鋸葉棕果實化學成分分離鑒定及抗前列腺炎活性研究

郝麗亞，李冰潔，王中林，鄭新華

(平頂山學院 醫學院，河南 平頂山 467000)

鋸葉棕果實為棕櫚科灌木植物鋸葉棕櫚（Serenoarepens(bartr.) small）成熟的干燥果實，又稱沙巴棕、藍棕、鋸棕櫚[1].鋸葉棕主要分布于美國東南部、墨西哥及中國的海南、廣西、河南、湖北、安徽、浙江等地.鋸葉棕果實具有清熱利濕、祛痰平喘、解毒消癰、鎮靜止痛的功效，臨床用于治療前列腺炎、內分泌紊亂、乳房發育不良、風濕性關節痛、頭痛、食欲不振、酒精中毒等50 多種疾病[2].藥理作用[3]顯示鋸葉棕果實具有抗菌、催欲生精、利尿、調節內分泌、祛痰平喘、鎮靜、解痙、抗腫瘤等活性.鋸葉棕果實主要化學成分包括脂肪酸、黃酮、三萜、木脂素、揮發油、生物堿等[4].詹緒新等[5]研究顯示鋸葉棕果實提取物可有效緩解慢性前列腺炎大鼠的精液炎性指標.鋸葉棕果實提取物軟膠囊（批準文號Z20170002，德國泰德制藥廠）作為治療良性前列腺增生的新藥，可有效緩解前列腺增生患者的臨床癥狀，提高患者的生存質量[6].

本研究組致力于前列腺相關疾病研究，為了進一步探討鋸葉棕果實治療前列腺炎的活性成分，本文對鋸葉棕果實提取物進行分離純化，并測試所得化合物抗前列腺炎活性.

1 儀器與材料

DRX-600 型核磁共振波譜儀（德國Bruker 公司）；Agilent1200 型高分辨質譜儀（美國Agilent Technologies 公司）；Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠（美國Waters 公司）；柱色譜硅膠（青島海洋化工廠）；HR-150A 型分析天平（日本艾安得公司）；氘代二甲基亞砜-d6(DMSO-d6，北京昱盛澤生物科技有限公司) ；白介素（IL）-1β，IL-6 酶聯免疫試劑盒（上海恒遠生化試劑有限公司）.所用試劑均為分析純.

鋸葉棕果實采自河南平頂山市，由平頂山學院鄭新華教授鑒定為鋸葉棕櫚[Serenoarepens(bartr.)small]成熟的干燥果實.

2 提取與分離

取鋸葉棕果實19.7 kg，加90%乙醇連續回流得到鋸葉棕果實浸膏2.3 kg.依次加入石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得石油醚部分浸膏 (Fr.A，135.2 g)，二氯甲烷部分浸膏 (Fr.B，142.7 g)，丙酮部分浸膏 (Fr.C，164.9 g)，正丁醇部分浸膏(Fr.D，171.5 g).

取Fr.B，采用硅膠柱分離，以石油醚-乙酸乙酯(體積比90:10→60:40→40:60→10:90)梯度洗脫，得到9 個組分 (Fr.B1～Fr.B9).取Fr.B2，采用硅膠柱進行分離，以石油醚-丙酮 (體積比80:20→50:50→20:80)梯度洗脫，得化合物1(25 mg)、2(26 mg)、10(23 mg)、11(19 mg).取Fr.B5，采用硅膠柱進行分離，以石油醚-乙酸乙酯 (體積比70:30→50:50→20:80)梯度洗脫，得化合物3(21 mg)、4(18 mg)、6(27 mg)、14(26 mg)、20(30 mg)、24(23 mg)、26(19 mg).

取Fr.C，采用硅膠柱行分離，以二氯甲烷-乙酸乙酯 (體積比80:20→50:50→20:80→0:100)梯度洗脫，得到10 個組分 (Fr.C1～Fr.C10).取Fr.C3，采用硅膠柱進行分離，以二氯甲烷-丙酮 (體積比70:30→50:50→20:80)梯度洗脫，得化合物5(23 mg)、8(21 mg)、12(29 mg)、13(22 mg)、21(18 mg).取Fr.C5，采用硅膠柱進行分離，以二氯甲烷-丙酮 (體積比80:20→20:80→0:100)梯度洗脫，得化合物7(25 mg)、9(18 mg)、15(31 mg)、18(23 mg).

取Fr.D，采用硅膠柱進行分離，以乙酸乙酯-甲醇 (體積比80:20→50:50→20:80→0:100)梯度洗脫，得到9 個組分 (Fr.D1～Fr.D9).取Fr.D2，采用硅膠柱進行分離，以丙酮-甲醇 (體積比70:30→50:50→20:80)梯度洗脫，得化合物16(18 mg)、17(26 mg)、18(23 mg)、19(29 mg)、22(27 mg).取Fr.D4，采用硅膠柱進行分離，以丙酮-甲醇 (體積比60:40→30:70)梯度洗脫，得化合物16(18 mg)、23(25 mg)、25(24 mg).

3 結構鑒定

化合物1 無色膠狀物 (丙酮).ESI-MSm/z:204.9 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:6.39 (1H,m,H-2),5.32 (1H,m,H-6),5.18 (1H,m,H-5),4.47 (2H,m,H-1),3.12 (1H,m,H-4β),2.71 (1H,m,H-4α),1.93 (3H,s,8-CH3),1.65 (3H,s,9-CH3).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 60.3 (C-1),142.6 (C-2),128.4 (C-3),37.1 (C-4),76.1 (C-5),124.6 (C-6),139.2 (C-7),25.8 (8-CH3),18.5 (9-CH3).以上數據與文獻[7] aglycone 基本一致.

化合物2 白色粉末 (丙酮).波譜數據與文獻[8]2,2′,3,3′,4,4′-六羥基-6,6′-聯苯二甲酸二乙酯基本一致.

化合物3 白色晶體 (丙酮).波譜數據與文獻[9]丁香脂素基本一致.

化合物4 白色針晶 (丙酮).波譜數據數據與文獻[10] 3,4,5-三甲氧基肉桂醇基本一致.

化合物5 白色粉末 (丙酮).ESI-MSm/z:558.9 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙酮-d6)δ:5.71 (1H,s,H-11),4.38 (1H,d,J=12.0 Hz,H-3),4.16 (1H,m,H-2),3.08 (1H,m,H-18),1.57 (3H,s,H-24),1.43 (3H,s,H-27),1.38 (3H,s,H-29),1.03 (3H,d,J=8.2 Hz,H-30),0.93 (3H,s,H-25),0.87 (3H,s,H-26).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 49.1 (C-1),67.1(C-2),80.5 (C-3),56.3 (C-4),51.4 (C-5),22.6 (C-6),32.1 (C-7),38.5 (C-8),49.4 (C-9),37.5 (C-10),23.8(C-11),129.2 (C-12),139.1 (C-13),41.8 (C-14),30.5(C-15),27.1 (C-16),49.3 (C-17),54.8 (C-18),72.6 (C-19),43.1 (C-20),28.3 (C-21),40.2 (C-22),179.4 (C-23),15.2 (C-24),18.1 (C-25),17.9 (C-26),24.8 (C-27),179.1 (C-28),28.2 (C-29),18.1 (C-30).以上數據與文獻[11] triterpenoster 基本一致.

化合物6 黃色粉末 (甲醇).波譜數據與文獻[12] 5,6,7,4′-四羥基-黃酮醇基本一致.

化合物7 白色粉末 (甲醇).波譜數據與文獻[13] salicifoneoliganol 基本一致.

化合物8 淡黃色粉末 (甲醇),ESI-MSm/z:215.2 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙酮-d6)δ:6.31 (1H,d,J=8.2 Hz,H-3),7.61 (1H,d,J=8.2 Hz,H-4),6.73 (1H,s,H-5),6.59 (1H,s,H-8),3.87 (3H,s,8-OCH3).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 124.6 (C-1),163.2 (C-2),102.9 (C-3),143.7 (C-4),113.5 (C-5),144.2 (C-6),151.9 (C-7),108.2 (C-8),55.8 (8-OCH3).以上數據與文獻[14] scopoletin 基本一致.

化合物9 白色粉末 (丙酮).波譜數據與文獻[15]3,5-二甲氧基-4-羥基苯丙酮基本一致.

化合物10 淡黃色粉末 (丙酮),ESI-MSm/z:285.1 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙酮-d6)δ:6.41 (1H,s,H-7),6.09 (1H,s,H-5),5.01 (1H,s,8-OH),3.83 (3H,s,10-OCH3),3.07 (2H,t,J=8.2 Hz,H-3),2.93 (2H,m,H-2′),2.63 (2H,m,H-6′),2.48 (2H,m,H-3′),2.37 (2H,m,H-5′),2.19 (2H,m,H-2).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 48.2 (C-1),36.1 (C-2),38.5 (C-3),147.2 (C-4),78.5 (C-5),98.3 (C-7),153.4 (C-8),125.2 (C-9),53.3 (C-1′),33.2 (C-2′),32.7 (C-3′),211.5 (C-4′),100.8 (C-5′),159.6 (C-6′),55.6 (10-OCH3).以上數據與文獻[16] cannabispiran基本一致.

化合物11 棕色粉末 (丙酮),ESI-MSm/z:765.3 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:6.81 (2H,d,J=2.2 Hz,H-5,5′),6.73 (2H,br s,H-2,2′),6.43 (2H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-6,6′),4.97 (2H,t,J=2.2 Hz,H-9α,9′α),3.76 (2H,t,J=2.2 Hz,H-9β,9′β),3.65 (6H,s,3,3′-OCH3),3.52 (6H,s,4,4′-OCH3),2.91 (2H,dd,J=12.0,5.2 Hz,H-7α,7′α),2.52 (2H,dd,J=12.0,2.2 Hz,H-7β,7′β),2.48 (2H,m,H-8,8′).13C NMR (150 MHz,acetone-d6)δ: 126.1(C-1),113.1 (C-2),147.2 (C-3),144.2 (C-4),110.9(C-5),124.6 (C-6),40.3 (C-7),46.2 (C-8),69.5 (C-9),126.1 (C-1′),113.1 (C-2′),147.2 (C-3′),144.2 (C-4′),110.9(C-5′),124.6 (C-6′),40.3 (C-7′),46.2 (C-8′),69.5 (C-9′),56.3 (3-OCH3),55.7 (3′-OCH3).以上數據與文獻[17] diarctigenin 基本一致.

化合物12 黃色粉末 (丙酮),ESI-MSm/z:273.4 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:7.61 (1H,s,H-8),7.23(1H,d,J=8.2 Hz,H-4),7.13(1H,s,H-5),6.62 (1H,d,J=8.2 Hz,H-2),2.53 (3H,s,7-CH3).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 166.8 (C-1),108.5 (C-2),167.2 (C-3),108.2 (C-4),150.3 (C-4α),120.9 (C-5),135.3 (C-6),164.2 (C-7),124.9 (C-8),191.7 (C-9),184.1 (C-10),114.6 (C-8α),108.2 (C-9α),137.1 (C-10α),23.5 (7-CH3).以上數據與文獻[18]1,3,7-trihydroxy-6-methyl-anthraquinone 基本一致.

化合物13 白色粉末 (甲醇).波譜數據與文獻[19] 3-羥基-4-甲氧基肉桂酸甲酯基本一致.

化合物14 白色粉末 (丙酮),ESI-MSm/z:236.8 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:7.09 (1H,s,H-8),6.53 (1H,s,H-5),6.37 (2H,s,H-2',6'),4.91 (1H,d,J=8.2 Hz,H-1),4.63 (1H,d,J=12.0 Hz,H-4),4.47 (1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-11α),4.09 (1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-11β),3.84 (6H,s,3',5'-OCH3),3.79 (3H,s,4'-OCH3),2.96 (1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-2),2.63(1H,m,H-3).13C NMR (150 MHz,丙 酮-d6)δ: 44.3(C-1),45.7(C-2),43.6(C-3),72.9 (C-4),108.1 (C-5),151.3 (C-6),51.3 (C-7),109.4(C-8),133.2 (C-9),134.3 (C-10),73.1 (C-11),176.3(C-12),137.6 (C-1'),111.5 (C-2'),154.1 (C-3'),137.3(C-4'),154.1 (C-5'),111.5 (C-6'),58.2 (3'-OCH3),60.7(4'-OCH3).以上數據與文獻[18] podophyllotoxin 基本一致.

化合物15 白色粉末 (丙酮),ESI-MSm/z:560.9 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:7.15 (1H,d,J=8.2 Hz,H-6′),7.03 (1H,d,J=8.2 Hz,H-2′),6.79 (1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-6′′),6.65～6.71 (5H,m,H-2,5,6,2′′,5′′),5.51 (1H,d,J=8.2 Hz,H-7′′),4.65 (1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-7′),4.02 (3H,s,10-OCH3),3.75 (3H,s,10′-OCH3),3.71 (3H,s,10′′-OCH3),3.51 (1H,m,H-8′′).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 135.7 (C-1),113.8 (C-2),148.1 (C-3),144.9 (C-4),115.3 (C-5),120.7 (C-6),33.8 (C-7),44.0(C-8),73.4 (C-9),136.1 (C-1′),108.4 (C-2′),151.5 (C-3′),148.3 (C-4′),12 8.3(C-5′),1 158.4 (C-6′),83.5 (C-7′),54.0 (C-8′),59.7 (C-9′),134 .2(C-1′′),109.2 (C-2′′),151.5 (C-3′′),146.2(C-4′′),117.6 (C-5′′),120.4 (C-6′′),90.2 (C-7′′),55.3 (C-8′′),65.1 (C-9′′),58.1 (10-OCH3),56.7 (10′-OCH3),56.3 (10′′-OCH3).以上數據與文獻[20]herpetriol 基本一致.

化合物16 黃色粉末 (丙酮).波譜數據與文獻[21] 4’,5-二羥基-3’,7-二甲氧基黃酮基本一致.

化合物17 白色針晶 (丙酮).波譜數據與文獻[22] 對羥基苯甲酸基本一致.

化合物18 白色結晶 (丙酮).波譜數據與文獻[22] 羥基苯甲醛基本一致.

化合物19 白色結晶 (丙酮).波譜數據與文獻[23] 對羥基肉桂酸基本一致.

化合物20 白色粉末 (丙酮).波譜數據與文獻[24] 1,3,5-三甲氧基苯基本一致.

化合物21 白色針晶 (丙酮).ESI-MSm/z:325.1 [M+Na]+.1H NMR (600 MHz,丙 酮-d6)δ:9.57 (1H,s,4-OH) 7.51 (1H,d,J=8.2 Hz,H-2),7.23(1H,dd,J=8.2,2.2 Hz,H-6),6.92 (1H,d,J=8.2 Hz,H-5),3.52 (3H,s,3-OCH3).13C NMR (150 MHz,丙酮-d6)δ: 125.7 (C-1),112.4 (C-2),149.1 (C-3),153.8(C-4),115.4 (C-5),126.1 (C-6),193.7 (C-7),56.5 (3-OCH3).以上數據與文獻[25] vanillil 基本一致.

化合物22 黃色粉末 (丙酮).波譜數據與文獻[26] 1-(4-hydroxy-3,5-dimethoxyphenyl) ethanone基本一致.

化合物23 白色粉末 (丙酮).波譜數據與文獻[27] 對羥基苯丙酸基本一致.

化合物24 黃色粉末 (甲醇).ESI-MSm/z:265.1 [M+Na]+.1H NMR (DMSO-d6,600 MHz)δ:7.85 (1H,d,J=8.2 Hz,H-5),6.31 (1H,d,J=8.2,2.2 Hz,H-1),6.58 (1H,d,J=2.2 Hz,H-6),6.37 (1H,d,J=2.2 Hz,H-8),6.26 (1H,d,J=2.2 Hz,H-3),3.52(3H,4-OCH3),2.61 (4H,s,H-9,10).13C NMR(DMSO-d6,150 MHz)δ: 108.1 (C-1),161.4 (C-2),99.2 (C-3),158.5 (C-4),130.2 (C-5),115.1 (C-6),156.1 (C-7),113.9 (C-8),31.6 (C-9),29.4 (C-10),140.1 (C-1a),118.3 (C-2a),126.1 (C-3a),148.3 (C-4a),57.2 (4-OCH3).以上數值與Leong 等[28]報道的coelonin 數據基本一致.

化合物25 白色粉末 (甲醇).波譜數據與文獻[29] isopropylidenkirenol 基本一致.

化合物26 白色粉末 (甲醇).ESI-MSm/z309.3[M+Na]+.1H NMR (DMSO-d6，600 MHz)δ: 7.62(1H,d,J=8.2 Hz,H-4),7.20 (1H,d,J=8.2 Hz,H-5),6.71 (1H,d,J=8.2 Hz,H-6),6.09 (1H,d,J=8.2 Hz,H-3),5.11 (1H,dd,J=12.0,8.2 Hz,H-2'),3.39 (1H,dd,J=12.0,8.2 Hz,H-3'),3.31 (1H,dd,J=12.0,8.2 Hz,H-3'),1.96 (3H,s,H-4″),1.58 (3H,s,1″-CH3),1.39 (3H,s,1 ″-CH3).13C NMR (DMSO-d6,150 MHz)δ: 74.9 (C-1),156.7 (C-2),112.4 (C-3),145.1(C-4),127.2 (C-5),106.8 (C-6),163.2 (C-7),113.4 (C-8),150.6 (C-9),113.2 (C-10),82.4 (C-1'),90.2 (C-2'),28.1 (C-3').以上數值與Liao 等[30]報道的 libanoridin數據基本一致.

4 抗前列腺炎活性

取8 周齡雄性SD 大鼠90 只，體質量(210±20) g，均來源于平頂山學院醫學院實驗動物中心，動物合格證號：SYXK（豫）2018～0013.大鼠隨機分為正常組、模型組、陽性對照組、鋸葉棕果實提取物（TQU）組、化合物組（1～26），每組3 只.參照文獻[31]造模，正常組、模型組給予純化水；陽性組給予舍尼通灌胃，100 mg·kg-1；鋸葉棕果實提取物組給予鋸葉棕果實水提取物灌胃，300 mg·kg-1；化合物組（1～26），分別給予化合物1～26，200 mg·kg-1.每日1 次，連續14 d.末次給藥12 h 后，剝離大鼠前列腺，進行組織勻漿，采用按酶聯免疫吸附法檢測前列腺組織中IL-1β、IL-6 的水平.結果顯示（表1）：與模型組比較，化合物8、10、12、14、21、25組前列腺組織中IL-1β水平降低（P＜0.05）.與模型組比較，化合物5、8、12、25組前列腺組織中IL-6 水平降低（P＜0.05）.

表1 化合物對大鼠前列腺組織中 IL-1β 和 IL-6 的影響(，n=3)Tab.1 Effects of the compound on IL-1β and IL-6 in rat prostate tissue (xˉ±s,n=3)

表1 化合物對大鼠前列腺組織中 IL-1β 和 IL-6 的影響(，n=3)Tab.1 Effects of the compound on IL-1β and IL-6 in rat prostate tissue (xˉ±s,n=3)

與模型組比較 *P＜0.05.

5 討論

鋸葉棕果實為治療前列腺炎的常用藥物，療效明顯[32-35].本研究從鋸葉棕果實中分離得26 個化合物，均為首次從鋸葉棕果實中分離得到，其中化合物1、5、8、10、12、14、21、22、24、25、26為首次從該屬植物中分離得到.對所得化合物的抗前列腺炎活性測試顯示：化合物8、10、12、14、21、25對前列腺組織中IL-1β，化合物5、8、12、25對前列腺組織中IL-6 具有抑制作用.本研究結果豐富了鋸葉棕果實化學成分的物質基礎，對抗前列腺炎活性的新藥的研發提供了一定的幫助.