貴州省黔東南州規模豬場豬偽狂犬病gE抗體檢測

汪一江 田 珂 劉榮枝 張人俊 毛以智 吳通奎 王 彬 汪忠榮*

(1 東北農業大學動物醫學學院，黑龍江哈爾濱 150006；2 貴州農業職業學院，貴州貴陽 551400；3 貴州省黔東南州動物疫病預防控制中心，貴州凱里 556000；4 貴州省動物疫病預防控制中心，貴州貴陽 550008；5 貴州大學動物科學院，貴州貴陽 550025）

豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）是一種可引起多種動物共患的烈性傳染病病毒，患病豬是該病毒的主要儲存宿主[1]，農業農村部最新發布的動物疫病病種名錄中明確將其列為二類動物疫病，并被列為規模種豬場必須凈化的病種之一。據有關研究資料報道，從2011年起，全國豬場PRV-gE 抗體陽性率在增加[2]。在貴州省也有對部分地區豬偽狂犬病野毒感染情況的研究[3]，但針對黔東南州規模豬場比較全面的豬偽狂犬病gE抗體陽性率調查方面的研究報道還未見到，因此，本研究在2022年對黔東南州轄區內規模豬場（含合作社）的豬群進行偽狂犬病gE抗體監測，分析不同季節、不同生長階段和不同飼養條件下豬偽狂犬病gE抗體陽性率，為黔東南州豬偽狂犬病的凈化、有效預防與控制提供科學的數據支撐，為生豬健康發展提供一定參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗樣品

采集貴州省黔東南州16 個縣市不同規模豬場臨床健康豬群的血液，分離血清，棄去溶血樣品，-86℃保存。共收集血清樣品1 388 份。

1.1.2 試劑來源

豬偽狂犬病病毒gE 蛋白ELISA 抗體檢測試劑盒（批號：20220906，武漢科前生物股份有限公司）由貴州省動物疫病預防控制中心贈送。

1.1.3 主要儀器

生物安全柜（BSC-1100ⅡA-2）生產廠家為濟南鑫貝西生物技術有限公司，酶標儀生產廠家為賽默飛世爾儀器有限公司，臺式離心機生產廠家為江蘇金壇雙捷實驗儀器廠，-86℃超低溫冰箱（TH-86-500-LA）生產廠家為北京天地精儀科技有限公司，生化培養箱購于上海雙捷實驗設備有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 檢測

試劑室溫平衡，稀釋血清，加入包被板、溫育、洗板、加入酶標記物、洗板、加入底物液、避光顯色后加入終止液，記錄酶標儀上630 nm 波長的讀數。

1.2.2 結果判定

將讀取的OD630nm值根據公式計算，若試驗成立，根據讀數判定樣品的陰陽性。用Excel 軟件對數據進行統計匯總。

2 結果與分析

2.1 不同季度豬偽狂犬病gE抗體

從表1 可見，2022年第一季度檢測生豬243 頭，豬偽狂犬病gE抗體陽性頭數為51 頭，陽性率為20.99%，4 個季度中陽性率最低；第二季度的陽性率為29.34%（93/317）；第三季度的陽性率為35.29%（144/408），在4 個季度的檢測中陽性率最高；第四季度的陽性率為23.33%（98/420）。全年豬偽狂犬病gE抗體陽性率為27.81%。按照季度排序為第三季度＞第二季度＞第四季度＞第一季度的豬偽狂犬病gE抗體陽性率。

表1 不同季度豬偽狂犬病gE抗體陽性率

2.2 不同生長階段豬群偽狂犬病gE抗體

從表2 可看出，生產母豬的豬偽狂犬病gE抗體陽性率為31.99%（167/522），種公豬抗體陽性率為7.34%（8/109），哺乳仔豬抗體陽性率為46.10%（71/154），保育仔豬抗體陽性率為28.40%（69/243），育肥豬抗體陽性率為20.28%（73/360）。由此可知，豬群中豬偽狂犬病gE抗體陽性率由高到低依次為：哺乳仔豬＞生產母豬＞保育仔豬＞育肥豬＞種公豬。

表2 不同生長豬階段豬群豬偽狂犬病gE抗體陽性率

2.3 不同飼養條件豬群偽狂犬病gE抗體

從表3 可知，小型豬場（合作社）豬偽狂犬病gE抗體陽性率為45.41%（198/436），高于中型豬場的陽性率（27.08%），遠高于大型豬場的抗體陽性率（10.61%）。

表3 不同飼養條件豬群豬偽狂犬病gE抗體陽性率

3 討論

gE 基因是PRV 的主要毒力基因[4]，該基因編碼產生的蛋白抗體可以應用ELISA 法區分與gE 基因缺失疫苗免疫產生的抗體。據有關研究顯示，近年來，我國多地相繼發生了豬偽狂犬病，豬偽狂犬病gE抗體陽性率呈上升趨勢，本次調查結果黔東南州規模豬場PRV-gE 抗體平均陽性率為27.81%，高于2018年汪忠榮等[5]對黔東南州部分規?；i場的調查結果，這與全國豬偽狂犬病野毒感染調查相關研究變化趨勢一致[6-8]。在研究調查中還發現，小型豬場或合作社豬偽狂犬病gE抗體陽性率相對較高，黔東南州小型合作社大多是幾戶或十幾戶村民自發組織成立的，部分小型豬場由原有養殖大戶發展而成，飼養管理粗放，奉行原生態飼養模式，對動物疫病防控的意識較低。同時，國家將豬偽狂犬病免疫列入常規強制免疫病種，費用需養殖場自行負擔，基于成本考慮，養殖場主更不愿意接種豬偽狂犬病疫苗。此外，黔東南州民族節日較多，村民走親訪友較頻繁，一旦有豬偽狂犬病疫情發生，更易造成病毒的傳播和擴散，在一定層面推動了該地區豬偽狂犬病的流行和傳播。因此，政府應加強豬偽狂犬病防控知識的宣傳和指導，同時，加強指導大型規模場對豬偽狂犬病的凈化，提升生物安全管理水平和意識。

黔東南州夏秋多雨，易引發山洪，蚊蟲較多，鼠類活動也較多，增加了疫病防控難度。本次調查結果顯示，第二季度和第三季度豬偽狂犬病gE抗體陽性率均較高，第三季度最高。豬偽狂犬病的主要傳染源來自發病豬、隱性帶毒豬和鼠類，但犬貓食用含有病毒的老鼠或病死豬廢棄物，也會將病毒傳播和擴散。小型養殖場（或合作社）對場內防鼠防鳥設施設備和管理措施不是很重視，到夏秋季鼠類活動頻繁，飼料等常有被鼠類偷食現象。此外，很多小型養殖場主喜歡在場內飼養幾只獵犬，且幾乎采取放養方式，獵犬食物來源復雜[9]。因此，第二、三季度豬偽狂犬病gE抗體陽性率上升可能與鼠類和犬類活動頻繁有關。有研究發現，豬在潮濕、氣溫多變的夏季、秋季更容易感染豬偽狂犬病，提示在夏季，更要注重該病的防控，本次調查與相關研究資料報道基本一致[10]。

在隱性帶毒豬場，隨著生產母豬胎次的增加，豬偽狂犬病gE抗體陽性率也會增加，哺乳仔豬豬偽狂犬病gE抗體水平高低與母豬乳汁帶毒相關，在本次調查中，生產母豬和哺乳仔豬的偽狂犬病gE抗體陽性率都相對較高，結果與他人研究結果一致[11,12]。因此，應加強豬場豬偽狂犬病的監測，推行種豬凈化，應及時進行淘汰豬偽狂犬gE 抗體陽性個體或生產性能不佳的母豬。對曾為偽狂犬病gE抗體陽性豬場，建議采用偽狂犬病基因缺失疫苗實施免疫接種，并定期采樣檢測免疫效果，根據檢測情況，建立完善適合本場的免疫程序，以防止病毒對未感染豬群及仔豬的早期感染。育肥豬群檢測到豬偽狂犬病毒gE 抗體陽性，提示生豬在育肥豬階段也存在感染豬偽狂犬病病毒的風險，有研究表明，生豬在120日齡后感染豬偽狂犬病野毒的概率會逐漸增加，建議對育肥豬在100日齡加強1 次豬偽狂犬病疫苗免疫，防止野毒感染[13-15]。同時，育肥場也應關注豬群的免疫程序是否科學合理，加強采樣監測等，定期開展風險評估，降低因感染病毒而對豬群造成的危害，減少經濟損失。

4 結論

貴州省黔東南州規模豬場存在豬偽狂犬病gE抗體陽性，且有上升趨勢，2022年的第二季度和第三季度相對較高，使其感染呈現一定的季節性，比較檢測結果還發現，小型養豬場（合作社）豬偽狂犬病毒gE 抗體陽性率最高，說明在今后偽狂犬病的防控中，小型養豬場（合作社）應作為重點監測對象，并加以關注。