報告基因
- 膽汁酸和 MAPK信號通路對 HepG2細胞中 PPARα轉錄表達的調控作用
域的熒光素酶報告基因質粒,通過雙熒光素酶報告基因系統在HepG2細胞中研究了ERK1/2、JNK1/2信號通路、FXR以及膽汁酸對hPPARα轉錄表達的調控作用,并進一步驗證參與調控的順式作用元件,為防治NAFLD的研究提供新思路。1 材料和方法1.1 細胞株及主要試劑人肝癌細胞HepG2購自中科院上海細胞庫;人胚胎腎細胞HEK293T由廣州大學精準基因編輯中心喬云波教授課題組饋贈;螢火蟲熒光素酶報告基因質粒PGL4-UPRE-luc2P-Hygro(10
山西醫科大學學報 2023年10期2023-11-24
- 放射性核素探針在嵌合抗原受體T 細胞治療顯像中的應用
接標記顯像、報告基因顯像和內源性細胞顯像，筆者將對這3 種顯像方法的優劣勢進行綜述，并展望未來的發展方向。1 直接標記顯像直接標記是指使用放射性核素對CAR-T 標記的技術，其標記過程簡單，對細胞的操作較少。根據小分子和納米顆粒能在體內滯留的特性，CAR-T 可使用小分子和納米顆粒直接進行放射性標記。1.1 基于小分子的標記Parente-Pereira 等[9]用111In-tropolate 直接標記CAR-T 后，發現通過靜脈注射時，111In-tr
國際放射醫學核醫學雜志 2023年5期2023-08-15
- 雙重數字PCR法評價Luc2P系列報告基因細胞系的穩定性
速發展，基于報告基因的生物活性分析方法越來越廣泛地應用于重組蛋白類藥物的質量控制［1-5］?！吨袊幍洹啡浚?020版）已收錄了2個品種的報告基因測活方法：Ⅰ型干擾素和康柏西普［6］。藥物反應性的報告基因細胞系是此類方法的基礎，細胞系的穩定性是方法穩定性的前提。因此，對于報告基因測活方法，報告基因細胞系的穩定性至關重要?？赏ㄟ^監測細胞傳代過程中報告基因拷貝數變化來考察細胞的穩定性。目前檢測基因拷貝數的常用方法是qPCR，但該法為相對定量，需要標準物質［7
中國生物制品學雜志 2023年7期2023-07-30
- 雞PPARγ基因轉錄本5的兩個上游開放閱讀框功能分析
。本研究采用報告基因和定點突變等技術，開展cPPARγ5 兩個uORFs 功能分析。1 材料與方法1.1 試驗材料pcDNA3.1（+）真核表達載體（購自美國Invitrogen 公司）， pGL3-basic 熒光素酶報告基因載體（購自美國Promega 公司），海腎報告基因載體pGL3-TK（購自美國Promega 公司），5'UTR 轉錄后分析用報告基因載體psiCHECK2（本實驗室保存）[12]。雞永生化前脂肪細胞系ICP1（本實驗室保存），雞胚
東北農業大學學報 2023年1期2023-02-07
- 基于NF-κB熒光蛋白報告基因抗腫瘤藥物篩選平臺的建立
細胞模型、以報告基因和其他類型連用為靶點的細胞模型。事實上，前3種藥物篩選細胞模型通常均是與報告基因聯用建立起來的，這樣可以快速且直觀地觀察到藥物作用于細胞后的變化。常用的報告基因有5種，分別是熒光素酶（luciferase，Luc）［10］、 氯霉素乙酰轉移酶（chloramphenicol acetyltransferase，CAT）［11］、 β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，β-gal）［12］、 分泌性人胎盤堿性磷酸酶（secret
激光生物學報 2022年6期2023-01-11
- 內皮細胞與前腎細胞的命運決定受轉錄因子Cloche/Npas4l、Tal1和Lmo2的調節
成了一個敲入報告基因，以觀察野生型和突變型胚胎中內皮祖細胞及其衍生物。出乎意料的是，研究人員發現在npas4l突變體中，表達npas4l報告基因的細胞對前腎小管的形成有貢獻。野生型胚胎早期側板中胚層的單細胞轉錄組學和活體成像確實揭示了內皮和前腎標記物的共表達，這一發現被基于creERT2的譜系追蹤所證實。在tal1和lmo2突變體中也觀察到表達npas4l報告基因的細胞對前腎小管的貢獻增加，并且在注射了tal1mRNA的npas4l突變體中這種作用被逆轉。
廣東藥科大學學報 2022年5期2022-12-30
- 視網膜神經節細胞特異的報告基因干細胞系構建及其應用
的治療。利用報告基因將視網膜神經節細胞可視化，使我們能夠更直觀地了解其發育過程，也有利于后續的富集再利用。封面展示了視網膜神經節細胞特異的熒光報告基因干細胞系在眼科學研究中的應用。封面主體由三個元素組成：視網膜類器官在明場下的形態、同一區域在熒光顯微鏡下的形態和切片染色的熒光圖像組成。封面上部為類器官形態圖，明場形態及其對應熒光圖像構成一個類似眼睛的圖案，一方面以顯示該干細胞系的部分應用，昭示它的建立可以在眼科學研究中起重要的作用；另一方面明場圖像和熒光圖
眼科學報 2022年4期2022-11-23
- 昆蟲雙雜交實驗中家蠶BmHSP83和BmMAD3蛋白引起的假性現象
uc熒光素酶報告基因的表達(圖1)。將兩個待測蛋白(X和Y)分別構建成pIE2-DBD-X和pIE2-AD-Y兩個載體，與pUAS-Luc一起共轉染昆蟲細胞，如果兩個蛋白相互作用，則觸發下游報告基因的表達。昆蟲雙雜交依靠熒光素酶檢測系統來反映昆蟲細胞內蛋白質的相互作用特性，因而在研究昆蟲蛋白質相互作用方面具有獨特的優勢。昆蟲雙雜交(I2H)是在酵母雙雜交(Y2H)技術基礎上發展起來的一種蛋白質互作分析技術，使那些無法用Y2H分析的蛋白，尤其是那些受到翻譯后
環境昆蟲學報 2022年1期2022-03-24
- 轉錄因子STAT5A啟動子熒光素酶報告基因質粒的構建及鑒定
前雙熒光素酶報告基因系統是轉錄水平調控研究重要的實驗方法。通過對啟動子序列和活性的分析，驗證啟動子結合元件的反式激活能力，進而驗證基因之間的轉錄調控關系[1]。乳腺癌現已超過肺癌，成為全球最常見的惡性腫瘤。而作為體表腫瘤，乳腺癌的轉移是患者因癌癥死亡的主要原因[2]。根據文獻報道，在發育的乳腺中，催乳素(prolactin，PRL)所介導的PRL-JAK2-STAT5A是較經典的調控分子通路，可以調控乳腺發育、增殖、分化、泌乳等重要功能[3-4]。在催乳素
癌變·畸變·突變 2022年1期2022-02-15
- 一種基于PXR啟動子報告基因藥物篩選方法的構建及其應用
有極大意義。報告基因技術在基于細胞檢測方法的開發中發揮了重要作用［11］。本實驗旨在建立pGL3-basic-PXRpro報告基因藥物篩選方法，并考察恩諾沙星、氟苯尼考以及10種連翹天然產物激活mPXR的誘導效應。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 實驗動物、細胞株與質粒 昆明小白鼠（20± 5 g）購自中國科學院蘭州獸醫研究所實驗動物中心（SCXK（甘）2015-0001）。動物購進適應性飼養3 d開始實驗，小鼠飼養條件：溫度（24±2）℃、濕度50%
生物技術通報 2021年9期2021-11-06
- 對腫瘤內miR-21表達進行契倫科夫光學成像的新方法：基于HSV1-tk報告基因
分子影像學與報告基因方法相結合，可展示基因的原位表達情況，一定程度上彌補了上述不足［6］。典型的報告基因體系，如I型單純皰疹病毒胸苷激酶（HSV1-tk）報告基因，結合9-［4-［18F］氟-3-(羥甲基)丁基］鳥嘌呤（［18F］FHBG）示蹤劑和正電子發生斷層成像（PET），已獲美國食藥監局批準用于臨床成像［7］。已報道的microRNA表達報告基因活體成像策略有［8］：（1）整合原microRNA啟動子基因與光學報告基因，構建直接展示相應microRN
分子影像學雜志 2021年3期2021-07-18
- Rb熒光素酶報告基因檢測系統構建及檢測能力評估
種易于檢測的報告基因系統對于研究Rb基因與腫瘤發生的關系和篩選靶向治療藥物具有重要意義。報告基因(reporter gene)是一類可以編碼熒光蛋白或酶，從而將看不見的底物轉化為發光或彩色產物的一類基因，是生物醫學領域基礎研究的一個重要工具，廣泛應用于檢測細胞的信號轉導和基因表達。通過在報告基因上附加元件來調節報告基因的活性，利用光學成像技術實時報告其表達的位置或水平，使了解疾病的分子基礎和體外藥物研發成為可能[5]。本實驗選擇以熒光素酶作為報告基因構建R
西安交通大學學報（醫學版） 2021年3期2021-05-15
- 雙熒光素酶報告基因系統在家蠶基因啟動子研究中的應用
至雙熒光素酶報告基因表達載體中，通過檢測雙熒光素酶報告基因系統熒光蛋白的酶活，從而分析目的基因啟動子的轉錄活性，這是基因轉錄調控研究中常用且有效的手段之一[2]。家蠶是鱗翅目昆蟲的模式生物，本文以家蠶基因啟動子調控機制的研究為切入點，對雙熒光素酶報告基因系統的工作原理與特點、研究和應用現狀進行綜述，有助于我們從細胞和分子層面理解昆蟲生長發育過程的基因轉錄表達調控機制，為今后該系統在昆蟲中的深入應用提供思考。1 雙熒光素酶報告基因系統的發展歷史熒光素酶是最初
廣東蠶業 2021年1期2021-03-18
- 開放實驗教學 優化分子生物學精品實驗項目
設計了“通過報告基因檢測細胞內cAMP 水平變化”“哺乳動物細胞的基因轉染”等實驗項目。其中尤以“報告基因檢測”實驗較為復雜，難度較高，該實驗涉及報告基因載體質粒構建、細胞報告基因轉染、報告基因表達產物鑒定等多個環節［5］。特別是本實驗中接觸到多種實驗技能，如細胞培養的無菌操作技術、細胞傳代培養技術、細胞計數、質粒的脂質體轉染技術、蛋白濃度測定方法、報告基因的檢測技術和生物統計學分析等。然而，由于實驗學時和操作時間的限制，學生要參與所有過程是困難的，所以大
實驗室研究與探索 2021年1期2021-02-27
- 報告基因在超聲成像中的應用進展
［1-2］。報告基因是一種編碼易被檢測的蛋白質或酶的基因［3］，作為新興分子影像探針，將報告基因轉入生物體后，通過影像技術檢測其表達產物釋放的信號，能獲得基因表達水平和細胞定位等生物學信息。目前已有光學報告基因應用于研究基因表達的時空性與特異性，但因其表達產物受光散射和組織自發熒光干擾較大，難以獲得高分辨率的深層組織圖像。超聲成像是一種非侵入性的醫學影像技術，通過接收、分析、顯示反射及散射的超聲波信號，獲得體內器官的功能和解剖信息［4］。與光子僅能穿透毫米
臨床超聲醫學雜志 2020年12期2020-12-20
- 轉錄因子KLF7對IL-6基因的轉錄調控分析
子區熒光素酶報告基因和KLF7表達質粒，KLF7過表達可顯著提高人IL-6啟動子活性[14]。在成纖維細胞誘導分化為成熟脂肪細胞過程中，高濃度棕櫚酸（PA）可促進鼠脂肪細胞KLF7、IL-6表達；過表達KLF7促進成熟脂肪細胞IL-6表達，而干擾KLF7抑制成熟脂肪細胞IL-6表達。以上報道提示，KLF7可能直接調控IL-6基因表達。為驗證這一推測，本文開展鼠轉錄因子KLF7調控IL-6基因的轉錄調控研究。研究證實KLF7直接調控IL-6基因表達，對了解K
東北農業大學學報 2020年10期2020-11-16
- 抑制劑T0070907 對雞PPARγ基因表達影響的研究
鼠胰腺細胞的報告基因和功能檢測中得到證實[12]，目前已成為研究PPARγ基因功能的主要工具。然而，本實驗室在前期針對雞PPARγ基因的功能研究中偶然發現，T0070907 非但不能抑制雞PPARγ的活性，反而對該基因的表達具有一定的促進作用。為驗證這一現象的真實性，本研究利用熒光定量PCR、western blot 和報告基因技術，分別從mRNA 表達水平、蛋白表達水平及蛋白活性等方面檢測了抑制劑T0070907 對DF-1 細胞中雞PPARγ基因兩種亞
中國預防獸醫學報 2020年2期2020-06-01
- 重組雙熒光素酶報告基因質粒psiCHECK-2-Intron構建轉染及轉染細胞螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶表達
，雙熒光素酶報告基因檢測已成為研究轉錄因子參與基因調控的有效手段,通過對啟動子DNA片段的分析，驗證啟動子結合元件的反式激活能力,探討轉錄因子在信號轉導中的分子機制[2]，在分子生物學中常用來研究基因功能、基因與基因間的調節、蛋白與基因的作用以及非編碼RNA對基因表達的調控[3]。雙熒光素酶報告基因檢測中，海腎熒光素酶為報告基因，螢火蟲熒光素酶為內參基因，兩個熒光素酶基因都有自己的啟動子、終止位點，二者獨立表達且互不干擾[4]。常見雙熒光素酶報告基因載體有
山東醫藥 2020年9期2020-05-20
- MicroRNA-129-5p在卵巢癌中表達的光聲成像研究
一種酪氨酸酶報告基因來監測卵巢癌中miR-129-5p的表達。酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)是負責黑色素生產的主要酶，可以提供很強的光聲成像的吸收對比度。我們通過黑色素體內外含量、酪氨酸酶活性、光聲信號證明了酪氨酸酶報告基因監測miR-129-5p表達活性的可行性。1 材料與方法1.1 材料酪氨酸酶TYR基因(NM_000372)質粒GV140-TYR購自上海吉凱公司；卵巢癌細胞SKOV3購自中國科學院上海細胞庫，并培養在DMEM培養基中，補充有
中國婦幼健康研究 2019年10期2019-11-02
- 報告基因法在生物技術藥物活性檢測中的應用
100071報告基因法（reporter gene assays，RGA）是通過分子生物學手段，將報告基因整合入待測的生物系統中，繼而通過檢測報告基因產生的信號，研究特定生物學過程的方法。從廣義上講，利用熒光蛋白觀察轉染細胞的效率，或者利用抗性基因篩選陽性克隆都屬于報告基因法。具體而言，報告基因與目的基因或調控序列相連，通過檢測報告基因編碼產物的活性，直觀反映細胞內基因的轉錄活性或表達水平[1]。比如將報告基因置于特定啟動子調控序列之后，可研究某種條件下啟
生物技術通訊 2019年2期2019-05-07
- MR示蹤技術在干細胞治療心肌梗死中的研究進展
蹤成像和MR報告基因成像。MR細胞示蹤成像的標志物具有特異性高、親和力強、半衰期長（保證足夠時間成像）、標記率高等特點，同時能在合適的磁場強度下改變弛豫率，最小檢測單位可達細胞水平[4]。本文綜述MR細胞示蹤成像技術的研究進展。1 MR標記細胞示蹤成像1.1 順磁性對比劑 MRI對比劑是通過縮短組織縱向弛豫時間或橫向弛豫時間，使得T1WI或T2WI上的目標成像區域產生高信號和低信號，從而達到區分目標區域和周圍組織的效果。T1陽性對比劑[如釓（Gd3+）和錳
國際醫學放射學雜志 2019年1期2019-03-19
- 雞miR-17-92基因簇宿主基因啟動子的甲基化及其功能分析
7HG啟動子報告基因載體pGL3-cMⅠR17HG（-4428/-2506）和A/T富集區啟動子報告基因載體（PGL3-AT-MⅠR17-92(-440/-1）為本實驗室保存的載體。1.2 主要分子生物學軟件 Primer Premier 5.0；GraphPad Prism 5；NCBⅠ（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/）；UCSC（http://genome. ucsc.edu/）；JASPAR（http://jaspar.bi
中國畜牧雜志 2018年11期2018-11-24
- 基于CRISPR/Cas9技術的人胚胎干細胞多模態示蹤系統構建
構建穩定表達報告基因的細胞株可對移植干細胞的命運進行實時監控，有助于移植策略的優化．多模態成像是指將光學成像與其他成像模式相結合，同時獲得多種參數的成像方式，最新的進展是三融合報告基因技術，由生物發光，熒光和PET(Positron Emision Tomograph)報告基因組成[4]．生物發光是生物利用體內的酶將化學能轉化為光能而發光的一種現象，常見的酶包括螢火蟲熒光素酶(Fluc)和海腎熒光素酶(Renilla Luciferease, Rluc)等
復旦學報（自然科學版） 2018年5期2018-11-14
- 鎘暴露上調HMOX1表達的啟動子相關活化區域鑒定
g.1.2 報告基因的構建及鑒定具有共同下游3'末端和不同5'末端的啟動子序列克隆進報告基因載體PGL6，雙酶切初步鑒定后測序鑒定.1.3 實驗方法1.3.1 細胞培養、處理和轉染：用含10%胎牛血清的DMEM培養基，于 37℃、5%CO2培養箱中 HeLa.用 50μM Cd2+處理細胞：用脂質體共轉染報告基因和內參基因.1.3.2 RT-PCR和免疫印跡：提取總RNA并逆轉錄成cDNA，按下面的循環條件做RT-PCR：94℃預變性2min，94℃變性
赤峰學院學報·自然科學版 2018年7期2018-08-11
- c-Myc轉錄上調長鏈非編碼RNA ZEB1-AS1促進結直腸癌細胞增殖
c位點缺失的報告基因載體構建。按照說明書操作，并將測序正確的克隆命名為pMD20-del-ZEB1-AS1。使用限制性內切酶XhoⅠ和HindⅢ消化pGL4、pMD20-wt-ZEB1-AS1和pMD20-del-ZEB1-AS1，并用T4 DNA連接酶連接載體和目標片段，陽性克隆命名pGL4-wt-ZEB1-AS1和pGL4-del-ZEB1-AS1。1.6 雙熒光素酶報告基因將NCM460細胞以10 000細胞/孔的密度接種96孔板，次日使用Lipof
分子影像學雜志 2018年3期2018-08-01
- 人源DNMT1基因啟動子熒光素酶報告基因載體的構建及其活性檢測
動子熒光素酶報告基因載體為深入研究其調控機制和生物學意義奠定了基礎。1 材料與方法1.1 材料 DMEM 培養基 (HyClone 公司);pGL3-Basic 質粒、質粒小量提取試劑盒 (Promega公司);Polyjet (恩博生物公司);限制性核酸內切酶XhoⅠ和KpnⅠ (NEW ENGLAND BioLabs公司);T4 DNA連接酶 (TaKaRa 公司);細胞基因組DNA提取試劑盒(QIAGEN公司)；E.coli DH5α Compete
皖南醫學院學報 2018年1期2018-03-19
- 一種新型雙熒光素酶報告基因表達載體的構建
01熒光素酶報告基因系統是檢測轉錄因子與目的基因啟動子區DNA相互作用的一種檢測方法，具有靈敏度高、特異性好、檢測時間短等特點，而且對所測定的活體沒有任何毒性[1-2]。pGL4.10為Promega公司構建的熒光素酶報告基因載體，含有螢火蟲熒光素酶報告基因(Firefly)，可用作定量分析哺乳動物基因表達的工具[3]。但由于pGL系列載體中只含有Firefly，因此使用中無法排除本底因素的干擾，容易產生檢測誤差。我們將海腎熒光素酶報告基因(hRLUC)克
鄭州大學學報（醫學版） 2018年1期2018-02-05
- 上海生科院發現植物核孔蛋白在響應ABA信號與鹽脅迫中的作用
9A-LUC報告基因的表達，并部分揭示了其調控逆境響應基因表達的分子機理。RD29A-LUC報告基因在sickle-1（sic-1）突變體的背景下能夠在ABA與高鹽處理后高度表達，通過EMS誘變后的抑制子篩選，該研究發現NUP85的突變導致RD29A-LUC報告基因在sic-1中的表達受到明顯的抑制。與該正向遺傳篩選結果吻合的基因表達研究發現，RD29A、COR15A與COR47等逆境響應基因的表達在nup85突變體以及其他核孔蛋白突變體如nup160與h
蔬菜 2018年1期2018-01-16
- STAT3熒光素酶報告基因檢測系統的構建及其檢測STAT3活化能力的研究
T3熒光素酶報告基因檢測系統的構建及其檢測STAT3活化能力的研究王 博1,2，張 英3，王林玉1,2，江山嬌1,2，蔡永松4，周 艷5，李琰清6，侯衛坤7*(1西安交通大學第一附屬醫院轉化醫學中心，西安 710061；2陜西省腫瘤精準醫學重點實驗室；3西安交通大學第一附屬醫院消化內科；4西安交通大學第一附屬醫院骨科；5西安交通大學第一附屬醫院皮膚科；6西安交通大學第一附屬醫院檢驗科；7西安交通大學醫學部附屬紅會醫院關節病醫院骨壞死與關節重建病區；*通訊作
山西醫科大學學報 2017年11期2017-12-01
- 基于CV-1細胞雌激素受體報告基因試驗方法建立及雙酚A類似物雌激素效應的檢測
胞雌激素受體報告基因試驗方法建立及雙酚A類似物雌激素效應的檢測范德玲, 吉貴祥, 楊先海, 汪 貞, 王 蕾, 劉濟寧①, 石利利(環境保護部南京環境科學研究所， 江蘇 南京 210042)以熒光素酶為報告基因，通過雌激素反應元件調控的帶有熒光素酶報告基因質粒pERE-TATA-Luc和雌激素受體表達質粒rERa/pCI，采用瞬時共轉染方法，將Luc報告基因質粒和受體表達質粒共轉染至非洲猴腎CV-1細胞，以雌二醇作為陽性對照物，其濃度為10-10mol·L
生態與農村環境學報 2017年10期2017-10-24
- 用雙螢光素酶報告基因技術驗證小鼠lncRNA-H19與miR-199a-5p的靶向關系*
用雙螢光素酶報告基因技術驗證小鼠lncRNA-H19與miR-199a-5p的靶向關系*侯婧瑛1， 周長青1， 鄭韶欣2， 郭天柱1， 龍會寶1， 伍權華1， 鐘婷婷1， 吳 浩1， 汪 蕾1， 王 彤1△(中山大學孫逸仙紀念醫院1急診科，2心內科， 廣東 廣州 510120)目的： 構建長鏈非編碼RNA-H19(lncRNA-H19)螢光素酶報告質粒，利用雙螢光素酶報告基因技術驗證小鼠lncRNA-H19與微小RNA-199a-5p(miR-199a-5
中國病理生理雜志 2016年12期2017-01-04
- 人PD-L1基因啟動子克隆及其熒光素酶報告基因載體的構建
及其熒光素酶報告基因載體的構建豐江舟1，楊夢夢2，朱彬彬3，曹文清2，鄭立春4，周興路4，王 潞1，吳志浩5(1.皖南醫學院第一附屬醫院 弋磯山醫院 腫瘤內科，安徽 蕪湖 241001；2.皖南醫學院 麻醉學院，安徽 蕪湖 241002;3.皖南醫學院 法醫學院，安徽 蕪湖 241002；4.皖南醫學院 醫學影像與檢驗學院，安徽 蕪湖 241002；5.皖南醫學院 醫學生物學教研室，安徽 蕪湖 241002)目的：對人源PD-L1基因啟動子進行PCR擴增,
皖南醫學院學報 2016年6期2016-12-19
- C3啟動子克隆及熒光素酶報告基因載體構建
隆及熒光素酶報告基因載體構建Salman Naseer1，Shahid Khan1，M Imran1，何冰2，林佳2（華北理工大學 1. 國際教育中心，2. 生命科學學院，河北 唐山 063000）為克隆C3基因啟動子序列，構建C3基因啟動子熒光素酶報告基因載體，運用PCR的方法從血液中提取到的基因組DNA中獲得目的基因，雙酶切后連接到熒光素酶報告基因載體上，構建C3基因啟動子報告基因載體．構建的pGL3-Basic-C3-promotor重組質粒和內參質
高師理科學刊 2016年11期2016-12-15
- NF-κB熒光素酶報告基因系統的構建及驗證
κB熒光素酶報告基因系統的構建及驗證郭志蘭1,2，車路陽3，李晶哲2，孫震曉1，劉長振21 北京中醫藥大學中藥學院，北京 100102;2 中國中醫科學院醫學實驗中心北京市重點實驗室，北京 100700;3 中國人民解放軍總醫院骨科，北京 100853為了定量檢測NF-κB的活化效果及篩選與NF-κB活化調控相關的藥物，通過去除逆轉錄病毒載體pQCXIP原有的CMV啟動子，并分別插入NF-κB增強子序列及熒光素酶NanoLuc報告基因序列，構建了一種新的含
生物工程學報 2016年10期2016-11-14
- 人MUC5AC啟動子熒光報告基因的構建與分析
C啟動子熒光報告基因的構建與分析王孝蕓，藍楠，張沄，王星，李國平(西南醫科大學附屬醫院炎癥與變態反應實驗室，四川 瀘州 646000)目的 構建人MUC5AC啟動子熒光報告基因并進行分析。方法 PCR技術克隆人MUC5AC啟動子[(-1 300)～(+48)bp]長度片段的基因，將純化的PCR產物與T載體連接，然后將連接產物轉化大腸桿菌DH5α感受態細胞，并利用酶切和測序進行重組質粒鑒定；將該重組質?？寺≈羛GL3-ehancer熒光報告基因載體上，用脂質
海南醫學 2016年15期2016-03-13
- 基于報告基因檢測的PXR、FXR和LXRα激動劑高通量篩選模型的建立
006)基于報告基因檢測的PXR、FXR和LXRα激動劑高通量篩選模型的建立莊嘉瑯，曾行，鐘國平，金晶，茍曉麗，畢惠嫦，黃民(中山大學藥學院藥物代謝與藥動學實驗室，廣東 廣州510006)黃民(1963-)，男，博士，教授，博士生導師，研究方向: 臨床藥理學與藥物基因組學，E-mail: huangmin@mail.sysu.edu.cn摘要：目的 建立基于報告基因法的高通量篩選細胞模型，用來發現PXR、FXR和LXRα受體激動劑。方法利用Real-tim
中國藥理學通報 2015年2期2016-01-12
- TNF-α 3′-UTR雙熒光素酶報告基因系統的構建及丹參酮類藥物篩選
R雙熒光素酶報告基因系統的構建及丹參酮類藥物篩選韋忠紅1,2，朱智杰1,2,劉玉萍1,2，劉兆國1,2，盛曉波1,2，汪思亮1,2，陶麗1,2，祝娉婷1,2，陳文星1,2,王愛云1,2，陸茵1,2(1.南京中醫藥大學藥學院,2.江蘇省藥效與安全性評價重點實驗室,江蘇 南京210046)中國圖書分類號：R284.1；R329.2；R345；R394.2；R394.3；R965.1；R977.3摘要:目的構建并鑒定pGL3-TNF-α 3′端非翻譯區(UTR)
中國藥理學通報 2015年1期2016-01-11
- 視黃酸刺激RARE調控熒光素酶報告基因表達系統的構建與應用
調控熒光素酶報告基因表達系統的構建與應用袁源 陳亞瓊（中國科學院上海生命科學研究院營養科學研究所，上海 200031）類維生素A，通過視黃酸（retinoic acid，RA）代謝旺盛組織的靶基因調控，與生物節律通路相互作用，在代謝性疾病發展過程中發揮著重要作用。在293T及小鼠肝原代細胞中，構建視黃酸反應元件（RARE）調控的熒光素酶報告基因表達系統，為研究類維生素A與節律和代謝研究中靶基因上游調控信號分子提供可能。用定點突變PCR方法在pGL3-Bas
生物技術通報 2015年6期2015-10-27
- 啟動子陷阱技術在植物啟動子克隆研究中的應用
阱技術是一種報告基因的隨機整合技術，現已成為基因功能研究中的重要手段。從啟動子陷阱技術的原理、啟動子陷阱報告基因的種類、啟動子陷阱在植物中的應用及在應用過程中存在的問題等方面進行綜述，并針對有關問題進行討論和展望。關鍵詞 啟動子陷阱 ；T-DNA ；報告基因 ；功能研究分類號 Q75Application of Promoter-trap in Promoter Cloning Research of PlantsLI Ji HUANG Tiandai H
熱帶農業科學 2015年9期2015-10-14
- MicroRNA-195與Smad7靶向關系的研究
區的熒光素酶報告基因載體，利用雙熒光素酶報告基因驗證MicroRNA195與其潛在靶基因Smad7的靶向關系。方法：PCR擴增出Smad7基因3′-UTR區片段，以此構建含3′-UTR的熒光素酶報告基因載體（wild type，WT）；將miRNA-195與熒光素酶報告重組子共轉染至293T細胞中，雙熒光素酶報告基因系統檢測熒光素酶活性；構建含Smad7基因3′-UTR突變體（mutant，Mut）的熒光素酶報告基因質粒，檢測熒光素酶活性變化。結果：測序結
江蘇大學學報（醫學版） 2015年4期2015-07-22
- Smad3調控成釉細胞Amelotin啟動子轉錄活性的研究
動子熒光素酶報告基因載體，用雙熒光素酶報告基因檢測系統分析Smad3對Amelotin啟動子轉錄活性的影響;同時在發現新的啟動子功能性序列的基礎上，進一步研究分析，確定Smad3與Amelotin的關系及其調控機制，以期為今后進一步研究牙體硬組織發育過程中相關基因的調控機制奠定基礎。1 材料和方法1.1 主要試劑和儀器Smad3抗體(Santa Cruz Biotechnology，美國);基因組DNA提取試劑盒(北京天根生化科技有限公司);PCR引物合成
牙體牙髓牙周病學雜志 2015年6期2015-05-18
- 細胞色素氧化酶3A4啟動子報告基因的構建及其活性檢測
3A4啟動子報告基因的構建及其活性檢測張 帆1，司 文1，高旭東2，馮 帆3，王春平2，楊予濤4，楊永平2，楊俊蘭11解放軍總醫院 腫瘤內科，北京 100853；2解放軍第三零二醫院 肝臟腫瘤診療與研究中心，北京 100039；3沈陽軍區總醫院 藥劑科，遼寧沈陽 110016；4首都醫科大學 神經科學研究所，北京 100071目的建立細胞色素氧化酶(cytochrome P-450，CYP)3A4啟動子報告基因并在孕烷X受體(pregnane X rece
解放軍醫學院學報 2015年2期2015-03-21
- 孕烷X受體應答元件螢光素酶報告基因的構建及活性檢測
元件螢光素酶報告基因的構建及活性檢測馮 帆1，張 帆2，司 文2,3，高旭東4，王春平4，楊予濤5，楊俊蘭2，楊永平4，史國兵11沈陽軍區總醫院 藥劑科，遼寧沈陽 110016；2解放軍總醫院 腫瘤內科，北京 100853；3南開大學醫學院，天津 300192；4解放軍第302醫院 肝臟腫瘤診療與研究中心，北京 100039；5首都醫科大學神經科學研究所，北京 100071目的建立孕烷X受體(pregnane X receptor，PXR)應答元件螢光素酶
解放軍醫學院學報 2015年2期2015-03-21
- B7-H1啟動子熒光素酶報告基因載體的構建及活性檢測
動子熒光素酶報告基因載體的構建及活性檢測吳勝昔1，陳永文2，朱廣倍1，費 蕾2，吳玉章2*(1.重慶理工大學 藥學與生物工程學院， 重慶 400054； 2.第三軍醫大學 基礎部 免疫學教研室，重慶 400017)目的構建含B7-H1啟動子的熒光素酶報告基因載體，轉染肝癌HepG2細胞進行活性檢測。方法PCR擴增B7-H1啟動子上游區域基因片段，并插入到含有熒光素酶報告基因的載體PGL3-Basic中構建重組子，經雙酶切和測序鑒定后，將重組子轉染HepG2
基礎醫學與臨床 2014年7期2014-11-27
- 活體示蹤干細胞治療心肌梗死的分子影像技術進展
性核素成像、報告基因成像、光學成像以及高效有機整合幾種成像技術為一體的多模態成像。1.MRIMRI是通過使用順磁性對比劑來評價心臟結構和功能的最好技術[3]。MRI具有良好的空間 [10～100 μm(小動物磁共振)，500～1 500 μm(臨床)]和時間分辨率，可示蹤標記超順磁和順磁性對比劑的干細胞[3]。磁共振光譜成像(如19F MRI)亦可示蹤移植心肌的干細胞[4]。1.1超順磁性氧化鐵納米顆粒Arbab等[6]報道SPIO不影響細胞的活力、增殖、
新醫學 2014年5期2014-08-22
- 受體報告基因實驗及其在維甲酸和維甲酸X受體干擾物監測中的應用
1021受體報告基因實驗及其在維甲酸和維甲酸X受體干擾物監測中的應用鐘恩惠，王藝磊，王淑紅*集美大學水產學院，廈門 361021受體報告基因實驗具有快速、經濟、靈敏、方便等諸多優勢，在高通量篩選類或抗雌雄激素等通過核受體起作用的環境內分泌干擾物方面得到了廣泛的應用。環境中的維甲酸和維甲酸X受體干擾物如有機錫等有著類似的作用機制，研究者也開始采用受體報告基因實驗的方法對該類污染物進行篩選與監測。本文綜述了受體報告基因實驗的技術方法，包括報告基因和宿主細胞的選
生態毒理學報 2014年2期2014-04-08
- 雌激素樣化合物對人細胞色素氧化酶2A6基因的轉錄調控
CYP2A6報告基因高容量篩選系統，分析環境和天然雌激素樣化合物對CYP2A6基因轉錄的影響。方法構建3種CYP2A6基因轉錄上游－2460～＋1全長、增強子-啟動子串聯和3倍增強子-啟動子串聯的熒光素酶報告基因重組體pGL3-2A6 3UP，GL3-2A6 EP和pGL3-2A6 3EP，分別與雌激素受體α（ERα）及海腎熒光蛋白表達載體三重共轉染人肝HepG2細胞。用雙熒光素酶報告基因分析技術，選擇確認對雌二醇誘導應答最強的CYP2A6報告基因系統；分
中國藥理學與毒理學雜志 2014年1期2014-03-23
- MRI報告基因成像在心臟細胞示蹤中的應用進展
006MRI報告基因成像在心臟細胞示蹤中的應用進展周鑫斌武麗浙江中醫藥大學第一臨床醫學院，浙江 杭州 310006近年來基于細胞替代的心臟修復和再生治療有了長足發展，但目前缺乏連續的非侵入性有效成像手段來評估移植干細胞的存活及預后。核磁共振(MRI)報告基因成像技術的出現使得在體評估心肌梗死后所移植細胞的存活、增殖、遷移及分化情況成為可能?，F就MRI報告基因細胞示蹤成像的機制、心臟中應用現狀及前景做一綜述。核磁共振；報告基因；心臟再生；細胞示蹤；文獻綜述近
中國民族民間醫藥 2014年11期2014-01-25
- 雞肝臟膽汁酸結合蛋白基因啟動子活性分析
BABP基因報告基因系列缺失載體。報告基因結果表明，雞L-BABP基因啟動子-1 096/-66區域具有最強的啟動子活性，-545/-62區域啟動子活性最弱；C/ EBPα可以顯著抑制雞L-BABP基因的表達，可為深入研究雞L-BABP的表達調控機制奠定基礎。雞；肝臟膽汁酸結合蛋白；啟動子；活性分析脂肪酸結合蛋白家族（Fatty acid binding pro?teins,FABPs）對細胞內脂肪酸的運輸起重要作用[1-3]，通過與脂肪酸結合增加脂肪酸可
東北農業大學學報 2014年4期2014-01-14
- Chelex法結合環介導間接聚合酶鏈式反應檢測肉制品單增李斯特菌
將探針標記于報告基因(大豆Lectin基因)的兩端，此標記的報告基因與待測靶基因經雜交、缺口補平、環化后，采用反向聚合酶鏈式反應擴增報告基因，實現對靶基因的檢測。結果：該檢測體系檢出限低于100CFU/g(mL)，且與其他食源性致病菌的檢測無明顯交叉反應，對200份肉制品進行檢測，陽性率為2.5%，與傳統細菌分離檢測結果完全相符。結論：環介導間接聚合酶鏈式反應可以快速、靈敏、特異檢測肉制品中單增李斯特菌污染。環介導間接聚合酶鏈式反應；肉制品；單增李斯特菌單
食品科學 2012年10期2012-10-25
- hTERT啟動子引導hNIS基因重組腺病毒介導放射性核素的裸鼠顯像
00052）報告基因指其表達產物非常容易被檢測的基因。報告基因顯像則是通過將報告基因轉染給靶細胞后，通過檢測報告基因從而顯影的一種方法?，F有的報告基因如熒光素酶、轉鐵蛋白、鈉碘轉運體（NIS）等，可以通過光學成像，核素顯像，MRI等方法進行檢測[1-2]。其中，NIS基因因為可將細胞外的碘轉運進入細胞內，所以可以方便地進行放射性核素顯像。在既往研究中已證明使用脂質體可在體外將NIS基因轉入大細胞肺癌細胞內，用篩選后的腫瘤細胞構建荷瘤裸鼠模型，進行放射性核素
天津醫科大學學報 2012年4期2012-10-20
- 紅色熒光蛋白和熒光素酶雙報告基因轉基因小鼠的建立
和熒光素酶雙報告基因轉基因小鼠的建立張余琴 林曉琳 賈俊雙 謝饒英 樊全榮 趙尊蘭楊升 高飛 姚開泰 肖東△南方醫科大學腫瘤研究所，△比較醫學研究所暨實驗動物中心，廣東 廣州 510515背景與目的：活體動物體內光學成像(opticalin vivoimaging)主要采用生物發光與熒光兩種技術。生物發光是用熒光素酶(luciferase，Luc)基因標記細胞或DNA，而熒光技術則采用熒光報告基團(GFP、RFP、Cyt及dyes等)進行標記，利用一套非常
中國癌癥雜志 2012年5期2012-05-28
- 利用合適的啟動子提高外源基因在Jurkat細胞中的表達
用熒光素酶雙報告基因系統檢測 SV40、CMV 啟動子與 EF1α、UbC啟動子在 Jurkat 細胞中的相對活性，通過高活性啟動子來實現外源基因在 Jurkat 細胞中的高效表達，以利于 Jurkat 細胞系在哺乳動物 T 淋巴細胞以及免疫相關功能研究中的應用。1 材料與方法1.1 材料1.1.1細胞及質粒 人 T 淋巴細胞白血病細胞株 Jurkat（Clone E6-1）來自中國科學院典型培養物保藏委員會細胞庫/中國科學院上海生命科學研究院細胞資源中心
中國醫藥生物技術 2012年4期2012-04-13
- 人心肌肌球蛋白輕鏈基因啟動子驅動的GFP和Luc報告基因在人心肌細胞系中的表達*
細胞的特異性報告基因，本研究擬構建的心肌肌球蛋白輕鏈2v啟動子驅動的綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)和螢光素酶(luciferase，Luc)報告基因慢病毒載體［3-6］，轉染人心肌細胞系(human cardiomyocyte cell line，HCM)和人肺癌細胞系A549，觀察2種細胞中報告基因的整合表達特征，以及pMLC2v-GFP和pMLC2v-Luc是否具有心肌細胞特異性，為利用多個報告基因同步示蹤實
中國病理生理雜志 2012年9期2012-01-30
- 山酮類化合物抑制人腦膠質瘤細胞增殖活性及作用機制探討
;質粒p53報告基因(pG53-Luc)、Bax報告基因(pGBax-Luc)和內參照基因(SV-40-Rluc)由日本千葉大學醫學部第一生物化學研究室提供。Fig 1 Chemical structures of 1'-hydroxy Austocystin D，Austocystin D and Austocystin H1.2細胞系人原發性腦腫瘤細胞(T-98和U251SP)和繼發性腦腫瘤細胞(KT)由日本千葉大學醫學部第二生物化學研究室提供。各細胞
中國藥理學通報 2011年9期2011-05-29
- 大豆苷元對HEC-1B細胞增殖及雌激素受體報告基因表達的影響
及雌激素受體報告基因表達的影響劉小麗1，薛曉鷗1*，唐炳華2，牛建昭2（1.北京中醫藥大學東直門醫院，北京 100700；2.北京中醫藥大學基礎醫學院科研中心，北京 100029）目的 探討大豆苷元對子宮內膜癌細胞增殖的影響及其對雌激素受體報告基因表達的影響。方法 體外培養子宮內膜癌細胞子宮內膜癌雌、孕激素受體陰性細胞系（HEC-1B），采用四甲基偶氮唑鹽法（MTT）檢測不同濃度大豆苷元對子宮內膜癌細胞增殖的影響，同時檢測大豆苷元對雌激素應答原件（ERE）
湖南中醫藥大學學報 2011年1期2011-01-29
- 人白介素-15基因系列啟動子克隆及其熒光素酶報告基因載體的構建
及其熒光素酶報告基因載體的構建陶千山,羅 欣,柴 瑜,胡道軍,張勝權(安徽醫科大學 生物化學與分子生物學教研室,安徽 合肥 230032)目的 克隆人白介素-15(IL-15)基因系列啟動子,構建 IL-15基因啟動子熒光素酶報告基因載體。方法通過 PCR方法從 HaCaT細胞基因組DNA中獲得 IL-15基因編碼序列 5′上游七段逐步缺失的 IL-15啟動子序列;雙酶切后,分別重組到含螢火蟲熒光素酶的報告基因 p GL3-Basic載體上,構建 IL-1
中國生化藥物雜志 2011年3期2011-01-06
- 基因捕獲技術及其在水稻突變體庫構建上的應用
詞基因捕獲；報告基因；水稻突變體庫中圖分類號 Q343.1+3 文獻標識碼A文章編號 1007-5739（2009）02-0125-02水稻是世界上最重要的三大經濟作物之一，同時也是生命科學研究的模式植物，水稻基因組的全序列得到破譯之后，分離和研究水稻中的基因功能成為一項迫切而重要的任務?；虿东@是一種將帶有報告基因的重組載體隨機整合到基因組中，使插入基因被激活或失活，然后通過檢測報告基因的表達和利用一些基于PCR的分子生物學技術來分離被插入基因的研究基因
現代農業科技 2009年2期2009-03-16