分散固相萃取耦合高效液相串聯質譜儀測定贛南臍橙中矮壯素的殘留

閔芳芳，袁璐，丁若雯，羅英，肖庚鵬*

（1. 江西省檢驗檢測認證總院檢測認證技術發展研究院，江西南昌，330052；2. 江西省藥品檢查員中心，江西南昌，330000）

0 引言

贛南臍橙產自江西省贛州市，是贛南地區的地理標志產品。贛南臍橙由于味美和營養豐富正受到越來越多人的青睞。贛南臍橙作為柑橘類水果，含有橙皮苷、蘆丁、柚皮苷等黃酮類化合物，在中藥中具有清熱去火的效果。其中，橙皮苷能擴展支氣管，具有清熱化痰、疏郁理氣、抗炎和抗過敏的功效，蘆丁對高糖高脂飲食導致的小鼠腎臟損害具有保護作用［1-4］。

矮壯素（Chlormequat Chloride， CCC），是一種季銨鹽類植物生長調節劑，主要用于小麥、水稻、玉米、水果等作物，以提高產量，改善品質［5］。矮壯素雖為低殘留的農藥，但是仍會引起人的中毒甚至死亡［6］。同時，還有研究表明，在低于日允許攝入量（ADI）水平下，矮壯素也會對動物的繁殖能力產生不良影響［7］。

目前，國內外對矮壯素殘留的檢測方法主要有液相色譜法、離子色譜法、氣相色譜串聯質譜法和液相色譜串聯質譜法等，涉及食品［8］、肥料［9］、藥材［10］等。然而，應用HPLC-MS/MS 法檢測矮壯素在贛南臍橙中殘留的方法未見報道，因此建立一個對贛南臍橙中矮壯素殘留的快速準確的定性、定量分析的檢測方法， 對真實反映其殘留現狀， 確保人們的食品安全有著至關重要的作用。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1290 高效液相色譜儀， 配有G7120A 高壓二元泵， G7129B 高性能自動進樣器， G7116B 柱溫箱；Agilent 6470B 高效液相串聯質譜儀，配有電噴霧電離源 （AJS ESI）；數據采集和處理采用Mass Hunter 軟件。TDL-5-A 離心機，上海安亭科學儀器廠；渦旋儀， 德國IKA；多孔振蕩器，上海安譜實驗科技股份有限公司。

矮壯素（1000μg/mL），天津阿爾塔科技有限公司；甲醇和乙腈（色譜純），德國Merck 公司；甲酸（色譜純），上海安譜實驗科技股份有限公司；氯化鈉和無水硫酸鎂（分析純），國藥集團化學試劑有限公司 。PSA（分析純），天津博納艾杰爾科技有限公司；GCB（分析純），上海安譜實驗科技股份有限公司；實驗用水為屈臣氏蒸餾水。

1.2 標準溶液的配置

移取1.0 mL 上述標準品溶液， 置于100 mL 棕色容量瓶中， 用乙腈定容，配制成10.0 μg/mL 標準儲備液，于-18℃下保存。

準確移取1.0 mL 標準儲備液，置于10 mL 棕色容量瓶中，用50%（v/v）乙腈水溶液定容，配置成1.0μg/mL 標準使用液。取適量矮壯素的標準使用液，用50%（v/v）乙腈水溶液配置成質量濃度為0.1μg/L、0.5μg/L、1μg/L、5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L 的系列標準工作液。

1.3 樣品前處理

稱取約5 g（精確至0.0001）樣品至50 mL 離心管，加入10 mL 乙腈，于2500 Hz 下震蕩1 min，加入 4 g 無水MgSO4和1 g NaCl，于相同條件下震蕩5 min 后，5000 rpm 下離心5 min。分取2 mL 上清液于10 mL 離心管中（內含300 mg 無水MgSO4、50 mg PSA、5 mg GCB），渦旋1 min，5000 rpm 下離心5 min，上清液過0.22 μm 有機濾膜供HPLC-MS/MS 分析。

1.4 色譜與質譜條件

1.4.1 液相色譜條件

色譜柱： Agilent Poroshell 120 EC-C18 （100 mm×2.1 mm，2.7 μm）；柱溫： 30 ℃；進樣量： 2 μL；流速： 0.3 mL/min；流動相： 乙腈 （A）和0.1%甲酸水 （B）， 梯度洗脫程序見表1。

表1 矮壯素梯度洗脫程序

1.4.2 串聯質譜條件

離子源： 電噴霧離子源，正離子模式（AJS ESI+），多反應監測（MRM）掃描；干燥氣溫度：350℃；干燥氣流速： 11 L/min；霧化器壓力： 45 psi；鞘氣溫度：350℃；毛細管電壓： 3500 V；電子倍增管電壓： 500 V；定性離子對、定量離子對、駐留時間及碰撞能量見表2。

表2 矮壯素的質譜參數

2 結果與討論

2.1 LC-MS/MS 的優化

2.1.1 流動相的選擇

少量甲酸可以增加化合物在正離子模式下的電離效率，有助于M 形成［M+H］+?；诖?，本實驗比較了乙腈-0.1%甲酸水溶液和甲醇-0.1%甲酸水溶液為流動相梯度洗脫，考察對目標化合物峰形及離子化效率的影響。結果表明，以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動相，矮壯素的峰型更對稱，且靈敏度更高。

2.1.2 質譜參數的優化

在正離子模式下，用濃度為1.0 μg/mL 的標準溶液進行全掃描確定母離子；確定母離子后，在SIM 模式下，對透鏡補償電壓進行優化；然后在某一特定的碰撞能下，對已確定的母離子使其產生特定的子離子，選取豐度強且干擾小的兩對子離子作為子離子，最后對碰撞能進行優化。矮壯素的一級和二級質譜圖如圖1。

圖1 矮壯素的離子碎片圖

圖 2 不同提取溶劑對矮壯素提取率的影響 （n=3）

2.2 樣品前處理優化

2.2.1 提取溶劑的選擇

矮壯素是一種強極性農藥，易溶于水、甲醇和乙腈等溶劑，因而本實驗考察了甲醇和乙腈對矮壯素的提取效率。通過添加40 μg/kg 的矮壯素到陰性樣品中，比較了用甲醇和乙腈作提取溶劑的提取率。結果顯示，分別用甲醇和乙腈作為提取樣品中的矮壯素，再經過分散固體劑凈化，乙腈提取率（95.21%）比甲醇（51.42%）的更高（圖2）。實驗發現，與乙腈相比，用甲醇作為提取劑，使得提取液中色素等干擾物質越來越多，不利于后期的凈化，增加了質譜的干擾。為了減少后續分析過程中的干擾成分，提高方法的靈敏度和準確度，本實驗選擇乙腈作為提取溶劑。

2.3 方法驗證

2.3.1 基質效應

本實驗選擇贛南臍橙陰性樣品配置質量濃度為5 μg/L、50 μg/L、100 μg/L 的基質標準溶液和純溶劑的標準溶液，按照公式（1）計算基質效應，其基質效應如圖3 所示。一般來說，基質效應<0.85 表現為基質抑制；基質效應>1.15，表現為基質增強；0.85 ≤基質效應≤1.15，基質效應可以忽略［11］。結果顯示，用乙腈作為提取溶劑，5 μg/L、50 μg/L 和100 μg/L 的基質效應分別為95.68%、89.37%和97.04%，這說明矮壯素在低、中、高濃度下基質效應可以忽略，研究者可以用純溶劑代替基質來配置標準曲線。

圖3 不同濃度的矮壯素的基質效應 （n=3）

2.3.2 線性范圍和檢出限

在1.3 條件下對矮壯素標準溶液進行測定，以不同濃度的標準溶液為橫坐標，不同濃度標準品溶液對應的峰面積為縱坐標進行線性回歸，其線性方程為y=621.72x-780.85， 相關系數R2=0.9991。結果表明，矮壯素在0.1~200 μg/L 范圍內線性關系良好。分別以3 倍信噪比 （S/N=3）和10 倍信噪比 （S/N=10）確定矮壯素的方法檢出限 （LOD）和定量限 （LOQ），結果分別為0.06 μg/kg 和0.18 μg/kg。

本方法的檢出限低、靈敏度高、線性關系良好， 適用矮壯素的定量分析。

2.3.3 準確度和精密度

在贛南臍橙陰性樣品中添加低（10 μg/kg）、中（100 μg/kg）、高（200 μg/kg）3 個水平的矮壯素標準溶液，每個水平進行6 次平行實驗，計算加標回收率和精密度，實驗結果如表3 所示。結果顯示，在3 個不同濃度水平下，贛南臍橙中矮壯素的平均回收率在90.29%~97.14%，相對標準偏差為1.29%~4.42%，完全滿足GB/T 5009.219—2018 的精密度≤10%的要求。

表3 矮壯素的加標回收率和精密度（n=6）

3 結論

本研究建立了固體分散劑耦合高效液相串聯質譜儀測定贛南臍橙中矮壯素的殘留量的分析方法，方法簡便、高效，靈敏度高，線性關系、準確度和精密度均滿足方法學指標，可為對贛南臍橙中矮壯素殘留的快速檢測提供技術手段。