新型gRNA文庫高通量合成技術

2023年3月20日，浙江大學醫學院附屬第一醫院鄭敏教授與張龍教授團隊合作在《核酸研究》（Nucleic Acids Research）在線發表了題為“A new method to synthesize multiple gRNA libraries and functional mapping of mammalian H3K4me3 regions”的研究論文（DOI： 10.1093/nar/gkad198）。

研究報道了一種可逆終止子技術整合入gRNA文庫合成工作的可控模板依賴延伸（CTDE）方法。研究人員將CTDE方法應用于染色質免疫沉淀獲得的組蛋白H3K4me3區域的DNA，構建了大規模的gRNA文庫，篩選并確定了哺乳動物細胞增殖必需位點的功能元件。最后選取一個重要的功能區域進行深入研究，證實了LINC00339內含子中的一個必要位點能夠調節其自身信使RNA的表達，并且該長鏈非編碼RNA是維持HepG2細胞增殖的新型細胞周期調控基因。CTDE方法具有高效率、低成本和可自動化等顯著優勢，可廣泛應用于哺乳動物基因組中功能元件的鑒定和研究。

潘辰、李然、水麗艷博士研究生和肖政云助理研究員為論文第一作者。研究得到國家自然科學基金、浙江省重點研發項目等資助。