技術檢測HER－2基因拷貝數變化，將拷貝數變化≤15.63者歸為低表達組，＞15.63者歸為高表達組，分析HER－2基因拷貝數變化與臨床病理學參數之間的關系。采用Kaplan－Meier生存曲線、Cox比例風險回歸模型進行生存分析。

結果 HER－2基因拷貝數變化與病人年齡（χ2=5.064，P=0.024）和Lauren分型（χ2=4.744，P=0.029）相關。單因素生存分析顯示，HER－2基因拷貝數變化、Lauren分型、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤程度（T分期）、淋巴結轉移以及TNM分期均與HER－2陽性胃癌病人總生存期相關（χ2=5.058～12.004，P＜0.05）；多因素Cox回歸分析顯示，HER－2基因拷貝數變化為影響胃癌病人OS的獨立預后因素（HR=3.366，95%CI=1.412～8.021，P=0.006）。

結論 HER－2基因拷貝數變化可能成為評判胃癌病人生存期的潛在新型預后指標。

［關鍵詞］ 胃腫瘤；基因，erbB－2；基因劑量；預后

［中圖分類號］ R735.2

［文獻標志碼］ A

［文章編號］ 2096－5532（2023）02－0179－04

doi：10.11712/jms.2096－5532.2023.59.062

［開放科學（資源服務）標識碼（OSID）］

胃癌是癌癥相關死亡的第三大原因，世界上約52%的胃癌病人位于中國。胃癌的發生發展是一個復雜的多步驟過程，涉及表觀遺傳和遺傳變異的多條信號通路，包括拷貝數變化（CNVs）、單核苷酸變異和染色體易位。CNVs是由基因組發生重排導致的，一般指長度為1 kb以上的基因組大片段的拷貝數增加或減少，主要表現為亞顯微水平的缺失和重復。對于晚期胃癌，化療可以延長生存期，但生存率低。人表皮生長因子受體2（HER－2）的發現為胃癌提供了新的治療策略。Ⅲ期臨床研究表明，曲妥珠單抗聯合化療治療HER－2陽性胃癌，與單獨化療相比，病人總生存期（OS）顯著延長。目前鑒定HER－2陽性方法主要為免疫組織化學染色（IHC）和熒光原位雜交（FISH），但這兩種方法也有不足。AN等研究發現，HER－2蛋白水平高于臨界值的病人在曲妥珠單抗治療中的表現優于低值病人。目前關于胃癌HER－2基因CNVs的研究較少。本研究旨在通過檢測HER－2基因CNVs，分析CNVs與臨床病理特征相關性，探討HER－2基因CNVs與OS的關系，為胃癌預后提供新預測指標。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入2013年1月—2017年12月在青島大學附屬醫院接受手術，術后組織標本IHC HER－2 3+的病例資料完整的胃癌病人87例。其中男性72例（82.8%），女性15例（17.2%）；年齡35～87歲，平均（64.5±9.9）歲。

1.2 隨訪方法

對所有納入研究的病人進行隨訪，隨訪截止至2020年4月25日。病人OS定義為從手術日期開始至病人死亡或末次隨訪的時間。

1.3 二代測序（NGS）

1.3.1 文庫制備和測序 將石蠟包埋的腫瘤組織切片（厚5 μm），共制備10張，采用標準提取方法（Qiagen，Valencia，CA）分離DNA，并使用基于PicoGreen的dsDNA（Life Technologies，Carlsbad，CA）檢測定量。將待測DNA用Covaris ME220超聲刀剪切成較短序列的DNA樣品，利用Illumina TruSeq LT試劑（Illumina Inc，San Diego，CA）制備索引測序文庫。使用Illumina Nextseq500/550 測序儀以快速模式進行大規模平行測序。

1.3.2 數據處理 NGS檢測會產生大量的原始序列數據，將這些序列數據進行初級處理，過濾后得到clean data，對clean data進行序列比對精準捕捉基因點突變、缺失、插入、CNVs、結構變異等變異信息。

1.4 統計分析

使用SPSS 25.0軟件進行統計學分析。采用χ2檢驗分析HER－2基因CNVs與臨床病理學參數的關系；采用Kaplan－Meier生存曲線、Cox比例風險回歸模型分析HER－2基因CNVs對OS的影響，采用log－rank檢驗法進行顯著性檢驗。

2 結果

2.1 HER－2基因CNVs與臨床病理特征的關系

以HER－2基因CNVs中位數15.63作為臨界

值，將CNVs≤15.63病人歸為低表達組，CNVs＞15.63的病人歸為高表達組。對兩組病人的臨床病理特征進行比較結果顯示，HER－2基因CNVs與年齡（χ2=5.064，P=0.024）和Lauren分型（χ2=4.744，P=0.029）有關，與其余臨床病理學參數無統計學意義上的相關性（P＞0.05）。見表1。

2.2 生存分析

對87例胃癌病人進行隨訪，其中28例病人死亡。繪制Kaplan－Meier生存曲線分析各臨床病理特征與OS的關系，HER－2基因CNVs與OS相關（χ2=5.070，P=0.024）；進一步進行分層分析顯示，

在腫瘤TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期病人中，HER－2基因CNVs與OS相關（P=0.004）。見圖1～3。此外，Lauren分型、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤程度（T分期）、淋巴結轉移以及TNM分期均與胃癌病人OS相關（χ2=5.058～12.004，P＜0.05）。見表2。將以上因素納入Cox回歸模型進行多因素分析，結果顯示，HER－2基因CNVs為影響病人術后OS的獨立預后因素（HR=3.366，95%CI=1.412～8.021，P=0.006），與CNVs低表達者相比，CNVs高表達者死亡風險更高。見表3。

3 討論

HER－2基因定位于人類染色體17q21，其蛋白是原癌基因C－erbB－2的表達產物，為酪氨酸激酶受體，屬于人表皮生長因子受體（EGFR）家族?；駽NVs與多種人類惡性腫瘤的發生有關。在腫瘤發生過程中，腫瘤增殖基因頻繁擴增，凋亡基因則擴增減少。LABOTS等對1 831例原發性胃癌樣本的研究結果表明，一些已經明確或潛在的抗癌藥物基因靶點顯示出高水平的CNVs，包括HER－2、TUBB3、TOP2A。有研究結果顯示，HER－2蛋白表達陽性與Lauren分型中腸型胃癌相關，同時也與腫瘤部位、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移以及TNM分期顯著相關。還有研究結果表明，HER－2基因擴增與較差的腫瘤臨床病理特征相關，包括腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移以及TNM分期。本文研究結果顯示，HER－2基因CNVs與年齡和Lauren分型相關。

本研究生存分析結果顯示，HER－2基因CNVs與HER－2陽性胃癌病人術后OS有關，且多因素Cox回歸分析提示HER－2基因CNVs是影響OS的獨立預后因素，CNVs高者死亡風險更大。這與有關研究結果一致。然而一項針對1 006例胃癌病人的研究結果顯示，在可手術的胃癌病人中，HER－2蛋白表達情況與預后無關。研究結果不一致的原因可能與HER－2基因檢測方法、入組人群、研究樣本量等因素有關。本研究結果還顯示，Lauren分型、腫瘤分化程度、腫瘤浸潤程度（T分期）、淋巴結轉移以及TNM分期均與胃癌病人OS相關，但這些因素都不是獨立預后因素。

綜上所述，本研究表明HER－2基因CNVs可能成為一種新的預測胃癌預后的指標，然而確切的結論仍需要更大樣本量的前瞻性研究加以證實。

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（本文編輯 馬偉平）