結直腸癌組織中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達及其臨床意義

祁曉星 徐丹丹 卞建強

結直腸癌較為常見,早期無明顯癥狀,病情不斷進展下可逐漸誘發便血、大便性狀改變、腹痛等,若不及時治療,則會對患者生命造成威脅[1-2]。手術是臨床治療結直腸癌重要手段,通過切除病灶后能夠延長患者生存時間,獲得較高生存率[3-4]。但長期隨訪發現,仍有部分結直腸癌患者術后存在復發轉移風險,若能于早期構建以腫瘤生物標志物為基礎的預后預測模型,則有助于改善預后。高遷移率族蛋白B2(HMGB2)是一種核內結構蛋白,在DNA重組修復過程中具有重要作用,與腫瘤侵襲、增殖等相關[5]。黑色素瘤相關抗原-A9(MAGE-A9)則為黑色素瘤抗原家族成員,在多種惡性腫瘤組織內均存在不同程度表達。DNA錯配修復基因(MMR)為人體修復DNA基堿錯配的安全保障系統,當其缺乏后則無法保證DNA復制的準確性,易出現癌基因突變等[6]。鑒于此,本研究分析結直腸癌中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達情況及其在預后評估中的臨床價值。報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2020年1月我院收治的52例結直腸癌患者作為研究對象,其中男性34例,女性18例;年齡38～72歲,平均年齡(54.19±5.13)歲;體質量指數19～28 kg/m2,平均體質量指數(23.63±2.15)kg/m2;腫瘤位置:28例結腸,24例直腸。納入標準:經病理活檢或手術確診為結直腸癌;均行手術治療;精神狀態正常;臨床資料完整;患者及家屬簽署知情同意書。排除標準:存有肝腎衰竭或凝血功能障礙;合并其他惡性腫瘤;中途隨訪失聯;術前接受化療;存在急慢性感染。

1.2 方法

所有患者均行手術治療,術中切除腫瘤組織標本,并距離腫瘤組織5 cm以上部位切除癌旁正常組織標本,術后均及時送檢。免疫組織化學法:取石蠟組織進行脫蠟、水化等處理,之后加入3% H2O2后在37攝氏度環境下濕盒孵育30 min,經高壓鍋抗原修復,封閉液孵育1 h;再滴加HMGB2、MAGE-A9一抗工作液,抗體4攝氏度孵育過夜;滴加二抗工作液,室溫下孵育0.5 h,經DAB顯色,再進行蘇木精復染、脫水、固定等操作,最后經熒光倒置顯微鏡觀察染色結果。結果判定:陽性細胞比例≤5%為0分,>5%且<25%為1分,≥25%且<50%為2分,≥50%且<75%為3分,≥75%為4分;無色為0分,淡黃色為1分,棕黃色2分,棕褐色為3分;兩者乘積>4分為陽性表達,反之為陰性表達。MMR:通過免疫組織化法檢測組織內hMLH1、hMSH2、hMSH6蛋白表達,標本均經3.7%甲醛液固定、脫水及石蠟包埋,連續切片,之后進行常規免疫組織化學法染色,以PBS代替一抗為陰性對照。結果判斷:當MMR蛋白位于細胞核,以細胞核存在黃褐色或棕黃色顆粒為陽性細胞,并隨機選取5個高倍鏡下視野,觀察陽性細胞占比,將無陽性細胞為0分,≤10%為1分,>10%且≤50%為2分,>50%且≤75為3分,>75%則為4分;著色程度為無色為0分,淡黃色為1分,棕黃色2分,棕褐色為3分;兩項乘積>3分則為MMR表達正常,反之為缺失。hMLH1、hMSH2、hMSH6均正常表達為MMR陰性表達,至少一項表達缺失者為陽性表達。隨訪:所有患者均開展3年隨訪,隨訪內容包括存活情況,隨訪方式為電話隨訪或門診復查。

1.3 觀察指標

(1)比較腫瘤組織與癌旁組織中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達差異。(2)分析比較HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達與年齡、性別、腫瘤分期、分化程度、淋巴結轉移等病理特征間的關系。(3)比較HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白不同表達患者生存率。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達情況

腫瘤組織內HMGB2、MAGE-A9、MMR陽性表達高于癌旁組織,差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 組織標本中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達情況對比(例,%)

2.2 HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達與病理特征間關系

腫瘤分期Ⅲ期、分化程度低分化、淋巴結轉移患者HMGB2、MAGE-A9、MMR陽性表達率高于Ⅰ期、Ⅱ期、中、高分化、無淋巴結轉移患者,差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 HMGB2蛋白表達與病理特征的關系(例,%)

2.3 HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表達與預后關系

隨訪3年,52例患者存活率為71.15%(37/52)。HMGB2陽性組存活率[61.76%(21/34)]低于HMGB2陰性組[88.89%(16/18)],差異有統計學意義(χ2=4.219,P=0.040);MAGE-A9陽性組存活率[58.62%(17/29)]低于MAGE-A9陰性組[86.96%(20/23)],差異有統計學意義(χ2=5.018,P=0.025);MMR陽性組存活率[52.00%(13/25)]低于MMR陰性組[88.89%(24/27)],差異有統計學意義(χ2=8.606,P=0.003)。

3 討論

結直腸癌發病與遺傳、飲食、消化道疾病關系密切,多種因素長期影響,可促使腸道黏膜細胞發生癌性變化[7-8]。以手術為主的綜合治療方案是治療結直腸癌的重要手段,但仍有患者預后欠佳,還需進一步深入研究腫瘤相關分子機制,以便于尋找結直腸癌分子靶點,并將其用于疾病的診斷和治療,從而更好地改善患者預后[9-10]。

HMGB2屬于細胞周期調控蛋白,可參與G2/M期及G1/S期細胞周期轉化,與腫瘤增殖、侵襲及轉移關系密切。相關研究顯示[11-12],HMGB2在結直腸癌中會受到長鏈非編碼RNA調控,HMGB2表達水平較高,則會加快腫瘤細胞上皮-間質轉化,促使腫瘤進展。MAGE在腫瘤的發生及發展中具有重要作用,而MAGE-A9則為MAGE家族成員,為腫瘤特異性抗原,在多種惡性腫瘤中均存在高表達,能夠增強腫瘤侵襲能力,加速腫瘤生長[13]。MMR共包括hMLH1、hMLH3、hMSH2、hMSH6、hPMS1等9種,其中hMLH1、hMSH2、hMSH6突變在MMR突變中占比較高,可判斷MMR情況。MMR在人體中主要功能在于識別、糾正錯配位點,確保DNA復制準確性,一旦MMR出現突變,則會喪失錯誤配對修復功能,引起基因組不穩定,導致部分癌基因或突變的抑癌基因迅速聚集,促使腫瘤過度增殖[14-15]。本研究結果顯示,腫瘤組織內HMGB2、MAGE-A9、MMR陽性表達高于癌旁組織;腫瘤分期Ⅲ期、分化程度低分化、淋巴結轉移患者HMGB2、MAGE-A9、MMR陽性例數高于Ⅰ期、Ⅱ期、中、高分化、無淋巴結轉移患者;HMGB2陽性組存活率低于HMGB2陰性組,MAGE-A9陽性組存活率低于MAGE-A9陰性組,MMR陽性組存活率低于MMR陰性組。提示HMGB2、MAGE-A9、MMR在結直腸癌中存在異常表達,腫瘤分期高、存在淋巴結轉移及低分化程度患者異常表達更為明顯,且與預后關系密切。其原因為HMGB2、MAGE-A9、MMR異常表達均與腫瘤的發生、發展及轉移密切相關,可通過多種途徑加速腫瘤的生長,增強腫瘤侵襲轉移能力,促使腫瘤進展更為迅速,臨床分期普遍偏高,且易合并淋巴結轉移等。而腫瘤分期、淋巴結轉移又是影響患者預后的重要危險因素,故HMGB2、MAGE-A9、MMR異常表達患者在預后普遍較差。

綜上所述,HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白在結直腸癌中存在不同程度異常表達,且腫瘤分期高、低分化程度及有淋巴結轉移患者的表達異常更為明顯,且異常表達越明顯則預后越差。