鹿茸中水溶性成分提取方法研究

周遠卓 安楠 王松濤 岳媛媛 嚴立石 吳麗娜*

（1.南京師范大學& 食品與制藥工程學院 江蘇南京 210023；2.瀘州老窖股份有限公司；3.蘇州科技大學化學與生命科學學院）

0 引言

鹿茸是鹿科動物梅花鹿或馬鹿的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角[1]，是一種傳統名貴中藥材，作為最重要的動物藥之一，已被廣泛應用于各種功能的保健用品。 鹿茸中含有鉀、鈣、鈉、鎂等無機元素[2]，蛋白質、氨基酸、多糖、雌激素、磷脂、脂肪酸等有機物質[3-6]，以及人體所必需的多種常量和微量元素， 這些物質是鹿茸具有特殊藥理作用的主要物質基礎。 鹿茸中含有的生物活性成分，具有促進機體新陳代謝、提高免疫力、抗疲勞[7]、抗炎[8]、調節心血管系統、改善人體機能[7-9]等功效。 ZHAO 等[10]通過生物實驗證明了酶解鹿茸蛋白得到的多肽活性物質， 能促使骨細胞有絲分裂，進而修復骨組織損傷[9]。 肖響等[11]研究發現鹿茸蛋白可以通過調控凋亡相關蛋白減輕缺血缺氧對心肌細胞造成的損傷， 從而維持細胞線粒體膜電位穩定性，減少細胞凋亡。

鹿茸水溶性成分主要包括蛋白質、氨基酸、多糖等，其中蛋白質和多糖是具有生物功能的活性物質。趙玉紅等[4]以梅花鹿鹿茸為原料，采用緩沖溶液提取水溶性蛋白質，設計優化提取條件，并對產物組分進行分級和分子質量分析， 得出鹿茸水溶性蛋白質的最佳提取工藝條件為pH 9.18，料液比1.0 g：60.4 mL，提取時間5.9 h，得到的蛋白提取量為90.84 mg/g。宋佳[12]依據水提醇沉的原理，以水作為提取溶劑進行超聲提取， 從而提取出鹿茸粗多糖， 隨后用Sevage法純化去除蛋白質。該方法提取工藝穩定、簡單，提取出的多糖含量較高，其多糖含量在18.34～31.74 mg/g范圍內。

蛋白酶是一種生物活性物質， 作用于蛋白質或者多肽類，在醫藥、紡織、食品、有機合成等工業應用方面有著十分廣泛的作用。相比于浸提法，蛋白酶水解法能高效分解蛋白質，同時無副產物生成，并且能耗低、綠色環保、操作簡便、使用安全。李冰等[13]以堿性蛋白酶和胰蛋白酶為供試酶類， 采用響應面試驗設計優化單酶水解條件，并確定雙酶復合水解方案，確定了鹿茸膠原多肽堿性蛋白酶和胰蛋白酶復合水解的工藝條件。目前催化蛋白質水解的酶種類很多，重要的有胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等。因此，本研究選取胃蛋白酶、胰蛋白酶、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶以及復合酶（木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、胰蛋白酶）進行對比鹿茸中有效成分的分解。

本研究以梅花鹿鹿茸為原料， 對比普通浸提法和酶解法，綜合傳統提取方法，選用木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、 胃蛋白酶、 胰蛋白酶以及多酶復合條件下，對鹿茸水溶性成分進行提取以及測定，旨在優化鹿茸中總提物的最佳提取工藝條件， 以提高鹿茸成分的利用效率，節約生產成本，為食品行業高效利用鹿茸提取物中活性物質的進一步應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

梅花鹿鹿茸， 來自吉林省長春市、 吉林省白山市、吉林省吉林市，均為二杠鋸茸，具有典型分枝，為帶血茸，經粉碎機粉碎過篩后待用。

乙醇（純度95%）、木瓜蛋白酶（批號：C13585358）、菠蘿蛋白酶（批號：C12814383）、胃蛋白酶（批號：C12414891）、胰蛋白酶（批號：C13139644）（上海麥克林生化科技有限公司）；苯酚（上海凌峰化學試劑有限公司）；FDTMBradford 蛋白定量試劑盒（弗德生物科技有限公司）；16 種氨基酸標準品（純度＞99%，北京振翔科技有限公司）。

本實驗用水均為超純水。

1.2 主要儀器

電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗儀器設備有限公司）；多功能微孔板檢測儀（基因有限公司）；恒溫振蕩器（上海一恒科學儀器有限公司）；pH 計（寶成生物供應商）；落地離心機（香港Gene 公司）；電子天平（梅特勒—托利多儀器（上海）有限公司）；艾科浦超純水機（重慶頤洋企業發展有限公司）；LCMS-8050 三重四極桿液質聯用儀（島津公司）；超高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱高分辨質譜聯用儀（美國Thermo Fisher 公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 冷浸法提取蛋白質、氨基酸

準確稱取鹿茸粉末1.00 g，分別放置于含有25 mL水、25 mL 20%乙醇、25 mL 10%乙醇的圓底螺口瓶中，密封振搖6 h，靜置18 h 后，于干燥濾器中迅速濾過，濾液備用，每組試驗重復3 次。

1.3.2 熱浸法提取蛋白質、氨基酸

準確稱取鹿茸粉末1.00 g，置于250 mL 圓底燒瓶中，分別準確加入25 mL 水、25 mL 20%乙醇、25 mL 10%乙醇，密封稱重后，靜置1 h，連接回流冷凝管油浴加熱至微沸1 h，冷卻后取下，進行密塞稱重，用水補足流失的重量搖勻后，干燥器中迅速濾過，濾液備用，每組試驗重復3 次。

1.3.3 酶解法提取蛋白質、氨基酸

1.3.3.1 木瓜蛋白酶

準確稱取鹿茸粉末1.00 g， 加入8 mL 超純水，調節溶液pH 值為7， 加入0.05 g 木瓜蛋白酶，50℃酶解11 h 后，于100℃進行滅酶15 min，冷卻靜置。6 000 r/min 離心10 min。 過濾， 取上清液（即酶解液），放入4℃冰箱保存，備用，每組試驗重復3 次。

1.3.3.2 菠蘿蛋白酶

準確稱取鹿茸粉末1.00 g， 加入8 mL 超純水，調節溶液pH 值為7， 加入0.05 g 菠蘿蛋白酶，50℃酶解11 h 后，于100℃進行滅酶15 min，冷卻靜置。6 000 r/min 離心10 min。 過濾，取上清液（即酶解液），放入4℃冰箱保存，備用，每組試驗重復3 次。

1.3.3.3 胃蛋白酶

準確稱取鹿茸粉末1.00 g，加入23 mL 超純水，調節溶液pH 值為2（1 mol/L CH3COOH），加入0.05 g胃蛋白酶，50℃酶解5 h 后，于100℃進行滅酶15 min，冷卻靜置。 6 000 r/min 離心10 min。 過濾，取上清液（即酶解液），放入4℃冰箱保存，備用，每組試驗重復3 次。

1.3.3.4 胰蛋白酶

準確稱取鹿茸粉末1.00 g，加入10 mL 超純水，調節溶液pH 值為8（1 mol/L NaOH），加入0.05 g 胰蛋白酶，50℃酶解5 h 后，于100℃進行滅酶15 min，冷卻靜置。 6 000 r/min 離心10 min。 過濾，取上清液（即酶解液），放入4℃冰箱保存，備用，每組試驗重復3 次。

1.3.3.5 復合酶

準確稱取鹿茸粉末1.00 g，加入10 mL 超純水，調節溶液pH 值為7.5（1 mol/L NaOH），依次加入木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、胰蛋白酶各0.016 7 g，50℃酶解10 h 后，于100℃進行滅酶15 min，冷卻靜置。6 000 r/min 離心10 min。 過濾， 取上清液（即酶解液），放入4℃冰箱保存，備用，每組試驗重復3 次。

1.3.4 水提醇沉法提取多糖

準確稱定鹿茸粉末1.00 g， 將脫脂鹿茸粉末置于250 mL 圓底燒瓶中按照1∶35 的液料比加入蒸餾水，于80℃水浴中浸提，離心，分離沉淀與上清，將上清液旋蒸濃縮至10 mL，加入4 倍體積95%乙醇，于冰箱中靜置12 h，離心取沉淀，60℃烘干得疏松粉末，稱重，用5 倍體積的超純水復溶，復溶后離心取上清液1 mL，稀釋100 倍，備用，每組試驗重復3次。

1.3.5 方法學考察

1.3.5.1 精密度實驗

取冷浸法、熱浸法、酶解法得到的濾液各5 份，精密稱取濾液2.5 mL，置于已干燥至恒重的蒸發皿中，于水浴鍋中蒸干，105℃烘箱干燥3 h 后，放于干燥器中冷卻0.5 h 至室溫，稱重，分別計算水溶性成分提取率及RSD（SD/平均數）值，得出水溶性成分提取率的RSD 分別為1.31%、1.29%、1.21%，說明不同提取方式的精密度均良好。

1.3.5.2 重復性實驗

取冷浸法、熱浸法、酶解法得到的濾液各2.5 mL，每份樣品重復3 次，置于已干燥至恒重的蒸發皿中，于水浴鍋中蒸干，105℃烘箱干燥3 h 后， 放于干燥器中冷卻0.5 h 至室溫，稱重，分別計算水溶性成分提取率及RSD 值， 得出水溶性成分提取率的RSD均＜3%，說明不同提取方式均具有良好的重現性。

1.3.5.3 穩定性試驗

取冷浸法、熱浸法、酶解法得到的濾液各2.5 mL，置于已干燥至恒重的蒸發皿中， 于水浴鍋中蒸干，105℃烘箱干燥3 h 后， 放于干燥器中冷卻0.5 h 至室溫后取出，分別于0、2、4、6、8 d 后稱重，計算水溶性成分提取率及計算RSD 值，得出水溶性成分提取率的RSD 分別為1.62%、1.29%、1.87%，說明不同提取方式均具有良好的穩定性。

1.3.5.4 準確度試驗

利用加樣回收法，取冷浸法、熱浸法、酶解法得到的濾液各2.5 mL，分別按3 種物質（蛋白質、多糖、核苷酸） 質量百分含量的50%、100%、150%加入3種物質的對照品溶液， 按照優化所得到的最終條件提取樣品， 分析并計算3 種物質的加樣回收率及RSD 值。加樣回收率試驗結果顯示3 種活性成分的加樣回收率分別為100.92%、99.86%、100.37%，均在95%～105%范圍內，其RSD 分別為1.82%、1.99%、1.27%，表明該方法回收率高，滿足分析測定的要求。

1.3.6 數據處理

試驗結果取3 次平行試驗的平均值， 數據表示為平均值±標準差（，n=3）。

1.4 檢測方法

1.4.1 浸出物得率分析

參照 《中國藥典》2015 年版附錄2201 測定方法中的操作規程，計算各浸出物得率。 精密稱取濾液5 mL，置于已干燥至恒重的蒸發皿中，于水浴鍋中蒸干，105℃烘箱干燥3 h 后， 放于干燥器中冷卻0.5 h 至室溫，稱重。 根據公式（Ⅰ）：水溶性成分提取率= （提取所得質量/樣品總質量）×100%，計算水溶性成分提取率，其中，水溶性成分主要包括鹿茸蛋白質、氨基酸、多糖等成分。

1.4.2 FDTM Bradford 蛋白定量試劑盒測定可溶性蛋白

采用微孔酶標儀法進行蛋白質含量測定。 完全溶解BSA 蛋白標準品（5 mg/mL），用PBS 稀釋液進行稀釋，使其終濃度為0.2 mg/mL。 用雙蒸水將混勻后的5×G250 染色液稀釋至1×G250 染色液。將標準品按0、1、2、4、6、8、12、16、20 μL 分別加入到96 孔板的標準品孔中， 加PBS 稀釋液補足到20 μL。 同時，加2 μL 離心后樣品到96 孔板的樣品孔中，并用PBS 稀釋液補足至20 μL。 各孔均加入200 μL 1×G250 染色液，于室溫放置3～5 min 后，用酶標儀測定595 nm 處的吸光度。最終可根據標準曲線和樣品體積計算出樣品的蛋白質濃度。

1.4.3 苯酚-硫酸法測定多糖得率

準確稱取葡萄糖對照品10.0 mg， 置于100 mL容量瓶中，加水定容至刻度線。準確量取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別加入到試管中，依次加入蒸餾水使其終體積為2 mL，各管加入1.0 mL 6%苯酚，混勻，于冰浴中加入5 mL 濃硫酸，搖勻，沸水浴20 min，靜置至室溫。 在490 nm 處測定吸收度，以多糖濃度為橫坐標， 以吸光度為縱坐標， 繪制標準曲線。 同時， 將處理后的鹿茸粗多糖樣品置于50 mL容量瓶中，水解并稀釋至刻度，得到供試品溶液，準確吸取多糖供試品溶液10 μL，稀釋100 倍，按照上述步驟加入苯酚及硫酸，測得吸光度。根據公式（Ⅱ）多糖得率=（烘干后多糖質量/鹿茸粉末質量）×100%，計算多糖得率。

1.4.4 液相色譜-質譜聯用測定氨基酸

采用液相色譜-質譜聯用技術定量檢測鹿茸氨基酸。采用TSKgel Amide-80（2 mm×150 mm，3 μm）分析柱，流動相為0.2%甲酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫 （0～3.5 min，60%～80% B；3.5～4.5 min，80%B；4.5～4.6 min，80%～60% B；4.6～6.1 min，60% B）；儀器參數為：流速為0.2 mL/ min；柱溫為40℃；進樣量為2 μL；采用正離子、多反應檢測模式；氣簾氣壓力241.32 kPa；離子化溫度為550℃；噴霧電壓為5 500 V。

1.4.5 高分辨質譜進行提取物中非靶向代謝物質檢測

色譜條件：色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3（2.1mm×100mm，1.8μm），柱溫為40℃，進樣量為3μL。正離子模式：A：0.1%甲酸水、B：0.1%甲酸乙腈；負離子模式：A：水（2 mM 乙酸銨）、B：乙腈。

質譜條件：霧化氣壓：60 Psi，輔助氣壓：60 Psi，氣簾氣壓：35 Psi， 溫度：650℃， 噴霧電壓：5 000 V（正離子模式）或-4 000 V（負離子模式）。

2 結果與分析

2.1 鹿茸中浸出物得率計算

由公式（Ⅰ）計算出不同提取方式下鹿茸中水溶性成分提取率如表1 所示。

表1 鹿茸中水溶性成分提取率Table 1 Extraction rate of water-soluble components in velvet antler

從表1 可以看出， 熱浸法和酶解法得到的鹿茸中水溶性成分提取率均在4%～5%之間，冷浸法得到的提取率較低，約為2%，不高于2.5%。其中，熱浸法鹿茸中水溶性提取率明顯高于冷浸法， 可能是因為隨著溫度的提高， 目標化合物的溶解度和傳質速率有所增加，有利于萃取。 經對比發現，較高濃度的乙醇不利于鹿茸水溶性多糖和蛋白的溶解， 從而使得提取率降低。 此外，酶解法得到的水溶性成分較高，是由于酶在適宜條件下的分解作用， 使得目標化合物分解在溶液中， 不同酶處理的鹿茸水溶性成分提取率相差不大。

2.2 鹿茸中蛋白質含量測定

采用Bradford 法測定蛋白質含量。 以BSA 濃度（mg/mL）為橫坐標，以A595nm吸光度值為縱坐標，得出鹿茸中蛋白質含量測定的標準曲線回歸方程為Y= 1.728 9X+0.008 88，R2=0.997 22，線性范圍為0～0.18 mg/mL。 不同提取方式下鹿茸中蛋白質含量如圖1（a）所示。

圖1 不同提取方式蛋白質含量（a）、多糖得率（b）Fig.1 Protein content（a），yield of polysaccharides（b） by different extraction methods

鹿茸水溶性蛋白主要為小分子蛋白。 由圖可看出，酶解法提取物中蛋白質含量在80～206 mg/g，其中最低的為胰蛋白酶提取物，蛋白質含量為88.2 mg/g，最高的為木瓜蛋白酶提取物，蛋白質含量為205.9 mg/g。20%乙醇作為溶劑的熱浸法得到的蛋白質含量較高，為210 mg/g，冷浸法（20%乙醇作為溶劑）得到的蛋白質為180 mg/g。 對比發現酶解法提取物中蛋白質含量較溶劑浸提法低， 其原因為酶將蛋白質分解為多肽、氨基酸等小分子物質。

2.3 鹿茸中多糖得率的測定

采用苯酚-硫酸法測定多糖得率。 以多糖濃度為橫坐標，以A490nm吸光度值為縱坐標。 得出回歸方程為Y=0.006 02X-0.025 79，R2=0.990 41。 根據公式（Ⅱ）進行糖得率的計算。由實驗結果可知，冷浸法提取工藝未提取出多糖， 可能是由于浸提溫度太低未提取到鹿茸的多糖分子。 不同提取方法的的多糖得率如圖1（b）所示，熱浸法多糖得率為10.56%，木瓜蛋白酶提取法的多糖得率為6.24%， 多酶提取法的多糖得率為9%，胃蛋白酶為5.88%，胰蛋白酶提取法得到的多糖得率最高為11.61%，最低得率為菠蘿蛋白酶的3.26%。

2.4 鹿茸中氨基酸含量的測定

采用TSKgel Amide-80 （2 mm×150 mm，3 μm）分析柱， 以0.2%甲酸溶液-乙腈為流動相， 梯度洗脫；流速為0.2 mL/min；檢測器為QTRAP 5500 質譜儀； 對鹿茸提取物中16 種氨基酸類成分進行檢測。圖2 為氨基酸標準溶液（10 μg/mL）的色譜圖。

圖2 16 種氨基酸標準溶液（10 μg/mL）的色譜圖Fig.2 Chromatograms of the 16 amino acids standard solutions （10 μg/mL）

分別取適量16 種氨基酸標準溶液，用超純水稀釋，按1.4.4 條件測定，以各標準物質的質量濃度（x，mg/L）為橫坐標，峰面積（y）為縱坐標繪制標準曲線，計算回歸方程。 按信噪比（S/N）=3 計算儀器檢出限（IDL）。16 種氨基酸的線性范圍為10.0～200.0 mg/L，在該范圍內相關系數（R2）均≥0.999 0，線性良好。16種氨基酸的保留時間、回歸方程、R2、IDL 見表2。

表2 16 種氨基酸的保留時間及線性范圍考察Table 2 Retention times and investigation on linearity range of 16 amino acids

將不同提取條件下的氨基酸總量進行對比（見表3），可知不同條件下鹿茸氨基酸總量有較大差異。其中，酶解法，尤其在胰蛋白酶條件下，測得的小分子含量最高，為11.42 mg/g，證明相較于其他酶解條件，胰蛋白酶對于鹿茸蛋白具有更高的分解效率。

表3 鹿茸中浸出物中氨基酸總量Table 3 Total amino acids in antler extract

由于蛋白質為鹿茸中的主要成分， 故根據上述實驗中鹿茸水溶性提取物中蛋白質含量結果， 選取冷浸法20%乙醇作為溶劑、熱浸法20%乙醇作為溶劑、胰蛋白酶酶解法作為代表性樣品，測得16 種氨基酸含量分布如圖3 所示。 胰蛋白酶酶解法較20%乙醇作為溶劑的冷浸法和熱浸法， 得到了更多的L型氨基酸和芳香族氨基酸。其中，胰蛋白酶酶解法中精氨酸含量為0.983 mg/g，是冷浸法的12 倍，熱浸法的7 倍；賴氨酸含量為0.984 mg/g，為熱浸法的10倍；酪氨酸和苯丙氨酸含量分別為1.793、1.64 mg/g，均為冷浸法和熱浸法的4 倍。 相較于冷浸法和熱浸法， 胰蛋白酶酶解法還得到了較高含量的蘇氨酸和纈氨酸，分別為1.111、1.092 mg/g。

圖3 不同提取方式氨基酸測得值Fig.3 Measured values of amino acids by different extraction methods

2.5 鹿茸中水溶性成分最優工藝

經前期預實驗的對比以及對乙醇濃度、 提取時間和料液比3 個因素進行單因素試驗優化， 分別建立了浸提法最優提取工藝。 其中熱浸法的最優工藝條件為：以20%乙醇作為提取溶劑，采取1∶25 的料液比， 浸提1 h 效果最佳。 冷浸法的最優工藝條件為：以20%乙醇作為提取溶劑，采取1∶25 的料液比，密封振搖6 h 效果最佳。

同時對胰蛋白酶酶解條件進行優化， 由于梅花鹿茸不溶于水， 其在水溶液中的酶催化反應屬于非均相催化反應， 非均相催化底物與溶劑體系的固液比一般不宜超過10%，否則會引起傳質和傳熱阻力從而影響目標產物得率， 而固液比太低又容易引起產物濃度過低阻礙后繼分離純化。因此，本研究采用1∶10 的固液比進行反應。 經前期預實驗選擇2%、5%、10%的酶底物比，結果分析2%酶底物比時得率較低，10%酶底物時得率相較于5%時產物得率沒有顯著變化，從成本以及得率變化考慮，選擇5%的酶與底物之比為最優方案。另外，因為胰蛋白酶適合在堿性的環境進行催化反應， 在pH 為8，50℃左右可維持其最佳活性[14]，因此本研究采用此反應條件進行胰蛋白酶對梅花鹿茸的提取。 故得到胰蛋白酶酶解具體工藝參數為：溶液pH 為8，底物固液比1∶10，酶底物比5%，50℃提取5 h。

對比鹿茸中水溶性成分提取率、多糖得率、氨基酸含量以及對水溶性成分進行的定性分析， 發現胰蛋白酶酶解的效果最優。其原因為在適宜的溫度、pH條件下，胰蛋白酶將鹿茸蛋白成分進行有效分解，高效的將大分子物質降解為小分子氨基酸等物質。

胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白水解酶， 具有很強的專一性，作用于L 型氨基酸的精氨酸或賴氨酸所形成的肽鍵、酰胺鍵或者酯鍵[15]，同時，其對底物的專一性類似于糜胰蛋白酶， 可優先切開羧基側是芳香族氨基酸如酪氨酸、苯丙氨酸所構成的肽鍵。鹿茸蛋白為天然蛋白， 因此其氨基酸多為L 型氨基酸，且含有豐富的賴氨酸、 精氨酸、 酪氨酸和苯丙氨酸等，因此胰蛋白酶可以高效水解鹿茸蛋白為小分子，得到最高含量的小分子氨基酸，為11.42 mg/g。而胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶專一性較低，特別是木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶具有廣泛的特異性[16-17]。因此，基于上述機理，本實驗對比不同種類酶對鹿茸中蛋白質的降解發現胰蛋白酶具有最優的效果。 由圖3 所示，可驗證胰蛋白酶法得到了更多含量的芳香族氨基酸以及賴氨酸、精氨酸，遠高于冷浸法和熱浸法。

因此，綜合多種因素進行評判，得出鹿茸中水溶性成分最佳提取工藝為胰蛋白酶于pH 值為8 的適宜溶劑中，50℃酶解鹿茸5 h。

2.6 鹿茸提取物中非靶向代謝物質檢測分析

通過使用飛行時間高分辨質譜（5600 QTOF）進行對比分析不同提取方式下鹿茸中水溶性提取物成分變化。對比發現，酶解法較其他方法提取出更多的成分，包括脯氨酸、組氨酸、蛋氨酸、鳥氨酸、瓜氨酸、色氨酸、蘇氨酸、纈氨酸等氨基酸，鳥苷、肌苷、尿嘧啶等核苷/核苷酸，膽酸、十四烷二酸、2-羥基肉桂酸、肌酸、甘油酸等多種脂肪酸，雌三醇、2-羥基雌二醇等雌激素以及4′-甲基染料木黃酮、7-羥基-6-甲氧基二氫黃酮醇、2-甲基-5，7，8-三甲氧基異黃酮、4，5，7-三羥基異黃酮、 大豆黃酮等多種黃酮類物質。 不同提取方式水溶性成分對比如表4 所示。

表4 不同提取方式鹿茸水溶性成分Table 4 Water-soluble components of velvet antler in different extraction methods

3 結論

本研究對比了冷浸法、 熱浸法和酶解法在梅花鹿鹿茸中水溶性成分提取實驗的效率， 對提取物成分進行了定性分析，得到蛋白質、氨基酸、多糖等水溶性物質，并對酶解機理進行分析。通過對比不同提取方式下鹿茸中的水溶性成分，分析可知：胰蛋白酶酶解為鹿茸水溶性成分的最佳提取方式， 其具體條件為：pH 8， 底物固液比為1∶10， 酶底物比為5%，50℃提取5 h，得到的水溶性成分提取率為4.8%，氨基酸分子總量為11.42 mg/g，多糖得率為11.61%，均為相應含量的最高值。在此條件下，能得到較高的水溶性成分提取率以及氨基酸分子總量， 可以在較為溫和的條件下， 更加高效地對梅花鹿茸中的水溶性成分進行提取。 本研究為鹿茸中水溶性成分的大量綜合性提取奠定了基礎， 為進一步高效合理利用鹿茸中活性成分提供了一定的依據。