冠心病患者焦慮情緒與載脂蛋白E 基因多態性研究

呂俊

吸煙、高血壓、高脂血癥、糖尿病作為冠心病(CHD)主要危險因子已為我們所熟悉［1］，隨著人類對CHD 更深一步的研究發現，載脂蛋白E (ApoE) 基因多態性和CHD 患者的焦慮情緒也存著很大的關聯。ApoE 作為脂蛋白中一種非常重要的成分，研究證明ApoE 基因是目前較為明確的CHD 候選基因，被認為是CHD 的遺傳標記［2－3］。本研究將對于焦慮情緒與ApoE 基因多態性之間的聯系做進一步的探討和分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 研究組 選擇2011 年6 月—2012 年2 月入住本院心血管內科病房的CHD 患者90 例，入選標準： (1) 通過心電圖檢查或是符合其他的一些診斷標準被明確診斷為CHD。(2)病情進入到一個比較穩定的階段。(3) 所有研究對象不伴有其他方面的基礎疾病，并且都來自同一個種族(漢族) ，組員之間無血緣關系。(4) 已經被告知此研究情況并自愿參與。(5) 無其他精神問題。采用漢密爾頓焦慮測量表(HAMA－14) 和焦慮自評測量表(SAS) ，將患者分為伴有焦慮情緒的CHD 組(焦慮組) 和不伴有焦慮情緒的CHD 組 (非焦慮組) ，各45 例。其中焦慮組，女20 例，年齡37 ～73 歲，平均(55.2 ±11.5) 歲； 男25 例，年齡36 ～72 歲，平均(57.4 ±12.1) 歲。非焦慮組，女22 例，年齡37 ～71 歲，平均(54.9±10.5) 歲； 男23 例，年齡39 ～73 歲，平均(56.7 ±10.8)歲。

1.1.2 對照組 入選標準： (1) 無情緒和精神等障礙； (2)臨床和實驗室輔助檢查無能夠診斷為CHD 的證據； (3) 對本研究的一些具體事情已經完全知曉； (4) 種族、文化程度、所在的居住地和所選取的研究對象相接近。選取同期本院符合要求的45 例為對照組，其中男24 例，女21 例； 年齡37 ～73歲，平均(55.8 ±10.1) 歲。

1.2 方法

1.2.1 情緒評定 研究對象在相同的指導語條件下，在無外界干擾的實驗室內或是醫院病房內做完HAMA、SAS 的測定。

1.2.2 采集所需的血液標本 對研究對象禁食12h 后于第2天早上采集肘靜脈血5.0ml，對所采集的血進行抗凝，用離心機對血樣在2h 內進行離心，再取離心所得的血漿成分進行血脂的測定。將血細胞儲藏在－70℃的冷凍箱中保存，用來獲取DNA。再將其整合起來分析ApoE 基因的多態性。

1.2.3 測定血脂 用氧化酶法對所有研究對象的三酰甘油(TG) 和總膽固醇(TC) 進行測定； 用均相法來測定高密度脂蛋白膽固醇(HDL－C) 和低密度脂蛋白膽固醇(LDL－C) ； 載脂蛋白A1 (ApoA1) 和載脂蛋白B (ApoB) 采用免疫法測定。

1.2.4 提取模版DNA 取受試對象的血細胞，將其中的白細胞分離出來，采用Znbenko GS 等方法提取人類基因組DNA。

1.2.5 ApoE 基因具備的聚合酶鏈反應－限制性片段長度多態性(PCR－RFLP) 分析 (1) PCR 擴增： 反應的體積是45μl，當中10 ×Buffer 4.5μl； 4 ×dNTPs3.5μl； MgCl23.5μl；引物1 和引物2 各為2.0μl； DMSO 4.5μl； 模板DNA 5.5μl。放置到熱循環儀器里95℃預變性6min 后，再放入Tap DNA 聚合酶2 個單位，之后根據下面的程序進行5 次循環，即96℃變性10s、64℃退火40s、72℃延伸1.3min，再按以下程序循環25 次，既95℃變性9s，63℃退火35s、69℃延伸1.3min。最后于71℃再延伸9min。(2) 酶切： PCR 擴增所得的產物8.5μl，加入9.5μl Hhal 限制性內切酶與1.5μl Buffer，放在37℃恒溫酶切消化過夜，聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳后進行銀染［3］。

1.3 統計學方法 采用SPSS15.0 軟件進行統計學分析，計量資料采用t 檢驗，計數資料采用χ2檢驗，以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 焦慮組和對照組ApoE 基因型比較，差異有統計學意義(P ＜0.05，見表1) 。

2.2 對照組攜帶e4 等位基因的頻率明顯低于非焦慮組(χ2=4.44，P ＜0.05) ； 各組攜帶e2、e3 等位基因的頻率比較，差異無統計學意義(P ＞0.05，見表2) 。

2.3 攜帶e4 等位基因的CHD 患者和不攜帶e4 等位基因的CHD 患者的HAMA、SAS 評分及LDL、TC 水平比較，差異均有統計學意義(P ＜0.05，見表3) 。

表1 3 組ApoE 基因型的比較〔n (%) 〕Table 1 Comparison of ApoE genotype in the three groups

表2 3 組攜帶ApoE 等位基因情況比較〔n (%) 〕Table Comparison of carrying the ApoE allele status in the three groups

表3 CHD 患者是否攜帶84 等位基因的量表評分和血脂水平比較(±s)Table 3 Comparison of whether CHD patients carrying 84 alleles of the scale score and serum lipid levels

表3 CHD 患者是否攜帶84 等位基因的量表評分和血脂水平比較(±s)Table 3 Comparison of whether CHD patients carrying 84 alleles of the scale score and serum lipid levels

組別 例數 HAMA(分) SAS(分) ApoB(g/L) ApoA1(g/L) LDL(mmol/L) TG(mmol/L) TC(mmol/L)±0.9 1.4 ±0.8 5.3 ±0.8未攜帶e4 組 69 8.9 ±6.3 36.9 ±8.1 0.91 ±0.15 1.29 ±0.25 2.9 ±1.0 1.4 ±0.5 4.5 ±1.2 t攜帶e4 組 21 13.1 ±5.1 41.2 ±7.5 0.95 ±0.30 1.37 ±0.32 3.4 3.11 3.12 0.72 0.24 2.08 0.23 2.15 P 值值0.003 0.003 0.421 0.635 0.029 0.811 0.025

3 討論

CHD 是常見的多發病，是心血管系統疾病常見的死亡原因之一［4］，CHD 不僅是一種生理疾病，同時也屬于心理疾病。已經有很多研究報道及調查顯示，一些社會上存在的對人類心理有影響的因素對CHD 病程的發生和發展都起著不可忽視的作用，而且也是引起CHD 惡性冠狀動脈事件、導致猝死的重要危險因素［5］。相當一部分的CHD 患者在不同程度上伴有一定程度的焦慮情緒，其所占的比例比無CHD 的健康人高出很多，同時也比患有其他病的人群高出許多。CHD 患者普遍存在焦慮情緒，是比較常見的一種情緒問題。目前，關于ApoE基因和抑郁之間聯系的報道已有許多，但是研究ApoE 基因和焦慮情緒的報道卻是罕見。國外只有個別幾個醫學方面的專家在實驗動物身上對其進行了一些研究，利用1 個簡單化的迷宮對缺失C57BL/6 實驗鼠與野外生存的C57BL/6 小鼠就與焦慮有關的一些行為進行了觀察和分析，研究結果顯示，前者實驗鼠的焦慮水平遠低于后者小鼠，說明焦慮的產生和ApoE 基因之間有比較緊密的聯系［6］。

本研究發現CHD 患者抑郁與ApoE 基因e3/4 型和e4 等位基因多態性有一定關聯［7－8］，非焦慮組患者的e4/4 基因型和其等位基因的頻率顯然低于焦慮組患者； 非焦慮組和對照組各等位基出現的頻率和其基因型，無顯著差異，說明CHD 患者產生焦慮情緒的原因中，e4/4 基因型和e4 等位基因有可能占有重要的位置，更進一步說明了CHD 患者焦慮情緒的產生與ApoE 基因的多態性之間存有很大的相關性。因此，對于CHD伴有焦慮情緒患者的相關臨床表現及病因還需進行更深的探討。

1 汗春紅，周新，周光娣，等. 冠心病易感基因載脂蛋白E、低密度脂蛋白受體多態性與煙、酒的交互作用的研究［J］. 中華醫學雜志，2004，84 (7) ： 554－558.

2 鄒陽春，洪秀芳，胡大一，等. 國人載脂蛋白E 基因多態性與冠心病發病之間的相關性［J］ . 中國動脈硬化雜志，2005，13(3) ： 355－357.

3 季衛東，成俊祥，趙國安，等. ApoE 基因多態性與冠心病患者抑郁情緒的關系［J］. 中國心理衛生雜志，2005，19 (1) ： 1－4.

4 黃躍斌，何印蕾. ApoE 基因多態性、hs－CRP 與冠心病的相關性研究［J］. 中國老年學雜志，2009，11 (29) ： 2864－2866.

5 戚厚興，馮學泉，張作記，等. 冠心病患者焦慮情緒與ApoE 基因多態性［J］. 中國心理衛生雜志，2010，24 (5) ： 329－333.

6 王敏，李先平，趙立玲，等. 載脂蛋白E 基因缺陷小鼠血液生化指標的變化［J］. 中國全科醫學，2010，13 (8) ： 2700.

7 戚厚興，張作記，馮學泉，等. 冠心病患者焦慮情緒與血清氧化低密度脂蛋白含量的關系［J］ . 中國行為醫學科學，2006，15(4) ： 313－315.

8 張蘭英，趙紅俠. 冠心病合并抑郁癥的治療研究［J］. 實用心腦肺血管病雜志，2011，19 (5) ： 732.