老年人群不同性別間淋巴細胞亞群及細胞因子的檢測分析

彭聰,王亮,肖漓,肖軍,張金花,王天天,翟武杰,馬偉鳳,李春暉,湯玉萌,張明,程鵬,謝金鳳,程代玉,孫正中

1.河北北方學院研究生學院,張家口 075000;2.中國人民解放軍總醫院第八醫學中心,a 老年醫學科,b 呼吸與危重癥醫學部研究所 北京市器官移植與免疫調節重點實驗室

隨著增齡與衰老的發展,老年人群不同性別間出現了差異性的免疫系統失調,即存在不同類型的細胞亞型及細胞因子的表達異常。研究[1-2]發現,與免疫系統相關的多種疾病中,結核、潰瘍性結腸炎、銀屑病、乙型肝炎及其他感染性疾病均不同程度體現了男性人群多發;而自身免疫性肝炎、幽門螺桿菌感染及系統性紅斑狼瘡則表現為女性高發[3-4]。老年人群性別間的免疫差異評價對預測不同性別存在的危險因素及疾病發展、探討老年人群不同性別間的機體差異及免疫衰老等十分重要。本文對老年人群不同性別間淋巴細胞亞群+細胞因子進行檢測與分析,為老年患者診療及科研,提供更多角度的研究。

1 資料與方法

1.1 研究資料 回顧性分析2021年12月23日至2022年3月24日于中國人民解放軍總醫院第八醫學中心老年醫學科就診的109例患者病歷資料。記錄既往病史(高血壓、糖尿病、冠心病、惡性腫瘤、骨折、急危重癥病史、輸血史、免疫功能缺陷等),年齡,性別,身高,體重,體重指數(BMI)。按性別分為男性組57例,女性組52例。2組患者身高、體重比較,差異有統計學意義(P<0.05)。2組年齡、體重指數(BMI)比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。見表1。本研究通過中國人民解放軍總醫院第八醫學中心倫理審查委員會批準。

表1 2組患者一般情況比較

1.2 納入與排除標準 納入標準:患者為大于60歲的老年人群。排除標準:(1)既往存在以骨性損害為特征的骨科疾病;(2)原發性免疫功能障礙性疾病、獲得性免疫功能缺陷性疾病、血液系統疾病、精神障礙疾病、3個月內存在重型感染或異體輸血;(3)惡性腫瘤及主要臟器功能衰竭或器官移植患者;(4)1年內服用免疫調節制劑及糖皮質激素或其他激素補充治療的患者等。

1.3 淋巴細胞亞群檢測 將20 μL淋巴細胞亞群檢測試劑(CD3/CD8/CD45/CD4/CD16+56/CD19)加到絕對計數管的底部;采用反向移液法吸取50 μL充分混勻的EDTA抗凝全血,加入到絕對計數管底部;震蕩混勻后室溫避光孵育15 min;每管加入450 μL溶血素(FACS Lysing solution：蒸餾水=1：10),充分混勻后,室溫避光孵育15 min;利用FACS Canto Plus流式細胞儀(美國BD)獲取和分析淋巴細胞亞群百分比和絕對數。

1.4 細胞因子檢測 采用流式細胞術檢測,向樣品管中加入25 μL實驗緩沖液,再加入25 μL血漿和25 μL檢測抗體;再加入25 μL捕獲微球抗體;室溫[(25±1)℃]避光震蕩孵育2 h(400～500 r/min);加入25 μL SA-PE;室溫[(25±1)℃]避光震蕩孵育0.5 h(400～500 r/min);加入500 μL 1×洗滌緩沖液,渦旋數秒,300～500 g離心5 min,緩慢傾倒出液體,倒扣于吸水紙上;根據FACS Canto Plus流式細胞儀(美國BD)需求,向每管中加入120 μL洗滌緩沖液;渦旋10 s將微球重懸后立即上機檢測,檢測后數據導入LEGEND plex v8.0軟件進行分析獲取。

2 結果

2.1 2組淋巴細胞亞群比較 男性組中自然殺傷細胞(NK細胞)百分比顯著高于女性組(P=0.01),而女性組中B細胞百分比與絕對值顯著高于男性組(P<0.001),其余細胞亞群差異均無統計學意義。見表2。

表2 2組患者淋巴細胞亞群的比較[M(P25,P75)]

2.2 2組細胞因子比較 2組白細胞介素、干擾素等細胞因子比較,差異無統計學意義(P>0.05)。

3 討論

本研究顯示,在男性人群中NK細胞比例顯著高于女性組,NK細胞是一類大顆粒淋巴細胞,廣泛存在于人體外周組織中,可以分化為具有各種功能的亞型[5-6];NK細胞也可行使防御感染、破壞腫瘤細胞等功能,car-NK細胞治療就是基于其存在的免疫學機制[7];NK細胞是無須預刺激就可直接溶解破壞腫瘤細胞或感染細胞;NK細胞通過各種途徑[8-10]降解靶定細胞的細胞膜,破壞靶細胞完整性,進而發揮溶細胞效應。因此,老年女性人群因其NK細胞較老年男性人群更低,導致NK細胞介導的多種反應活動下降,這致使老年女性會進一步暴露在NK細胞介導的免疫反應中,如感染、腫瘤發生以及獲得性免疫反應失調等。

本研究中,老年女性組B細胞絕對值與比例顯著高于老年男性組,B淋巴細胞來源于骨髓多能干細胞,其主要分布在淋巴結皮質淺層淋巴小結和脾臟淋巴小結,B淋巴細胞在抗原刺激下可進一步分化為漿細胞,漿細胞可合成和分泌抗體,B淋巴細胞在機體內主要參與各種免疫活動。研究表明,人類B淋巴細胞百分比和數量隨著年齡的增長而顯著降低[11-12]。B細胞通常被分為B1與B2亞型,B2細胞通常參與體液免疫應答,而B1細胞則在機體內出現較早,且不依賴于骨髓細胞,產生后會進一步成為具有自我更新能力的長壽細胞,B1細胞本身就能產生多種自身抗原的抗體,故多與自身免疫性疾病相關[13]。B2細胞及通常意義的B細胞,在抗原刺激及Th細胞輔助下被活化為B細胞,行使體液免疫功能,B2細胞還具有抗原提呈和免疫調節功能[14]。因此,B淋巴細胞增殖異?？赡芙閷Р煌后w在抗原提呈功能、免疫調節功能、自身免疫性疾病誘發功能、黏膜免疫應答功能等方面失調,進一步使人群暴露于各種高發及易感風險中。

綜上所述,本研究通過比較老年人群不同性別之間的免疫衰老后的失調,觀察到了不同性別的老年人所暴露的危險因素不盡相同,而這些可以被觀察到的失調差異表達,可進一步指導我們評價老年人群的免疫風險及患病風險。