紅花微乳皮膚刺激性實驗研究

季新燕，馮 麗，常瑞華，馮文全，馮前進

（1.山西中醫學院，山西太原030024； 2.長治市食品藥品監督管理局，山西長治046000）

紅花亦稱紅藍花，為菊科植物紅花的干燥管狀花，是常用活血化瘀中草藥之一。有臨床報道，單用紅花或與其他藥物配伍外用可治療骨折腫脹、皮膚病、靜脈炎等病癥［1-3］。微乳作為一種新的藥物制劑載體，可應用于局部和透皮給藥方面。前期的動物實驗研究中發現，實驗室自行研制的紅花微乳外用制劑在抗炎、鎮痛和活血化瘀方面均有較好的作用［4］，為了觀察該制劑及其所用輔料是否對皮膚有刺激，本實驗同時觀察了紅花微乳和空白微乳制劑對正常皮膚和破損皮膚的刺激性，旨在評價其用藥的安全性。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 白色家兔20只，體重2.0 kg~2.5 kg，雌雄各半，由山西省食品藥品檢驗所提供，動物合格證編號：scxk（京）2011-0010。所有動物置于室溫（25±1）℃、相對濕度60%的環境下單獨分籠飼養。

1.1.2 實驗藥物 紅花微乳及空白微乳制劑（實驗室自制），生理鹽水（華北制藥）。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組及皮膚預處理 取白色家兔20只，適應性喂養2 d后分組。正常皮膚組8只，破損皮膚組8只（以上每組再分為兩組，即各取4只分別用于單次給藥和多次給藥實驗），生理鹽水對照組4只。給藥前24 h所有受試動物脫毛，用電動剃毛刀對家兔背部脊柱兩側脫毛，脫毛范圍左、右各5 cm×10 cm（脫毛面積為體表面積的10%），然后將脫毛膏均勻涂抹在家兔的脫毛皮膚處，此時僅有少量短毛存在，待涂抹完畢后，等待10 min后用溫水擦拭掉殘留的脫毛膏和脫下的毛發。脫毛完畢后，將家兔放回籠中，飼養24 h（脫毛處應無紅斑、水腫及破損等現象，若有則舍棄不進行此實驗研究）。破損皮膚組在給藥前24 h用手術刀片于家兔背部脫毛區域劃“井”字，以微微滲血為度。

1.2.2 一次給藥皮膚刺激性實驗 取脫毛白兔8只，隨機分成2組（正常皮膚組和破損皮膚組）。將脊柱背側去毛皮膚均勻分成4個區，左上為Ⅰ區、右上為Ⅱ區、左下為Ⅲ區、右下為Ⅳ區。按照分組分別在Ⅰ區取3 cm×3 cm區域均勻涂抹紅花微乳0.3 mL，在Ⅱ區取3 cm×3 cm區域均勻涂抹空白微乳0.3 mL，Ⅲ區、Ⅳ區不給任何藥物，進行自身對照，生理鹽水對照組則涂生理鹽水。用保鮮膜封包，醫用膠帶固定，6 h后除封包，用溫水棉球拭去殘留的藥物，在去除藥物后1 h、24 h、48 h、72 h觀察并記錄家兔背部皮膚的外觀，并做評分。實驗結束后處死家兔，取受試部位皮膚進行病理檢測。

1.2.3 多次給藥皮膚刺激性實驗 分組、劃分區域同1.2.2，給藥時采用每天給藥1次，連續給藥7 d，于末次給藥后1 h、24 h、48 h、72 h觀察并記錄家兔背部皮膚區域的外觀，參照《中藥藥理實驗方法學》［5］進行皮膚刺激性反應評分。實驗結束后同樣進行病理檢測。實驗結束后，取下受試部位皮膚，剔除皮膚內側肌肉和附屬物，浸泡在10%甲醛溶液中固定48 h，用乙醇梯度脫水，二甲苯透明，浸蠟包埋，切片，黏片后以常規方法進行HE染色。顯微鏡下觀察用藥后皮膚組織的形態變化。

2 結果

2.1 一次給藥皮膚刺激性實驗

一次給藥實驗組在去除受試藥物后正常皮膚組1 h、24 h、48 h、72 h后均未見家兔的背部皮膚受試區出現紅斑、水腫、焦痂等病理現象；紅花微乳破損皮膚組家兔有一只在給藥后30 h有結痂，78 h時觀察大部分已完全脫痂，無其他肉眼可見病理改變。結果如表1。

表1 單次給藥對家兔皮膚刺激性實驗結果

2.2 多次給藥皮膚刺激性試驗

在家兔正常皮膚上連續給受試藥物7 d，期間均未發現背部皮膚受試區出現紅斑、水腫等現象；在去除受試藥物后分別觀察 1 h、24 h、48 h、72 h變化，也均未見上述現象。但給藥的第3天，發現正常皮膚組個別家兔有少量皮屑，觸之略糙，無其他明顯病理改變。此情況在去除受試藥物后24 h消失。多次給藥的家兔破損皮膚組在給藥期間及去除藥物1 h、24 h、48 h、72 h后，觀察雙側多有結痂到脫痂這一皮膚痊愈過程，有輕度的皮膚刺激性。其中紅花微乳組和空白微乳組均有少量鱗屑存在。至停藥后72 h，各組鱗屑完全脫落。結果如表2。

2.3 HE染色鏡下觀察結果

表2 多次給藥對家兔皮膚刺激性實驗結果

病理檢查顯示，經紅花微乳和空白微乳處理過的家兔皮膚組織結構都很清晰，被覆鱗狀上皮的結構正常，部分角化層有輕微增厚，有少量炎性滲出、炎細胞浸潤，說明微乳對皮膚具有輕微刺激性。這可能是由于微乳中含有大量表面活性劑，與角質層作用產生了一定傷害。但刺激性輕微，在停止用藥后可恢復，符合外用制劑對皮膚刺激性的要求。結果見圖1。

生理鹽水對照組

圖1 皮膚刺激性實驗病理切片圖

3 討 論

從對皮膚刺激性實驗評分結果看，無論是單次給藥還是多次給藥，均存在破損皮膚組的皮膚出現輕微受損結痂現象，分析其原因可能與微乳中表面活性劑有關，它能通過表皮組織，與角質層蛋白產生一定作用引起對皮膚刺激，而完好皮膚組幾乎沒有皮膚損傷現象，這提示我們外用紅花微乳制劑時應盡量避免破損皮膚使用，除對皮膚的刺激性外，還要考慮紅花本身具有活血化瘀作用，破損皮膚如出現出血使用紅花后可能會促進出血滲出。在多次給藥皮膚刺激性研究中還發現有皮膚脫屑現象，這一現象產生可能與制劑中含有少量無水乙醇有關，停藥后這些現象都可很快恢復，不影響藥物的使用。同時本實驗還在此基礎上進行了病理學檢測，病理切片染色結果的分析可見，微乳作為藥物載體有輕微的皮膚刺激性，符合外用藥物的刺激性要求，但應盡量避免在破損皮膚上使用。

［1］范吾鳳，鄭大梅，王式魯.紅花酊外敷治療踝部骨折腫脹療效觀察［J］.山東中醫雜志，2002，21（9）：537-538.

［2］馬旭輝，苗振靜，王楠楠，等.紅花連柏酊外用治療化學性靜脈炎 105 例［J］.中醫研究，2010，23（5）：40-41.

［3］陳大志，董松林，唐華，等.舒筋紅花酊外用配合功能鍛煉治療外傷性肘關節僵硬32例［J］.云南中醫中藥雜志，2009，30（4）：26.

［4］季新燕，常瑞華，梁紅娟，等.紅花外用微乳制劑的藥效學初步研究［J］.山西中醫學院學報，2013，14（3）：2-3.

［5］李儀奎.中藥藥理實驗方法學［M］.2版.上海：上?？茖W技術出版社，2006：1020.