紫果西番蓮頂枯病病原菌生物學特性分析及室內殺菌劑毒力測定

黃艷花 崔忠吉 蒙成 歐善生 鐘琪斌

（廣西農業職業技術大學，廣西 南寧 530007 ）

紫果西番蓮，學名雞蛋果（Passiflora edulia Sims），又名百香果，是西番蓮科西番蓮屬的草質藤本植物。原產安的列斯群島，廣植于熱帶和亞熱帶地區。植株壽命約20 年，經濟壽命約8~10 年?；ㄆ? 月，果期11 月。果可生食或作蔬菜、飼料。入藥具有興奮、強壯之效。果瓤多汁液，加入重碳酸鈣和糖，可制成芳香可口的飲料，還可用來添加在其他飲料中以提高飲料的品質。種子榨油，可供食用和制皂、制油漆等?；ù蠖利?，沒有香味，可作庭園觀賞植物。紫果西番蓮具有“果汁之王”“搖錢樹”等美稱。［1］因其種植周期短、產生效益快，近年來被選擇作為廣西部分地區鄉村振興產業進行開發。隨著種植規模不斷擴大，紫果西番蓮莖基腐病、炭疽病、病毒病和蚜蟲等病蟲危害也日趨嚴重，加之管理不當、技術欠缺，已嚴重影響紫果西番蓮 產業健康發展。紫果西番蓮頂枯病病原菌為暹羅炭疽菌 （Colletotrichum siamense）。發病初期引起西番蓮頂芽壞死，病斑逐漸由頂端向下擴展，枝條由頂端向下干枯壞死，嚴重時整株枯死。該病害在廣西11 月發病較重，最高發病率可達49.5%，造成大面積死芽枯枝，嚴重影響產量。［2］紫果西番蓮頂枯病已對紫果西番蓮產業可持續發展造成嚴重威脅，因此迫切需要掌握其病原菌生物學特性，并篩選出高效防治殺菌劑，為大面積科學防控提供參考依據。

暹羅炭疽菌是膠孢炭疽菌（C.gloeosporioides）復合物的物種之一［3］，其可與其他炭疽菌混合引發鵝掌柴、荔枝、油茶、南天竹、紫山藥、紅瑞木和灑金珊瑚等多種植物炭疽?。?-10］，也可獨立引發多穗柯、棕竹、楊桃、菠蘿蜜、百日草、大葉黃楊、紅肉蘋果等多種植物炭疽?。?，11-16］及多肉植物青星美人黑腐?。?7］。張艷婷［18］研究認為，引起草莓莖基腐病的主要病原菌為暹羅炭疽菌；解小鋒等［19］研究明確引起棗炭疽病的病原菌為暹羅炭疽菌；徐丹丹等［20］認為，廣東咖啡炭疽病的優勢病原菌為果生炭疽菌（C. fructicola）和暹羅炭疽菌。在暹羅炭疽菌生物學特性研究方面，羅敦文［21］研究發現，菠蘿蜜蒂腐病菌（C. siamense）菌絲生長適宜環境條件為：PDA 和查彼培養基，溫度28℃，pH 值7.0，碳源為葡萄糖、阿拉伯糖、麥芽糖和果糖，氮源為酵母浸粉和牛肉浸膏，病原菌菌絲致死溫度為59℃處理10 min；劉在哲等［16］研究認為，紅肉蘋果炭疽病菌菌絲生長適宜環境條件為：PSA和SDA 培養基，溫度25~30℃，pH 值8.0~10.0，持續光照或黑暗交替；王芳等［17］研究表明，最適青星美人黑腐病菌菌絲生長溫度為30℃，pH 值為5.0，碳源為麥芽糖，氮源為酵母浸膏，光暗交替，最適病原產孢條件溫度為30℃，pH 值為7.0，碳源為麥芽糖，氮源為蛋白胨，連續黑暗。在藥劑防治研究方面，宋慧云等［11］研究表明，98.4%多菌靈、97%吡唑醚菌酯和98%福美雙可作為防治多穗柯炭疽病的化學殺菌劑；羅敦文［21］研究認為，50%咪鮮胺錳鹽對菠蘿蜜蒂腐病病原菌抑制作用較強；王志華等［22］研究指出，多菌靈可濕性粉劑和苯醚甲環唑水分散粒劑對金森女貞炭疽病的抑制作用最強。紫果西番蓮頂枯病是2022 年國內首次報道的新病害［2］，目前針對其生物學特性及室內防治藥劑篩選的研究尚無文獻報道。本文采用菌絲生長速率法和孢子計數法分析不同培養條件對紫果西番蓮頂枯病病原菌菌絲生長和產孢量的影響，以菌絲生長速率法對12 種殺菌劑進行室內毒力測定，旨在掌握該病原菌生長條件并篩選出防治高效的化學殺菌劑，為紫果西番蓮頂枯病防控提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試菌株：紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌（C.siamense），由廣西農業職業技術大學植物病理學實驗室分離、鑒定及保藏。

供試殺菌劑：供試藥劑12 種，分別為咪唑類咪鮮胺（450 g/L 水乳劑，上海滬聯生物藥業（夏邑）股份有限公司）、甲基硫菌靈（70%可濕性粉劑，江蘇龍燈化學有限公司）、抑霉唑（20%水乳劑，一凡生物科技集團有限公司）；三唑類丙環唑（25%乳油，招遠三聯化工廠有限公司）、苯醚甲環唑（10%水分散粒劑，先正達南通作物保護有限公司）；苯并咪唑衍生物類多菌靈（50%可濕性粉劑，四川潤爾科技有限公司）；有機硫類殺菌劑乙蒜素（80%油劑，南陽新臥龍生物化工有限公司）；吡咯類殺菌劑腈菌唑（40%懸浮劑，一凡生物科技集團有限公司）；取代苯類殺菌劑百菌清（75%可濕性粉劑，山東大成生物化工有限公司）；三唑類與甲氧基丙烯酸酯類復配的苯甲·吡唑酯（40%懸浮劑，江蘇云農化工有限公司）；三唑類與咪唑類復配的苯甲·咪鮮胺（20%微乳劑，山東中新農生物科技有限公司）；甲氧基丙烯酸酯類與三唑類復配的肟菌·戊唑醇（75%水分散粒劑，山東榮邦化工有限公司）。

供試儀器：供試培養箱為韶關市泰宏醫療器械有限公司生產的珠江牌生化培養箱，型號：LRH-250 A。

1.2 病原菌生物學特性分析

1.2.1 病原菌菌絲生長、產孢及孢子萌發對不同pH的適應性

參照閃瑤等［23］方法并略加修改，分別配置1.0 mol/L HCl、1.0 mol/L NaOH 和PDA 培養基并滅菌，在無菌條件下用HCl 和NaOH 把PDA 培養基的pH 分別調為2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0 共11 個梯度，倒入培養基平板，待冷卻后將直徑6.0 mm 的病原菌菌餅接種于不同pH 值平板中央，每處理4 次重復，28℃黑暗培養。4 d 后采用十字交叉法測量菌落直徑，10 d 后每皿用10 mL 無菌水配制孢子懸浮液，用血球計數板統計產孢量［24］（下同）。用上述配置已滅菌好的HCl 和NaOH 在無菌條件下將無菌水的pH 值調至2.0~12.0，分別用不同pH 值的無菌水加在相同條件下培養10 d的病原菌菌落配制成孢子懸浮液，用不同pH 值的孢子懸浮液涂抹在相應pH 值的PDA 培養基平板上，置28℃恒溫培養7 h，顯微鏡下觀察孢子萌發情況，芽管長度達分生孢子、寬度計為萌發，每處理連續統計孢子100 個以上，4 次重復，用計數器統計分生孢子在上述不同pH 值條件下的萌發率。

1.2.2 病原菌菌絲生長、產孢及孢子萌發對不同溫度的適應性

參照梁萍等［24］方法并略加修改，在PDA 平板上培養4 d 的菌落邊緣用直徑為6 mm 的打孔器取菌餅，將菌餅接種于PDA 培養基中央，分別置于不同溫度（4℃、8℃、12℃、16℃、20℃、24℃、28℃、32℃、36℃、40℃）恒溫培養箱中培養，每個溫度4 次重復。參照1.2.1 方法測量菌落直徑及產孢量；參照方中達［25］方法采用瓊膠平板表面萌發法測定孢子萌發率，用滅菌水將孢子洗刷下來后，調制成濃度為5.00×106個/mL 孢子懸浮液，把孢子懸浮液均勻涂抹在水瓊脂培養基平板上［18］，置28℃條件培養7 h，顯微鏡下觀察孢子萌發情況，芽管長度達分生孢子寬度計為萌發，每處理連續統計孢子100 個以上，用計數器統計萌發率，每處理4 次重復（下同）。

1.2.3 病原菌菌絲生長、產孢對不同光照的適應性

參照蒙成等［26］方法并略加修改，將6 mm 病原菌菌餅分別接種于PDA 培養基平板中央，進行全暗（0 lx）、12 h 光暗交替（150 lx）、12 h 光暗交替（200 lx）、12 h 光暗交替（300 lx）、連續光照（300 lx）5 種光照環境處理。全黑暗處理使用4 層錫箔紙包裹遮光。每處理4 次重復，置28℃人工氣候箱培養4 d，測量菌落直徑，培養10 d 測定產孢量。

1.2.4 病原菌菌絲生長、產孢對不同碳源的適應性

參照閃瑤等［23］方法并略加修改，用等質量葡萄糖、山梨醇、麥芽糖、甘露醇、乳糖、可溶性淀粉、D-木糖、甘油8 種碳源分別置換Czapek 培養基（硝酸鈉3.0 g、磷酸氫二鉀1.0 g、硫酸鎂0.5 g、氯化鉀0.5 g、硫酸鐵0.01 g、蔗糖30.0 g、瓊脂20.0 g、水1000.0 mL）中的蔗糖，配制成不同碳源培養基。設無碳源培養基為對照。將6 mm 病原菌菌餅分別接種于上述培養基平板中央，每處理4 次重復，置28℃培養箱培養4 d 測量菌落直徑，觀察記錄菌落形態特征。10 d 計算產孢量。

1.2.5 病原菌菌絲生長、產孢對不同氮源的適應性

參照閃瑤等［23］方法并略加修改，用等質量酵母粉、牛肉浸膏、甘氨酸、蛋白胨、L-精氨酸、L-丙氨酸、尿素、L-賴氨酸8 種氮源分別代替Czapek培養基的硝酸鈉，配制不同氮源培養基。設無氮源培養基為對照。將6 mm 病原菌菌餅分別接種于上述培養基平板中央，每處理4 次重復，置28℃培養箱培養4 d 測量菌落直徑，觀察記錄菌落形態特征。10 d 計算產孢量。

1.2.6 病原菌菌絲生長、產孢對不同培養基的適應性

參照梁萍等［24］方法并略加修改，制備6 種培養基。馬鈴薯葡萄糖培養基（PDA）：馬鈴薯200.0 g、葡萄糖20.0 g、瓊脂20.0 g、水1000.0 mL；馬鈴薯蔗糖培養基（PSA）：馬鈴薯200.0 g、蔗糖20.0 g、瓊脂20.0 g、水1000.0 mL。玉米粉培養基（CMA）：玉米粉30 g，瓊脂20 g，水1000 mL。汁液培養基（西番蓮汁液）：健康新鮮西番蓮枝葉200.0 g，水熬煮30 min，瓊脂20.0 g，水1000.0 mL。燕麥培養基（OA）：燕麥片30.0 g、瓊脂20.0 g、水1000.0 mL）；瓊脂培養基（WA）：瓊脂15.0 g，水1000.0 mL。6 種培養基pH 自然。將6 mm 病原菌菌餅分別接種于上述培養基平板中央，每處理4 次重復，置28℃培養箱培養4 d 測量菌落直徑，觀察記錄菌落形態特征。10 d 計算產孢量。

1.3 防治殺菌劑室內毒力測定

參照劉俏等［27］方法并略加修改，采用菌絲生長速率法測定殺菌劑對病原菌抑制效果。經3 次預試驗，確定各殺菌劑的梯度濃度。在無菌操作條件下，將12 種殺菌劑按照倍數法稀釋成不同濃度母液；再從每個倍數的母液中吸取1.0 mL 藥液加入至99.0 mL 的55℃、無菌PDA 培養基中制作成含藥培養基。殺菌劑終濃度見表1。以不加殺菌劑的PDA培養基作為對照。充分搖勻后倒入直徑9 cm 培養皿中，每皿15.0 mL。待皿內培養基凝固后，在其中央接種直徑6 mm 的供試病原菌菌餅。每處理4 次重復。28℃培養箱暗培養4 d 后采用十字交叉法測量菌落直徑，計算各殺菌劑對菌絲體生長的相對抑制率。

表1 供試殺菌劑及其處理濃度

菌落直徑＝測定菌落直徑-菌餅直徑

相對抑制率（%）＝（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100%

采用Excel 2010、DPS 7.0 和SPASS 16.0 進行統計分析。將殺菌劑質量濃度（μg/mL）轉換成以10為底的對數值（x），菌絲生長相對抑制率換算成幾率值（y），以濃度對數值為橫坐標，以相對抑制率幾率值為縱坐標，作毒力回歸直線，計算毒力回歸方程（y＝ax ＋b）和相關系數（r）， 根據回歸方程計算出抑制中濃度EC50值。毒力回歸方程能有效反應該藥劑質量濃度與抑菌效果的關系，EC50即抑制或殺死50%的目標菌所需要的殺菌劑濃度，是衡量殺菌劑毒力的最可靠標準，用EC50值可以對不同種類的殺菌劑毒力大小進行互相比較。［28］

2 結果與分析

2.1 紫果西番蓮頂枯病病原菌生物學特性

2.1.1 病原菌菌絲生長、產孢及孢子萌發對不同pH值的適應性

紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌菌絲在值為2.0 時不生長；pH 值為3.0~12 時均能生長；在pH 值為5.0~9.0 時生長較快，菌落直徑達77.38~83.50 mm。各處理間差異不顯著（P＞0.05，下同），但均極顯著高于其他pH 值條件下的菌落直徑（P＜0.01，下同），其中pH 值為6.0 時菌落直徑最大，為83.50 mm，且顯著高于pH 值為5.0、7.0和8.0 的菌落直徑（P＜0.05，下同），但與pH 值為9.0 時的菌落直徑差異不顯著。pH 值為9.0 時的菌落直徑與pH 值為5.0、7.0 和8.0 的菌落直徑也無顯著差異。在pH 值為4.0 時菌絲生長較快，其菌落直徑為67.00 mm，極顯著高于pH 值為11.0、12.0和3.0 時的菌落直徑?？梢?，紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌菌絲在pH 值為3.0~12.0 均能生長，以pH 值為5.0~9.0 為菌絲生長的較佳范圍（圖1）。

圖1 病原菌菌絲生長、產孢及孢子萌發對不同pH 的適應性

病原菌在pH 值為2.0 時不能產孢；在pH 值為7.0 和8.0 時產孢量較多，產孢量分別為53.72×104個/mL 和54.32×104個/mL，二者間差異不顯著，但均顯著高于其他pH 值條件下的產孢量；在pH 值為9.0 時產孢量也較多，且顯著高于除pH 值為7.0和8.0 外其他pH 值條件下的產孢量。說明紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌在pH 值為3.0~12.0均能產孢，而pH 值7.0 和8.0 為較佳產孢量范圍（圖1）。

病原菌孢子在pH 值為2.0 時萌發受到嚴重抑制，孢子萌發率為0.07%。在pH 值為5.0~10.0 時孢子萌發率較高，為90.20%~93.13%，處理間差異不顯著，但均顯著高于其他pH 值條件下的孢子萌發率。在pH 值為11.0 時孢子萌發率也較高，且顯著高于pH 值為12.0、4.0、3.0 和2.0 條件下的孢子萌發率。說明紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌孢子在pH 值為2.0~12.0 時均能萌發，而pH 值為5.0~10.0 為較佳孢子萌發范圍（圖1）。

2.1.2 病原菌菌絲生長、產孢及孢子萌發對不同溫度的適應性

暹羅炭疽菌菌絲在溫度為4℃、40℃時不生長，8℃時生長嚴重受阻，12~36℃時均能生長，8~28℃時生長速度與溫度度數成正比，28~36℃時生長速度與溫度度數成反比。28℃時生長較快，菌落直徑為88.00 mm，極顯著高于其他溫度條件下的菌落直徑；24℃時菌落直徑為82.00 mm，極顯著高于除28℃外其他溫度條件下的菌落直徑?？梢?，紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌菌絲在溫度為12~36℃均能生長，以溫度28℃為菌絲生長較佳溫度（圖2）。

圖2 病原菌菌絲生長、產孢及孢子萌發對不同溫度的適應性

病原菌在溫度為8℃、40℃時不產孢，12~36℃時均能產孢，28℃時病原菌產孢量較多，產孢量為53.72×104個/mL，極顯著高于其他溫度條件下的產孢量；32℃、24℃、36℃時產孢量分別為24.84×104個/mL、20.40 ×104個/mL、13.75×104個/mL；32℃與24℃時的產胞量差異不顯著，與36℃時產孢量有顯著性差異；24℃與36℃時產孢量無顯著性差異，三者均顯著高于除28℃外其他溫度條件下的產孢量?？梢?，紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌在溫度為12~36℃時均能產孢，較佳產孢溫度為28℃（圖2）。

病原菌孢子在溫度為8℃時不能萌發；12~40℃時均能萌發；20~36℃時病原菌孢子萌發率較高，萌發率為91.52%~97.08%，極顯著高于其他溫度條件下的萌發率；16℃時病原菌孢子萌發率為73.44%，極顯著高于溫度為12℃和40℃時的孢子萌發率。說明紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌孢子在溫度為12~40℃時均能萌發，20~36℃為較佳孢子萌發范圍（圖2）。

2.1.3 病原菌菌絲生長、產孢對不同光照的適應性

從表2 看出，暹羅炭疽菌菌絲生長對光照要求不嚴格。5 種光照處理均能生長，完全黑暗對菌絲生長有利，光照對菌絲生長有一定抑制作用。其中，菌絲在連續黑暗條件下生長較快，菌落直徑為84.50 mm，顯著高于其他光照條件下的菌落直徑。12 h 亮12 h 暗（150 lx ）、12 h 亮12 h 暗（200 lx ）、12 h 亮12 h 暗（300 lx ）及連續光照（300 lx ）條件下菌落直徑沒有顯著差異（表2）。

表2 病原菌菌絲生長、產孢對不同光照的適應性

病原菌在5 種光照處理條件下均能產孢，完全黑暗對病原菌產孢有利，光照對病原菌產孢有一定抑制作用。其中，病原菌在連續黑暗條件下產孢量較大，產孢量為37.66×104個/mL，極顯著高于其他光照條件下的產孢量。12 h 亮12 h 暗（150 lx）、12 h 亮12 h 暗（200 lx ）、12 h 亮12 h 暗（300 lx ）及連續光照（300 lx ）條件下，病原菌產孢量沒有顯著差異（表2）。

綜上所述，最適合暹羅炭疽菌菌絲生長及產孢的光照條件為連續黑暗。

2.1.4 病原菌菌絲生長、產孢對不同碳源的適應性

暹羅炭疽菌在供試的9 種碳源上均能生長，但菌絲生長速度在不同碳源間存在差異。其中，以葡萄糖為碳源時菌絲生長最快，菌絲生長密厚，菌落直徑達78.67 mm，顯著高于其他碳源的菌落直徑。菌絲生長較快的碳源依次為山梨醇、麥芽糖、甘露醇，其菌絲較稀疏，菌落直徑在69.50~70.83 mm，相互間無顯著差異。以D-木糖和甘油為碳源時菌絲生長較慢，菌落直徑均低于61.00 mm，相互間無顯著差異，但均與以山梨醇、麥芽糖、甘露醇為碳源的菌落直徑存在顯著或極顯著差異。說明葡萄糖是最適宜暹羅炭疽菌菌絲生長的碳源（表3）。

表3 病原菌菌絲生長、產孢對不同碳源的適應性

暹羅炭疽菌產孢量最多碳源依次為乳糖、D-木糖、山梨醇，產孢量分別為46.45×104個/mL、37.36×104個/mL、29.89×104個/mL。乳糖與D-木糖產孢量沒有顯著差異，與山梨醇產孢量有顯著差異。D-木糖與山梨醇產孢量沒有顯著差異，三者均極顯著高于其他碳源條件下的產孢量。產孢量較多的碳源依次為淀粉、甘露醇，產孢量分別為19.19×104個/mL、13.53×104個/mL，相互間無顯著差異。以麥芽糖為碳源時產孢量最少，與淀粉、甘露醇為碳源產孢量差異顯著。說明乳糖、D-木糖、山梨醇是最適合暹羅炭疽菌產孢的碳源（表3）。

2.1.5 病原菌菌絲生長、產孢對不同氮源的適應性

暹羅炭疽菌在供試的9 種氮源上均能生長，但菌絲生長速度在不同氮源間存在差異。其中，以酵母粉、牛肉浸膏為氮源時菌絲生長最快，菌落直徑達89.13 mm 和87.75 mm，酵母粉菌絲密厚，牛肉浸膏菌絲稀松，兩者間沒有顯著差異，但均顯著高于其他氮源的菌落直徑。菌絲生長較快的氮源依次為甘氨酸、蛋白胨，甘氨酸菌絲密厚，蛋白胨菌絲稀松，菌落直徑分別為73.88 mm 和72.00 mm， 相互間無顯著差異。以L-丙氨酸、尿素、L-賴 氨酸為氮源時菌絲生長較慢，菌落直徑均低于65.50 mm，相互間無顯著差異，但均與以甘氨酸、 蛋白胨為氮源的菌落直徑存在顯著或極顯著差異。 說明酵母粉、牛肉浸膏是最適宜暹羅炭疽菌菌絲生 長的氮源（表4）。暹羅炭疽菌在供試的9 種氮源上除尿素外均能產孢，尿素可抑制孢子產生。產孢量最多的氮源為牛肉浸膏，產孢量為252.03×104個/mL，極顯著高于其他氮源條件下的產孢量。產孢量較多的氮源為蛋白胨、酵母粉，產孢量分別為55.94×104個/mL、47.66×104個/mL，相互間無顯著差異，但極顯著高于除牛肉浸膏為氮源外的其他氮源條件下的產孢量。以甘氨酸、L-精氨酸、L-丙氨酸為氮源時產孢量最少，相互間產孢量沒有顯著性差異。說明牛肉浸膏是最適合暹羅炭疽菌產孢的氮源（表4）。

表4 病原菌菌絲生長、產孢對不同氮源的適應性

2.1.6 病原菌菌絲生長、產孢對不同培養基的適應性

暹羅炭疽菌在6 種培養基中均能生長。其中，PDA 培養基菌絲生長最快，菌落直徑達75.38 mm，極顯著高于其他培養基的菌落直徑。其次為PSA 培養基，其菌落直徑極顯著高于除PDA 培養基外的其他培養基。WA 培養基菌絲生長最慢，其菌落直徑均極顯著小于其他培養基。說明PDA 培養基是最適宜暹羅炭疽菌菌絲生長的培養基（表5）。

表5 病原菌菌絲生長、產孢對不同培養基的適應性

暹羅炭疽菌在PDA、PSA 培養基上產孢量最多，分別為46.25×104個/mL、44.02×104個/mL，兩者間沒有顯著差異，但均顯著高于其他培養基的產孢量。CMA、OA、百香果汁液、WA 培養基產孢量較少，均低于8.00×104個/mL，處理間沒有顯著差異。說明PDA、PSA 培養基是最適宜暹羅炭疽產孢的培養基（表5）。

2.2 室內殺菌劑毒力測定結果

以同種殺菌劑不同濃度的對數值為橫坐標，同種殺菌劑不同濃度平均相對抑制率（%）的機率值為縱坐標建立毒力回歸直線，算出毒力回歸方程、相關系數（r）和半效應濃度（EC50），計算結果詳見表6。

表6 12 種殺菌劑對紫果西番蓮頂枯病病原菌的室內毒力測定結果

從表6 可知，12 種供試藥劑的質量濃度與相對抑菌率的相關系數都在 0.88 以上，說明兩者間呈正相關。EC50值可用來比較殺菌劑對供試菌株的毒力，EC50值越小表明藥劑的毒力越強。12 種供試殺菌劑對頂枯病病原菌生物活性有差異，其中50%多菌靈毒力最強，EC50為0.4188 μg/mL；其次為70%甲基硫菌靈、20%苯甲·咪鮮胺、450 g/L 咪鮮胺、40%苯甲·吡唑酯，其EC50分別為0.9141 μg/ mL、1.9543 μg/mL、2.3067 μg/mL、3.6475 μg/mL；說明這幾種殺菌劑均為紫果西番蓮頂枯病田間防治參考用藥。毒力中等的殺菌劑有20%抑霉唑、25%丙環唑、75%肟菌·戊唑醇、10%苯醚甲環唑，其EC50分別14.5546 μg/mL、15.1356 μg/mL、30.1439 μg/mL、38.8150 μg/mL。毒力較差的殺菌劑為80%乙蒜素、40%腈菌唑，其EC50為68.0769、95.3235 μg/mL；75%百菌清的毒力最差，其EC50為1313.1066 μg/ mL。

3 討論與結論

本研究結果表明，不同培養條件對菌絲生長和產孢量、萌發率均有顯著影響，且菌落顏色、厚度以及菌絲的生長狀況明顯不同。病原菌在pH 值為3.0~12.0 均能生長，最適生長pH 值為5.0~9.0。在pH 值為3.0~12.0 均能產孢，最適產孢量pH 值為7.0~8.0。菌絲在8~36℃均能生長，最佳生長溫度為28℃。在12~36℃均能產孢，最佳產孢溫度為28℃。孢子在pH 值為2.0~12.0 均能萌發，最佳萌發pH 值為5.0~10.0。孢子在12~40℃均能萌發，最佳萌發溫度為20~36℃。其中，適宜菌絲生長的pH和溫度與羅敦文［21］研究菠蘿蜜蒂腐病病菌和劉在哲等［20］研究紅肉蘋果炭疽病病原暹羅炭疽菌適宜的pH 和溫度基本一致。本研究中，在5 種光照條件下該病原菌均能生長并產孢，其中完全黑暗對菌絲生長和產孢最有利，與劉在哲等［16］研究認為紅肉蘋果炭疽病病原暹羅炭疽菌菌絲生長適宜光照條件為持續光照或光暗交替、王芳等［17］研究認為青星美人黑腐病病原菌最適菌絲生長光暗交替的觀點有差異，而完全黑暗對菌絲生長和產孢最有利的研究結果與王芳等［17］的研究結果一致。該病原菌菌絲生長最適碳源為葡萄糖，產孢量最多碳源依次為乳糖、D-木糖和山梨醇。菌絲生長最適氮源為酵母粉和牛肉浸膏，產孢量最多氮源為牛肉浸膏，與羅敦文［21］對菠蘿蜜蒂腐病菌菌絲生長的研究結果基本一致，但與王芳等［17］篩選獲得青星美人黑腐病病原菌菌絲生長和產孢的最適碳源不同。該病原菌菌絲生長最適培養基為PDA，最適產孢培養基為PDA 和PSA，與羅敦文［21］對菠蘿蜜蒂腐病菌菌絲生長的研究結果一致，與劉在哲等［16］對紅肉蘋果炭疽病病原暹羅炭疽菌菌絲的研究結果存在差異。本研究中紫果西番蓮頂枯病病原菌在光照條件、碳氮源、培養基方面與前人研究結果存在的差異，可能與病原菌寄主、供試材料及試驗環境等不同有關。

殺菌劑的毒力作用包括殺菌作用 （fungicidal action） 和抑/靜菌作用 （fungistatic action），殺菌劑抑制病原菌生長發育的毒力測定可以在室內離體下進行，常用于抑制病原菌生長發育的化合物活性篩選，殺菌劑離體毒力測定方法，即用藥劑直接處理病原菌或病原菌在含藥基質上培養，測定藥劑對病原菌生長發育的影響，在室內的離體毒力測定，能夠在較小的空間內測定和比較多種藥劑的毒力，測定條件容易控制，結果能夠反映化合物本身的絕對毒力大小， 重復性好和可比性強，所以常常被指定為大多數殺菌劑的毒力測定方法［29］。在暹羅炭疽菌殺菌劑防治研究中，宋慧云等［3］對多菌靈、嘧菌酯、溴菌腈、苯醚甲環唑、吡唑醚菌酯、氨基寡糖素、嘧霉胺、福美雙等8 種農藥防效進行評價，認為多菌靈、吡唑醚菌酯和福美雙可作為防治多穗柯炭疽病的化學殺菌劑。徐丹丹等［20］對苯醚甲環唑、咪鮮胺、吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈等4 種農藥防效進行評價，認為咪鮮胺、甲基硫菌靈可作為防治咖啡炭疽病首選殺菌劑。王志華等［22］對多菌靈、苯醚甲環唑、三唑酮、醚菌酯等4 種農藥防效進行評價，認為多菌靈可濕性粉劑對金森女貞炭疽病抑制作用最強。本研究發現，苯并咪唑衍生物類殺菌劑（50%多菌靈）對紫果西番蓮頂枯病病原菌毒力強度最強；咪唑類殺菌劑（70%甲基硫菌靈、450 g/L 咪鮮胺、20%抑霉唑）對病原菌毒力強度較強，與前人研究的結果相似；三唑類殺菌劑（25%丙環唑、10%苯醚甲環唑）對病原菌毒力強度中等；有機硫類殺菌劑（80%乙蒜素）、吡咯類殺菌劑（40%腈菌唑）對病原菌毒力強度較差；取代苯類殺菌劑（75%百菌清）對病原菌的毒力強度最差。本研究還發現，復配殺菌劑的毒力強度強于單劑殺菌劑，其20%苯甲·咪鮮胺微乳劑（含苯醚甲環唑5%和咪鮮胺唑15%）的EC50為1.9543 μg/mL，均低于單劑的10%苯醚甲環唑或450 g/L 咪鮮胺的EC5（02.3067、38.8150 μg/mL）；40%苯甲·吡唑酯（苯醚甲環唑15%，吡唑醚菌酯25%）的EC50為3.6475 μg/mL 明顯低于單劑的10%苯醚甲環唑（38.8150 μg/mL）。

本研究對紫果西番蓮頂枯病病原菌的生物學特性進行分析，并用12 種殺菌劑對其進行室內毒力測定，結果可為紫果西番蓮頂枯病防治提供技術參考。由于殺菌劑毒力測定試驗是在室內進行，田間防治效果還與病原菌孢子［11］、寄主植物生長環境［13］、殺菌劑特性［30］、施藥時期、氣候、藥械及其他不可預見因素等有關［31］。因此，田間防治效果還需進一步驗證。