染發劑二羥吲哚毒理學驗證實驗與分析

李忠軍　徐建人　李鎮軍　胡燁敏　樊麗妃　李奇　焦紅

二羥吲哚合成應用在國外已有30 多年歷史。國內外多年研究發現，二羥吲哚有天然黑色染發作用，還具有抗菌、清除自由基和抗紫外輻射等功效。SCCP 早在18 年前就公布了二羥吲哚的染發劑安全性評價結果和使用推薦濃度。本文通過對國產二羥吲哚進行相關毒理學項目的重復驗證，將實驗結果同國際實驗室相應項目的結果進行比較，為中國化妝品新原料的批準提供科學依據。根據中國《化妝品新原料申報與審評指南》規定，本實驗采用《化妝品技術規范2015 版》中動物急性經口和經皮毒性、皮膚和眼刺激性/ 腐蝕性、皮膚變態反應性、皮膚光毒性、皮膚光變態反應性、基因突變、染色體畸變和90 天經皮染毒實驗方法，進行相關毒理學實驗，對結果進行比較評價。實驗結果顯示，小鼠經口急性毒性，雄性LD50 ＞ 3.690g/kg BW，雌性LD50 ＞3.160g/kg BW，毒性分級為低毒。急性經皮毒性試驗LD50>2.180g/kg BW，毒性分級為微毒性。急性眼刺激性/ 腐蝕性試驗反應分級為微刺激性。皮膚變態反應試驗致敏強度為輕致敏性。皮膚刺激性/ 腐蝕性試驗反應分級為輕刺激性?；蛲蛔兒腿旧w畸變試驗均為陰性。皮膚光毒性和皮膚光變態反應均為陰性。亞慢性經皮毒性最大無作用劑量為20 mg/kg bw/day。所驗項目同國際組織SCCP 公布的結果比較基本一致，大部分項目的結果優于國外。實驗結果顯示，本土相關產品二羥吲哚在染發劑中以0.5% 濃度添加使用是安全的。

關鍵詞：二羥吲哚；染發劑；動物毒理學試驗；結果比較

Part 1

前言

據國內外多年研究發現，二羥吲哚有天然黑色染發作用，同時具有抗菌、清除自由基和抗紫外輻射、以及作為抗氧化劑制備各類應急性疾病的預防或治療藥物等功效。二羥吲哚作為新一代染發護發用品中的有效活性成分已成為發展趨勢，也是國內外關注的研究熱點[1]。二羥吲哚目前在日本稱作為“空氣氧化性染發劑”[2]。歐盟委員會健康和消費者保護總局公共衛生及風險評估委員會（以下簡稱：“SCCP”）0952/05 《關于對二羥基吲哚的意見》報道了多個國際實驗室依據GLP程序和OECD 方法指南，對物質代碼為P36和P39 的二羥吲哚樣品開展毒理學實驗，據此做出安全性評估意見和推薦使用濃度[3]。近10 年來， 隨著精細化學新產品的發展，中國在二羥吲哚合成方法和用途方面的報道也不斷出現，但是尚未被批準使用。根據中國《化妝品新原料申報與審評指南》要求[4]，申請注冊化妝品新原料，應符合情景II 要求的項目進行毒理學評價。本文對相關二羥吲哚原料分別進行了急性經口、經皮毒性、急性眼刺激、皮膚刺激性/ 腐蝕性、皮膚變態反應、皮膚光毒性、皮膚光變態反應和基因突變、染色體畸變和90 天經皮染毒等10 項毒理學實驗，并將實驗結果與SCCP/0952/05 的同項實驗結果進行比較，為本土二羥吲哚原料開發的毒理學評價提供科學依據。

Part 2

材料和方法

1. 實驗樣品來源

廣州市驕子日化有限公司提供產品染發劑原料二羥吲哚（批號研2023001-1） 共500mg。來源于3，4- 二烷氧基苯乙胺同溶劑乙酸在催化劑三溴化硼作用下，加氧化劑五氧化二磷和溶劑四氫呋喃進行氧化反應，加還原劑連二亞硫酸鈉進行還原反應生成二羥吲哚液體。再經乙酸乙酯萃取、鹽水洗滌、減壓濃縮、冷凍結晶、真空干燥得到單一化合物二羥吲哚，純度高達97% 以上。500mg 二羥吲哚由鋁箔真空袋封存為5 袋，每袋100mg，外包裝完整無殘缺無泄漏。開袋后樣品為黑灰色固體粉末狀，見空氣顏色加深，二羥吲哚純度≥ 97.5%。實驗二次取樣后充氮封存，加套自封袋再次充氮4℃保存。

2. 實驗環境

急性經口毒性試驗、急性經皮毒性試驗、急性眼刺激性/ 腐蝕性試驗、皮膚刺激性/ 腐蝕性試驗、皮膚變態反應試驗在廣州市黃埔區瑞發路16 號2 棟一樓動物毒理實驗室完成，實驗動物使用許可證號：SYXK（粵）2021-0270。室溫18℃～ 26℃，濕度40% ～ 70%。上述動物實驗設計經過廣州市宜健醫學技術發展有限公司實驗動物福利和倫理委員會批準。

皮膚光毒性試驗、皮膚光變態反應試驗、基因突變和染色體畸變實驗在廣州市黃埔區科學城尖塔山路1 號普通環境動物毒理實驗室和體外實驗室完成，實驗動物使用許可證號：SYXK（ 粵）2022-0194。室溫18℃～ 26℃，濕度40% ～ 70%。上述動物實驗設計經過廣州市微生物研究所集團股份有限公司實驗動物倫理委員會批準。

3. 實驗動物和飼料來源

急性經口毒性試驗使用SPF 級KM小鼠（ 雌雄各半）；實驗動物生產許可證號∶SCXK（粵）2022-0002；動物合格證號：44007200113413。飼料購自廣東省醫學實驗動物中心，批號：20220907。質量合格證：No.4420030028392。急性經皮毒性試驗使用SPF 級SD 大鼠（雌雄各半），實驗動物、飼料來源和批號同1.3.1。動物合格證號：NO.44007200113412。

急性眼刺激性/ 腐蝕性試驗使用普通級新西蘭兔，實驗動物生產許