食蟹猴B 病毒感染及其血液指標變化情況分析

黎湘娟 唐艷霞 韋瑩 陳立軍*

（1.廣西衛生職業技術學院，廣西 南寧 530023；2. 南寧海關技術中心，廣西 南寧 530028）

猴B 病毒（B virus，BV），也稱獼猴皰疹病毒Ⅰ型（Cercopithecine Herpesvirus Ⅰ），是一種人畜共患病原，BV 感染在猴群中非常多見，主要以食蟹猴和恒河猴為自然宿主，感染率在10%-60%之間［1］，感染動物可傳染給其他動物。猴群感染BV 后的癥狀并不明顯，但是當人感染BV 后，會出現中樞神經系統疾病，嚴重者會導致死亡。2021 年4 月中國記載第1 例人感染BV 死亡病例［2］。BV 感染常成隱性感染，具有潛伏期長的特點，這不僅易導致猴群感染率增高，同時也增加從業人員或是實驗人員感染的風險，因此對猴群開展BV 感染的檢測對于猴群質量的監控以及保障相關從業人員的生命健康都具有十分重要的意義。血液學指標不僅是評估試驗動物健康狀況的監測指標，也是反應其生理、病理變化的重要參考指標。目前，有關食蟹猴BV 感染后血常規及血液生化的研究報道較少，在1997 年報道的患病食蟹猴病例中，提到白細胞減少和低蛋白血癥［3］。國內研究曾對安徽恒河猴感染BV 后相關的血液檢測指標進行比較［4］，但研究的猴群及數量較有限。目前大部分猴的血常規及生化指標研究僅局限于健康猴群，故本研究旨在了解試驗動物食蟹猴感染BV 的情況，對其血常規、生化指標進行測定，探討感染BV 后引起血液相關指標變化的情況，為食蟹猴健康養殖提供參考。

1 方法

1.1 試驗動物

2019 年9 月至2020 年5 月，采用隨機抽樣的方法，在廣西試驗猴養殖企業內隨機采集食蟹猴血樣本682 份。在食蟹猴清醒空腹狀態下，在每只后肢靜脈采血5 mL，其中抗凝血2 mL，用于血常規檢測；非抗凝血3 mL，用于生化指標檢測。

1.2 檢測方法

1.2.1 猴BV 檢測

采用斑點酶免疫法（DIA）檢測猴血清BV 抗體。試劑盒由廣州瑞姆生物科技有限公司提供，規格96 T。操作方法按說明書進行，判斷標準為：病毒抗原點顏色與弱陽性對照顏色深度相同或更深，則判為陽性；若病毒抗原點顏色比弱陽性對照略淺，則判為可疑；若病毒抗原點無色或顏色很淺，判為陰性?？梢蓸吮拘柽M行重復性試驗。若仍為可疑，則可判為陽性。

1.2.2 血常規檢測

在采血后2 h 內，使用日本森美康醫用電子有限公司的自動血液分析系統XN-10 對抗凝血學進行白細胞計數（WBC）、紅細胞計數（RBC）、血紅蛋白（HGB）、紅細胞比容（HCT）、紅細胞平均體積（MCV）、平均血紅蛋白量（MCH）、平均血紅蛋白濃度（MCHC）、淋巴細胞數（LYMPH）、淋巴細胞百分比（LYMPH %）、中性細胞數（NEUT）、中性粒細胞百分比（NEUT%）、單核細胞數（MONO）、單核細胞百分比（MONO%）、嗜酸性粒細胞數（EO）、嗜酸性粒細胞百分比（EO%）、嗜堿性粒細胞數（BASO）、嗜堿性粒細胞百分比（BASO%）、血小板（PLT）、血小板比容（PCT） 19 項指標的檢測。

1.2.3 血清生化檢測

將非抗凝血按3000 r/min 離心10 min 后，分離血清，采用貝克曼庫爾特實驗系統有限公司生產的全自動生化分析儀AU5800 進行丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉移酶（AST）、AST/ALT 比值、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）、Y-谷氨?；D移酶（GGT）、總膽紅素（TBIL）、肌酐（CREA）、尿酸（UA）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（CHOL）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）14 項指標檢測。

1.3 統計學分析

用SPSS 軟件進行方差齊性檢驗，用t 檢驗及二分類logistic 回歸進行分析，P ＜0.05 為有統計上的差異。

2 結果

2.1 一般生理情況

682 只食蟹猴的年齡在2~8 歲之間，平均年齡為3.48±0.85 歲；平均體重為2.6±0.56 kg，其中雄性337 只，雌性345 只。

2.2 BV 抗體檢測結果

在采集682 只食蟹猴的血液樣本中，BV 抗體陽性為66 只，總陽性率為9.68%。其中幼兒組（≤3歲）猴群的陽性率最低，其陽性率依次以年齡遞增。不同年齡食蟹猴BV 抗體篩查結果見表1。

表1 不同年齡食蟹猴BV 抗體篩查結果

2.3 血液指標比較

66 只BV 抗體陽性的食蟹猴與616 只健康食蟹猴的血常規及血清生化等33 項血液指標相比，BV 陽性食蟹猴指標比健康猴群高的有ALT、AST、AST/ALT、TBIL、CREA、CHOL、HDL7項，其中TBIL 差異顯著（P ＜0.05）?？贵w陽性食蟹猴指標比健康猴群降低的有WBC、HGB、MCH、LYMPH、LYMPH%、MONO、MONO%、NEUT、NUET%、ALB、UA、TG、ALP、GGT、LDL15項，其中MONO 差異顯著（P ＜0.05）。其余11 個檢測項目在兩者間沒有差異。BV 抗體陽性與健康食蟹猴的血液指標對比情況見表2。

表2 BV 抗體陽性與健康食蟹猴的血液指標對比情況

2.4 二分類logistic 回歸分析

將BV 抗體陽性作為因變量（1=陽性，0=陰性），將年齡、性別、體重及血常規、生化指標等33 個變量，通過二分類Logistic 回歸分析顯示，年齡和總膽紅素對該模型具有統計學意義。年齡是猴群感染BV 的風險因子。BV 感染后，食蟹猴血清總膽紅素顯著升高。BV 抗體陽性食蟹猴與健康食蟹猴二分類Logistic 回歸分析見表3。

表3 BV 抗體陽性食蟹猴與健康食蟹猴二分類Logistic 回歸分析

3 討論

BV 同人的單純性皰疹病毒相近，猴群感染后呈皰疹樣口炎的癥狀，一般于1-2 周內自愈；但人類感染B 病毒后可引起較嚴重的癥狀，產生致死性腦炎或上行性腦脊髓炎。既往流調結果顯示，國內各地養殖場猴群BV 抗體陽性率為23.11%至55.6%。1994 年廣東地區試驗恒河猴BV 抗體陽性率為23.8%［5］，2007 年該省某個養殖中心的恒河猴BV 抗體陽性率已上升至55.6%［6］。2010 年云南昆明靈長類研究中心人工飼養獼猴BV 抗體陽性率為23.11%［7］。2017 年安徽省實驗獼猴陽性率為36.5%［8］。2003~2008 年來自中國7 個地區食蟹猴BV 抗體陽性率（43.49%）高于恒河猴（38.33%）［9］。不同地區養殖食蟹猴BV 陽性率也有不同的波動。1991~1996 年廣西飼養食蟹猴BV 抗體陽性率為39.09%［10］。2007~2011 年柬埔寨的飼養食蟹猴陽性率為33.92%［11］。2008 年從馬來西亞進口的野生食蟹猴BV 抗體陽性率高達68.5%［12］。本研究的人工飼養食蟹猴BV 抗體陽性率僅為9.68%，均低于之前的調查結果，與本研究前期抽查的結果一致［13］。國外研究者用PCR 方法在2009~2011 年對馬來西亞392 只野生長尾猴進行檢測，共檢出154 只陽性猴，陽性率為39.29%［14］。泰國研究者于2020~2021 年對野生長尾猴常見傳染病的病原進行檢測，但未能監測到BV［15］。猴被BV感染后，一般終生攜帶抗體，抗體陽性代表猴已被感染或是曾被感染。

肝功能檢查是反映肝臟生理功能的檢測項目。猴感染BV 后，病毒在粘膜上皮細胞進行復制，形成初發感染，在臨床癥狀出現之前有4-6 天的潛伏期，進而在皮膚內或局部如肝臟出現炎癥病變。處在潛伏期的病毒可被激活，大量復制，引起繼發性肝損傷或明顯的皮膚病變［16］?？贵w陽性食蟹猴的肝功能指標出現升高的有ALT、AST、AST/ALT、TBIL、CREA、CHOL、HDL7 項，尤其是AST/ALT的比值，均大于1。在血清檢測中，反映肝功能損傷嚴重程度的是總膽紅素和凝血功能，總膽紅素越高，凝血功能越低，往往提示肝臟損傷越嚴重，有重型肝炎、肝壞死的傾向。本研究的總膽紅素在兩組比較中具有統計學意義，推測本研究的BV 抗體陽性食蟹猴肝功能損傷較嚴重。

血清總蛋白和白蛋白檢測通常反映慢性肝損害狀況，亦反映肝實質細胞的儲備功能［16］。在本研究中，抗體陽性食蟹猴猴群的生化功能指標出現降低的有ALB、UA、TRIG、ALP、GGT、LDL等6項，提示陽性猴群中的肝臟合成及代謝功能可能出現障礙。但既往研究顯示，感染BV 的恒河猴除AST、BUM、CHOL 3 項指標外，其他生化指標均高于健康恒河猴群［4］，故推測檢測結果是否與猴群種屬的差異有關。

在既往研究中，單純性皰疹病毒感染會引起人的轉氨酶水平升高，同時伴有白細胞減少及血小板減少癥［16］。本研究的猴群血常規指標僅出現白細胞群減少，其中單核細胞在兩者比較中具有統計學意義，但并未出現血小板減少的現象。推測可能是B病毒入侵后，單核細胞為了轉變巨噬細胞實行吞噬病毒的功能而遷移到組織，造成外周血單核細胞計數減少，進而導致抗體陽性猴群的體內免疫功能下降。反之，單核細胞減少可增加猴群復發感染的可能性。

本研究經Logistic 回歸分析顯示，年齡和總膽紅素含量與食蟹猴感染BV 有顯著相關性。BV 抗體陽性食蟹猴的平均年齡為3.84±1.04 歲，高于健康猴群（3.44±0.81 歲）。既往研究［7，12］表明，隨著年齡的增長，獼猴、食蟹猴的BV 感染率越高，其陽性率與年齡呈正相關關系。本研究結果也驗證了同樣的趨勢，幼兒組的食蟹猴抗體陽性率僅為7.17%，而大于4 歲的食蟹猴陽性率高達18.39%，提示年齡是食蟹猴感染BV的危險因素。感染BV后，猴的總膽紅素明顯升高，總膽紅素是反映其病情變化勢態的重要監測指標。

本研究初步探索BV 抗體陽性的食蟹猴與健康食蟹猴猴群之間血常規及血清生化指標的差異性，為相關的試驗研究提供基礎數據。將來仍需進一步的橫斷面及隊列研究，探討其病毒DNA 含量、病程對血液指標及免疫力影響的相關性研究。