健胃消脹片通過調節PI3K-Akt-eNOS通路改善大鼠胃癌前病變

黃海陽， 鐘少雯， 安云， 王宇新， 朱淑敏， 高潔， 盧曉敏， 董明國

（1.東莞市中醫院，廣東東莞 523000；2.廣州中醫藥大學中藥學院，廣東廣州 510006；3.廣州市番禺區中醫院，廣東廣州 511408）

胃癌前病變（precancerous lesions of gastric cancer，PLGC）是指在慢性萎縮性胃炎的基礎上伴有腸黏膜上皮化生（IM）或異型增生（DYS）改變[1]。Correa級聯反應指明胃癌發生的病理演變過程：正常胃黏膜→非萎縮性胃炎→慢性萎縮性胃炎→胃黏膜腸上皮化生→胃黏膜異型增生→胃癌[2-3]。在我國，胃癌的發病率位居第2，僅次于肺癌[4]?，F代年輕人常因飲食不節而罹患胃腸系統疾病，而常見的胃腸道疾病若不加以重視則可能演化為重癥或惡性腫瘤。胃癌前病變是胃炎演化為胃癌的“黃金截點”，也是臨床上預防胃癌的研究重點，正確認識并應對胃癌前病變、尋找針對胃癌前病變的有效治療藥物，是降低胃癌發生率的關鍵。

健胃消脹片為廣州中醫藥大學東莞醫院研制的中藥復方制劑，具有行氣消脹、健運脾胃、調和氣血等功效，用于功能性消化不良、慢性胃炎、膽汁反流性胃炎等疾病，臨床療效確切。為拓展健胃消脹片的臨床應用范圍，本課題組前期通過多個實驗考察其對胃癌前病變相關疾病模型的干預效果，發現健胃消脹片對慢性萎縮性胃炎大鼠的胃黏膜有一定的保護作用，能增強胃黏膜屏障的防御和修復能力[5-6]，還能抑制胃酸分泌、促進小腸運動[7]。在前期研究的基礎上，本研究擬進一步考察健胃消脹片對胃癌前病變大鼠模型治療的潛在機制，為本病的臨床合理用藥提供參考依據，現將研究結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 40 只SPF 級6 周齡雄性SD 大鼠，體質量220～240 g，由廣州中醫藥大學實驗動物中心提供，實驗動物質量合格證號：44005800008402。于SPF級環境檢疫飼養，自由攝食和飲水，于動物房內適應性飼養7 d后用于后續實驗。本動物實驗方案已經廣州中醫藥大學動物實驗倫理委員會審核批準（批號：20210426006）。

1. 2 藥物及制備 健胃消脹片（由枳實、沉香、大腹皮、莪術、山藥、墨旱蓮、石斛、甘草、雞內金、紫蘇梗等10味中藥組成），為廣東省東莞市中醫院院內制劑（批號：20210426），使用時溶解于無菌生理鹽水，制成終質量濃度25 mg·mL-1；葉酸片，福建海王福藥制藥公司生產（批號：21042810），使用時溶解于無菌生理鹽水，制成終質量濃度0.5 mg·mL-1；雷尼替丁，廣東省恒健醫藥公司生產，批號：國藥準字H44021173。

1.3 試劑與儀器 N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍（MNNG，廣州市康明生命技術公司，批號：20210601）；蘇木素-伊紅（HE）染色液、阿利新藍-過碘酸雪夫氏（AB-PAS）染色液（北京雷根生物技術有限公司）；大鼠胃泌素（GAS）酶聯免疫吸附分析（ELISA）試劑盒、大鼠胃動素（MTL）ELISA 試劑盒、大鼠胰高血糖素（GC）ELISA試劑盒（江蘇酶免實業有限公司）；磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、β-actin、血管內皮細胞生長因子A（VEGFA）等抗體，Anti-Rabbit lgG（H+L）HRP 二抗（美國Affinity 公司）；內皮型一氧化氮合酶（eNOS）抗體（美國SAB 公司）。HM340E 型半自動輪轉石蠟切片機（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；Gemini AS 型自動染色機（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；光學顯微鏡（日本Olympus 公司）；冷凍高速離心機（美國Thermo Fisher Scientific公司）；電泳儀（美國Bio-Rad公司）；顯影儀（廣州譽維生物科技儀器有限公司）；1510全波長酶標儀（美國Thermo Fisher Scientific公司）。

1.4 分組、造模與給藥 40 只SD 大鼠適應性喂養1周后，隨機抽取10只作為正常組，每天以2 mL生理鹽水灌胃，正常喂養，連續12周。其余30只大鼠應用聯合造模法構建胃癌前病變模型[8]：自由飲用質量濃度為180 μg·mL-1的MNNG，并配合3 mg·mL-1的雷尼替丁水溶液2 mL/只灌胃，連續12 周。若HE染色結果顯示模型大鼠胃黏膜壁層細胞結構改變，排列疏松、異常紊亂，胞核異形，出現杯狀細胞增生，腸化生現象等，AB-PAS染色結果顯示模型組大鼠胃組織黏膜層顯著變薄，則判斷胃癌前病變造模成功。成功造模后，將大鼠隨機分為模型組、葉酸組和健胃消脹片組，每組10 只。在造模第5 周開始給藥：葉酸組，每只大鼠以4 mg·kg-1的葉酸溶液灌胃；健胃消脹片組，根據課題組前期實驗的有效劑量范圍[5-7]結合動物倫理要求，給予0.5 g·kg-1劑量的健胃消脹片混懸液灌胃。連續給藥7周。全部實驗大鼠在末次給藥后禁食禁水12 h，麻醉滿意后，進行標本取材。

1.5 觀察指標與方法

1.5.1 大鼠體質量測量 記錄給藥期間各組大鼠體質量的變化。

1.5.2 胃部大體形態觀察 取出大鼠全胃，沿大彎側切開，傾倒內容物，生理鹽水沖洗干凈，觀察胃部大體觀病理變化與評分[9]。評分標準：無損傷，計0分；黏膜充血、水腫，計1分；黏膜散在腫物突起，計2 分；黏膜腫物突起較多，計3 分；黏膜腫物突起成片，計4分。

1. 5. 3 脾臟系數和肝臟系數 取大鼠脾臟和肝臟，計算各組大鼠脾臟系數和肝臟系數。

1.5.4 血清GAS、MTL、GC含量測定 腹主動脈取血，分離血清，根據ELISA 試劑盒說明書的操作步驟和方法，測定大鼠血清中GAS、MTL、GC含量。

1. 5. 5 HE 染色法觀察胃組織病理形態 分離大鼠胃組織，在干凈濾紙上縱向切段（含胃底、胃體、胃竇），以10%福爾馬林溶液固定24 h 以上，經石蠟包埋后切片（厚度4 μm）。用自動染色機對切片進行HE染色，顯微鏡下觀察比較各組胃組織病理形態變化，并對胃組織炎癥程度進行評分[9]，評分標準如表1。

表1 胃組織炎癥程度評分標準Table 1 Scoring criteria for the degree of inflammation in gastric tissue

1.5.6 AB-PAS 染色法檢測胃組織黏膜層厚度將大鼠胃組織石臘切片，二甲苯脫蠟至水。阿利新藍染色液染色15 min，入過碘酸溶液氧化5 min，Schiff Reagent 浸染15 min，Leagene 蘇木素染色液染核1 min，酸性分化液分化3 s，Scott 藍化液返藍。每個步驟后均蒸餾水洗，然后逐級常規乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。顯微鏡下觀察，并用ImageJ軟件測量比較各組胃組織AB-PAS陽性表達的黏膜層厚度。

1.5.7 Western Blot法檢測胃組織PI3K-Akt-eNOS通路相關蛋白表達 胃組織加入放射免疫沉淀分析（RIPA）裂解緩沖液[蛋白磷酸酶抑制劑∶苯磺酰氟（PMSF）∶RIPA=1∶1∶10；組織與緩沖液比為1∶10]，勻漿裂解后在4 ℃、12 000g下離心10 min，收集上清，用二喹啉甲酸（BCA）蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度。樣品加入SDS 緩沖液于恒溫金屬浴中100 ℃、10 min 加熱變性，十二烷基硫酸鈉（SDS）-聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）分離（30 min，80 V；40 min，120 V），將蛋白轉移到聚偏氟乙烯（PVDF）膜上。室溫下用5%脫脂奶粉封閉2 h，分別加入按體積比稀釋的PI3K（1∶1 000）、p-PI3K（1∶1 000）、Akt（1∶1 000）、p-Akt（1∶1 000）、eNOS（1∶1 000）、β-actin（1∶4 000）等抗體4 ℃孵育過夜。TBS-0.1%Tween 20（TBST）洗滌膜3 次，每次8 min，加入二抗Anti-Rabbit lgG（H+L）（1∶4 000）室溫孵育1 h后，再按上述方法洗滌膜。通過顯影儀獲得蛋白質圖像，利用ImageJ 軟件測量條帶灰度比，并以β-actin 為參照，分析各組目的蛋白表達的差異。每組選取3 個不同的樣本重復上述實驗。

1. 5. 8 免疫熒光染色法檢測胃組織VEGFA 蛋白表達 將胃組織石蠟切片經60 ℃烘片3 h后經二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水，在枸櫞酸修復液中進行抗原修復，用胎牛血清封閉30 min，滴加適宜稀釋比例的一抗（VEGFA）置濕盒中4 ℃孵育過夜。PBS洗去一抗后滴加熒光二抗置濕盒中室溫避光孵育1 h。PBS洗去二抗，用濾紙擦去標本外的PBS，滴加DAPI避光孵育5 min，對標本進行顯核。最后用甘油封片，并在熒光顯微鏡下立即觀察。

1.6 統計方法 采用SPSS 20.0統計軟件進行實驗數據分析，計量數據以均數±標準差（）表示，多組比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA）結合Post Hoc 檢驗，以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 給藥期間各組大鼠體質量變化比較 圖1 結果顯示：給藥期間各組大鼠體質量百分比總體呈增長趨勢。正常組大鼠體質量百分比增長速度最快，實驗結束時相比給藥前體質量增長幅度最大；模型組大鼠于治療第5周體質量百分比開始一度出現下降趨勢，實驗結束時相比治療組開始給藥時體質量增幅最??；葉酸組大鼠于治療第2周和第5 周、健胃消脹片組大鼠于治療第3 周和第5 周體質量百分比均有所下降，但在給藥治療后期增幅比模型組大，實驗結束時相比給藥治療前的增幅均比模型組大。

圖1 給藥期間各組大鼠體質量百分比變化比較Figure 1 Comparison of percentage change in body mass of rats among various groups during drug administration

2. 2 各組大鼠胃部大體觀病理變化比較 圖2、表2結果顯示：正常組大鼠胃部大體上無明顯病變的特點，色澤紅潤，表面平滑，無水腫或充血、糜爛、結節腫塊；模型組大鼠胃部胃黏膜表面疣狀突起成片，顏色泛白，糜爛明顯，黏膜有明顯充血、水腫現象；葉酸組大鼠胃部胃黏膜輕微充血、水腫，顏色微紅，有部分突起，無明顯糜爛，胃部大體觀病理評分顯著低于模型組（P＜0.05）；健胃消脹片組大鼠胃部胃黏膜外表光滑，色澤微紅，無明顯疣狀突起，也未見明確的缺損，胃部大體觀病理評分顯著低于模型組（P＜0.01）。

圖2 各組大鼠胃部大體觀Figure 2 Gross view of stomach in each group of rats

表2 各組大鼠胃部大體觀病理評分比較Table 2 Comparison of pathologic scores of the macroscopic view of the stomach of rats among various groups（）

表2 各組大鼠胃部大體觀病理評分比較Table 2 Comparison of pathologic scores of the macroscopic view of the stomach of rats among various groups（）

注：①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.05，③P＜0.01，與模型組比較

胃部病變評分/分0.00±0.00 1.67±0.69①0.75±0.38②0.58±0.34③組別正常組模型組葉酸組健胃消脹片組鼠數/只10 10 10 10

2.3 各組大鼠臟器系數比較 表3 結果顯示：與正常組比較，模型組大鼠的脾臟系數、肝臟系數顯著降低，差異有統計學意義（P＜0.01）；與模型組比較，健胃消脹片組和葉酸組大鼠脾臟系數、肝臟系數顯著升高，差異有統計學意義（P＜0.01）；2 個治療組間比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。

表3 各組大鼠臟器系數比較Table 3 Comparison of organ coefficients among various groups of rats（）

表3 各組大鼠臟器系數比較Table 3 Comparison of organ coefficients among various groups of rats（）

注：①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.01，與模型組比較

肝臟系數/%2.67±0.37 2.32±0.18①2.65±0.26②2.60±0.15②組別正常組模型組葉酸組健胃消脹片組鼠數/只10 10 10 10脾臟系數/%0.22±0.03 0.18±0.01①0.22±0.04②0.20±0.01②

2.4 各組大鼠血清GAS、MTL、GC含量比較 表4結果顯示：與正常組比較，模型組大鼠血清GAS含量升高，MTL、GC 含量降低，差異均有統計學意義（P＜0.05 或P＜0.01）；與模型組比較，健胃消脹片組大鼠血清GAS 含量降低，MTL、GC 含量升高，差異均有統計學意義（P＜0.01），葉酸組MTL含量升高（P＜0.01），GAS、GC含量差異無統計學意義（P＞0.05）。

表4 各組大鼠血清胃泌素（GAS）、胃動素（MTL）、胰高血糖素（GC）含量比較Table 4 Comparison of serum gastrin（GAS），motilin（MTL）and glucagon（GC）levels in rats among various groups（）

表4 各組大鼠血清胃泌素（GAS）、胃動素（MTL）、胰高血糖素（GC）含量比較Table 4 Comparison of serum gastrin（GAS），motilin（MTL）and glucagon（GC）levels in rats among various groups（）

注：①P＜0.05，②P＜0.01，與正常組比較；③P＜0.01，與模型組比較

組別正常組模型組葉酸組健胃消脹片組GC/（pg·mL-1）60.77±7.24 46.48±5.76①54.01±15.28 59.50±6.44③鼠數/只10 10 10 10 GAS/（ng·L-1）10.21±0.52 11.56±0.47②10.90±0.61 10.20±0.63③MTL/（pg·mL-1）361.27±36.08 300.80±44.03①430.03±22.79③425.20±18.34③

2. 5 各組大鼠胃組織病理形態變化比較 圖3、表5結果顯示：正常組大鼠胃黏膜上皮細胞完全連續性，腺體整齊緊密排列，細胞間布局規整有序，內部結構清晰，未見異型增生細胞，無炎癥細胞浸潤，無充血、水腫出現，黏膜和肌層沒有異常[10]，見圖3-b~c；模型組大鼠胃黏膜壁層細胞結構改變，排列疏松、異常紊亂，胞核異形，出現杯狀細胞增生，腸化生現象（見圖3-e），提示胃組織癌前病變，同時出現血管充血，水腫現象[11-12]（見圖3-f），與正常組相比炎癥評分顯著升高，差異有統計學意義（P＜0.01）；葉酸組部分可見杯狀細胞增生（見圖3-h），血管充血、水腫現象仍較嚴重（見圖3-i），與模型組相比稍有好轉，炎癥評分亦有所降低（P＜0.05）；與模型組比較，健胃消脹片組大鼠胃黏膜壁層細胞排列尚規整，未見明顯杯狀細胞增生和腸化生（見圖3-k），血管充血現象已明顯改善（見圖3-l），炎癥評分顯著下降（P＜0.01）。以上結果提示健胃消脹片治療胃癌前病變大鼠后，胃組織癌前病變得到明顯改善。

圖3 各組大鼠胃組織HE染色結果（a、d、g、j，×200；b、c、e、f、h、i、k、l，×400）Figure 3 HE staining results of rat stomach tissues in each group（a，d，g，j，×200；b，c，e，f，h，i，k，l，×400）

表5 各組大鼠胃組織炎癥評分比較Table 5 Comparison of inflammation scores of gastric tissues of rats among various groups（）

表5 各組大鼠胃組織炎癥評分比較Table 5 Comparison of inflammation scores of gastric tissues of rats among various groups（）

注：①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.05，③P＜0.01，與模型組比較

炎癥評分/分0.0±0.0 9.0±0.8①6.0±0.8②4.3±0.5③組別正常組模型組葉酸組健胃消脹片組鼠數/只10 10 10 10

2.6 各組大鼠胃組織黏膜層厚度比較 圖4、表6結果顯示：模型組大鼠胃組織AB-PAS陽性表達層與正常組相比明顯變薄，即胃保護屏障變薄，黏膜層厚度差異有統計學意義（P＜0.05）；與模型組比較，健胃消脹片組和葉酸組大鼠胃組織黏膜層增厚，其中，健胃消脹片組AB-PAS陽性表達程度高于葉酸組，且與模型組相比黏膜層厚度差異有統計學意義（P＜0.05）。

圖4 各組大鼠胃組織AB-PAS染色結果（×200）Figure 4 AB-PAS staining results of rat stomach tissues in each group（×200）

表6 各組大鼠胃組織黏膜層厚度比較Table 6 Comparison of the thickness of the mucous membrane layer in the gastric tissues of rats among various groups（）

表6 各組大鼠胃組織黏膜層厚度比較Table 6 Comparison of the thickness of the mucous membrane layer in the gastric tissues of rats among various groups（）

注：①P＜0.05，與正常組比較；②P＜0.05，與模型組比較

黏膜層厚度/μm 398.94±66.04 232.20±20.06①336.23±71.71 333.74±42.72②組別正常組模型組葉酸組健胃消脹片組鼠數/只10 10 10 10

2. 7 各組大鼠胃組織PI3K-Akt-eNOS 通路相關蛋白表達比較 圖5、表7 結果顯示：與正常組比較，模型組大鼠胃組織PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、eNOS 蛋白表達水平降低，其中PI3K、p-PI3K、p-Akt、eNOS 蛋白表達差異有統計學意義（P＜0.01）。與模型組比較，葉酸組胃組織PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、eNOS 蛋白表達升高，其中p-PI3K、Akt、p-Akt 蛋白表達差異有統計學意義（P＜0.05 或P＜0.01）；健胃消脹片組胃組織PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、eNOS 蛋白表達水平較模型組升高，其中p-PI3K、Akt、p-Akt、eNOS 蛋白表達差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。

圖5 各組大鼠胃組織PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、eNOS蛋白的Western Blot條帶Figure 5 Western Blot bands of PI3K，p-PI3K，Akt，p-Akt，and eNOS proteins in rat stomach tissues of each group

表7 各組大鼠胃組織PI3K-Akt-eNOS通路相關蛋白相對表達量比較Table 7 Comparison of relative expressions of PI3K-Akt-eNOS pathway-related proteins in gastric tissues of rats among various groups（）

表7 各組大鼠胃組織PI3K-Akt-eNOS通路相關蛋白相對表達量比較Table 7 Comparison of relative expressions of PI3K-Akt-eNOS pathway-related proteins in gastric tissues of rats among various groups（）

注：①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.05，③P＜0.01，與模型組比較

組別正常組模型組葉酸組健胃消脹片組eNOS/β-actin 1.00±0.06 0.42±0.04①0.76±0.23 0.91±0.12②鼠數/只10 10 10 10 PI3K/β-actin 1.00±0.03 0.78±0.04①0.83±0.08 1.02±0.20 p-PI3K/β-actin 1.00±0.16 0.22±0.04①0.84±0.30②0.99±0.04③Akt/β-actin 1.00±0.36 0.34±0.13 1.10±0.19③0.85±0.04②p-Akt/β-actin 1.00±0.08 0.19±0.19①0.73±0.21②0.93±0.19③

2.8 各組大鼠胃組織VEGFA蛋白表達比較 為觀察各組大鼠胃組織微血管生成和修復能力，利用免疫熒光染色法檢測胃組織VEGFA 蛋白的表達。圖6、表8 結果顯示，與正常組比較，模型組大鼠胃組織VEGFA 蛋白表達水平顯著下降（P＜0.01），提示胃癌前病變大鼠胃組織血管生成與修復能力受損。與模型組比較，葉酸組胃組織VEGFA 蛋白表達水平升高（P＜0.05），健胃消脹片組VEGFA蛋白表達水平顯著升高（P＜0.01），提示健胃消脹片治療胃癌前病變大鼠后，能明顯改善由癌前病變造成的大鼠胃組織血管生成與修復能力受損，且改善效果優于葉酸。

圖6 各組大鼠胃組織VEGFA的免疫熒光染色結果（×200）Figure 6 Immunofluorescence staining results of VEGFA in the gastric tissues of rats in each group（×200）

表8 各組大鼠胃組織VEGFA蛋白陽性表達比較Table 8 Comparison of VEGFA protein positive expression in gastric tissues of rats among various groups（）

表8 各組大鼠胃組織VEGFA蛋白陽性表達比較Table 8 Comparison of VEGFA protein positive expression in gastric tissues of rats among various groups（）

注：①P＜0.01，與正常組比較；②P＜0.05，③P＜0.01，與模型組比較

VEGFA陽性表達率/%24.00±1.44 5.80±1.14①9.75±2.01②17.44±1.26③組別正常組模型組葉酸組健胃消脹片組鼠數/只10 10 10 10

3 討論

胃癌前病變是一個組織病理學概念，指相應的病理變化比正常組織或其他病理改變更易發生癌變，如胃黏膜上皮異型增生、腸上皮化生等。輕中度非典型增生經過及時治療大部分會減輕或消退，因此，及早干預是非常有效的防癌措施。

中醫認為，胃為六腑之一，以通為順，滿而不能藏。胃癌前病變相關癥狀多表現為胃動力減弱、腹脹隱痛等，既要消食導滯，更要從根本上強健脾胃，增加胃動力[13-15]。健胃消脹片是我院的院內制劑，臨床治療常見慢性胃病效果顯著，相關的實驗研究亦驗證其藥效。本研究進一步發現健胃消脹片能下調胃癌前病變大鼠血清中的胃泌素（GAS）含量、上調胃動素（MTL）和胰高血糖素（GC）含量，基于健胃消脹片具有行氣消脹、健運脾胃的功效，提示其對胃癌前病變的改善作用可能與抑制潰瘍、改善胃動力等機制有關。本研究病理分析結果顯示，健胃消脹片能顯著改善胃癌前病變大鼠胃部大體觀病理變化及胃黏膜壁層細胞排列疏松、異常紊亂，胞核異形和杯狀細胞增生、腸化生現象，并能改善炎癥，藥效結果優于葉酸?，F代藥理研究表明，葉酸通過增強胃黏膜DNA 甲基化狀態、改善貧血等機制改善胃癌前病變[16-17]，但葉酸會促進胃酸分泌，對胃的刺激性大。而本研究通過對胃組織病理形態的檢查發現，健胃消脹片對胃癌前病變大鼠胃組織黏膜層細胞排列疏松、血管充血現象的改善作用優于葉酸；胃組織AB-PAS染色結果表明，健胃消脹片對胃癌前病變大鼠胃黏膜的修復作用亦優于葉酸，提示健胃消脹片對胃癌前病變的改善作用可能與其促進胃黏膜血液循環、保護黏液分泌功能細胞及加速黏膜屏障的重建有關。

持續的血管新生是腫瘤的基本特征之一，增殖活躍的腫瘤細胞分泌高水平的促血管生成因子，形成無序、不成熟、可滲透的腫瘤血管網絡，腫瘤灌注受損，形成更利于腫瘤侵襲的缺氧微環境[18]。研究[19]表明，促進血管生成和修復能抑制胃癌癌前病變進程。PI3K-Akt-eNOS 信號通路是調控體內血管生成和修復的重要信號轉導通路[20-22]，該信號通路的激活可促進體內損傷組織的微血管生成和修復[23-26]。血管內皮細胞生長因子VEGFA是由VEGFA基因編碼的蛋白質，該蛋白質是糖基化的有絲分裂原，其特異性地作用于內皮細胞，具有誘導血管生成和修復的作用[27]。本研究結果表明，胃癌前病變大鼠胃組織PI3K-Akt-eNOS通路相關蛋白表達水平均顯著降低，VEGFA 蛋白表達亦顯著下調，提示在胃癌前病變病理狀態下PI3K-Akt-eNOS 通路被抑制，胃組織微血管生成和修復能力變差。而健胃消脹片能激活PI3K-AkteNOS 通路，使該通路相關蛋白表達水平升高，上調胃組織VEGFA 蛋白表達，表明健胃消脹片可能通過激活PI3K-Akt-eNOS 信號通路促進胃損傷組織的血管生成和修復能力，從而改善胃癌前病變。

綜上所述，健胃消脹片對胃癌前病變大鼠的病理表征和胃組織損傷均有改善作用，其機制可能與激活PI3K-Akt-eNOS 信號通路從而改善胃損傷組織的血管生成和修復能力有關。本研究有待下一步進行前瞻性的臨床研究，以論證健胃消脹片對胃癌相關病變的治療效果。但鑒于胃癌前病變是一個漫長的過程，PI3K-Akt-eNOS信號通路的調控作用是否發生在胃癌前病變整個階段與其是否與胃癌細胞的轉移有關仍不清楚，這也是本課題將重點研究的方向。