血漿凝血酶激活的纖溶抑制物檢測在糖尿病腎病風險評估中的意義*

吳艷,蔣雷,黃青華,鐘彬,吳萬飛,趙麗霞,周潔,姚瀅,費鮮明(.杭州市臨安區第一人民醫院檢驗科,杭州 00;2.浙江省人民醫院a.檢驗中心,b.內分泌科,杭州 004;.慈溪市第七人民醫院檢驗科,浙江慈溪 500)

糖尿病腎病(diabetic kidney disease,DKD)是2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的常見并發癥,嚴重影響患者生命質量及預后[1-2]。因此,及時監測和預測DKD發生風險,對指導臨床實踐具有重要意義。目前,一些生物標志物已被驗證對DKD風險預測具有一定價值[3-9],但更有效的預測指標仍需探索。DKD發病機制復雜,多種因素參與,其中凝血纖溶系統異常尤為重要[10]。凝血酶激活的纖溶抑制物(thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI)是凝血激活、纖溶抑制及炎癥反應的關鍵調節因子[11]。研究提示TAFI水平升高可能促進糖尿病微血管病變[12],但TAFI與DKD發生風險及嚴重程度之間的關系尚不清楚。本研究擬探討TAFI在DKD發生及進展風險評估中應用價值,為DKD的早期預測及干預提供依據。

1 材料與方法

1.1研究對象 納入2021年1月至12月在杭州市臨安區第一人民醫院和浙江省人民醫院門診及住院的116例初診T2DM患者。其中單純T2DM患者53例(門診45例,包括臨安醫院20例),DKD患者63例(均為浙江省人民醫院住院患者)。T2DM診斷標準參照中國糖尿病協會2020年指南,DKD診斷標準為尿清蛋白/肌酐比值(UACR)>3 mg/mmol或估計腎小球濾過率<60 mL/min。排除標準:(1) T2DM大血管并發癥;(2)其他T2DM微血管并發癥;(3)原發性肝腎功能不全;(4)心腦血管疾病;(5)惡性腫瘤;(6)急性炎癥或感染;(7)術后狀態。根據診斷結果,將入組T2DM患者分為單純T2DM組和DKD組,收集患者病理生理指標、實驗室檢查等臨床資料。本研究獲浙江省人民醫院醫學倫理委員會批準(批準文號:2021KT014),患者均簽署知情同意書。

1.2標本采集及處理 患者及對照組于空腹狀態采集標本。(1)靜脈血3 mL,不抗凝,離心分離血清,用于常規生化指標檢測。(2)靜脈血2 mL,EDTA-K2抗凝,用于全血細胞計數、CRP和 HbA1c檢測。(3)靜脈血2.7 mL,枸櫞酸鈉抗凝,用于凝血、抗凝和纖溶指標檢測。(4)靜脈血5 mL,EDTA-K2抗凝,離心分離血漿,用免疫散射比濁法測定TAFI濃度。(5)晨首尿,檢測肌酐、微量清蛋白,計算UACR。(6)24 h尿,檢測尿蛋白排泄量(UAE)。所有標本的采集和處理均嚴格遵循相關標準操作規程。

1.3常規指標和血漿TAFI水平測定 血常規參數[觀察指標:白細胞計數(white blood cell,WBC)、淋巴細胞(lymphocyte,LY)、中性粒細胞(granulocyte,GR)]采用邁瑞BC-6900血細胞分析儀及配套試劑測定,全血C-反應蛋白(CRP)采用邁瑞CRP-M100及配套試劑測定;生化項目[觀察指標血清肌酐(Cr)]采用貝克曼-庫爾特AU5800生化儀及配套試劑測定。凝血試驗項目[觀察指標:纖維蛋白原(fibrinogen,Fib)、纖維蛋白(原)降解產物(fibrin/fibrinogen degradation products,FDP)、D-二聚體(D-dimer,DD)、抗凝血酶(antithrombin,AT)]采用Sysmex CS-5100血凝儀及配套試劑測定,血栓調節蛋白(thrombomodulin,TM)濃度采用酶聯生物ELISA試劑盒測定。操作均嚴格按說明書進行。TAFI水平采用TAFI抗原測定試劑盒(免疫散射比濁法,遼寧邁迪生物公司)及貝克曼-庫爾特AU5800生化分析儀測定。

2 結果

2.1DKD與單純T2DM指標結果比較 DKD與單純T2DM患者年齡、WBC、Fib、DD、FDP、HbA1c以及AT、TAFI水平差異均有統計學意義(P均<0.05);其中DKD患者TAFI水平高于單純T2DM患者(P<0.001),見表1。Spearman相關性分析顯示,DKD患者血漿TAFI水平與UACR和FDP呈正相關(r=0.302,P<0.01),與WBC、Fib、DD、FDP和AT無相關性(P>0.05)。

2.2DKD風險的回歸分析 將前述T2DM和DKD比較中有差異的指標以連續變量的形式納入進行風險回歸分析。單因素回歸分析顯示,年齡、病程、WBC、Fib、AT和TAFI均為DKD的風險因子,而進一步的多因素分析顯示,調整其他危險因素后,TAFI是DKD風險的獨立預測因子(OR:2.910,95%CI:1.719～4.926),P<0.01;見表2。

表2 DKD風險預測的單因素和多因素回歸分析

2.3TAFI鑒別DKD與單純T2DM的ROC曲線 TAFI用于鑒別DKD的AUCROC為0.763(95%CI:0.674～0.853)(P<0.01)。在TAFI的最佳cut-off值為4.99 μg/mL時,其敏感性為0.57,特異性為0.92,陽性預測值為0.88,陰性預測值為0.32,準確度為75%。

2.4DKD風險與TAFI水平的關系 基于多因素和ROC曲線分析,分別將TAFI作為連續變量和分類變量進行調整后的多因素回歸分析比較。在血漿TAFI最佳cut-off值為4.99 μg/mL,校正后的多變量回歸分析顯示,作為連續變量和分類變量,TAFI的OR值分別為2.910(95%CI:1.719～4.926)和11.769(95%CI:2.869～48.215)。此外,按照TAFI四分位數區間進行分組時,各組DKD發生率的比例分別為27.5%、34.5%、67.7%和85.7%,隨四分位數值升高而呈明顯增高趨勢(F=14.11,P<0.01)。

3 討論

本研究結果顯示,DKD組患者血漿TAFI水平較單純T2DM組明顯升高,同時凝血、纖溶及炎癥相關指標也呈現異常,提示TAFI水平異?？赡軈⑴cDKD的發病機制。但是,DKD組TAFI水平與炎癥、凝血及纖溶指標的相關性較低,變化趨勢不一致,原因可能與以下因素有關:(1)干擾因子影響炎癥、凝血及纖溶的激活或抑制;(2)TAFI水平與活性不一致;(3)TAFI基因多態性影響TAFI水平[13]。值得注意的是,DKD組TAFI水平與UACR呈正相關,提示TAFI升高可能與T2DM患者預后不良相關。

本研究中,TAFI的OR值較高,提示其是DKD的獨立危險因子。ROC曲線分析顯示,TAFI預測DKD的敏感性較低,但特異性和陽性預測值較高,提示其可作為輔助指標區分DKD和T2DM。當TAFI>4.99 μg/mL時,DKD的OR值極高,提示此時發生DKD的風險明顯增加。而隨TAFI水平升高,DKD的發生率也增加,進一步驗證了TAFI升高與DKD高風險之間的一致性。