黃芪、大黃配伍對慢性腎功能衰竭大鼠血生化及抗氧化能力的影響

尹翠翠，楊 勇，容 蓉

（山東中醫藥大學，山東濟南250355）

慢性腎功能衰竭（chronic renal failure，CRF）是多種原發或繼發性腎臟疾病發展至晚期的共同歸宿，主要表現為腎功能的減退、代謝產物潴留、水電解質及酸堿平衡失調，嚴重威脅人類健康［1］。中醫治療本病總的原則是扶正祛邪，依據不同的發病階段及發病類型分別采用補益腎元法、健脾補腎法、調理脾胃法及泄濁解毒法等治療方法［2］。黃芪味甘性溫，具有補氣升陽、提高機體免疫力的作用；大黃性寒味苦，具有苦寒降泄、祛濕熱排濁毒的作用。兩者藥性相反，但均在慢性腎功能衰竭的臨床治療中療效顯著，已得到廣泛應用。本課題擬以血肌酐（Cr）、尿素氮（UREA）、膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、鈣（Ca）、磷（P）等生化指標及超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化脂質（LPO）等指標為檢測依據，探討大黃、黃芪配伍后治療慢性腎功能衰竭的藥理學機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 Wistar雄性大鼠，體重170 g～200 g，由山東大學醫學院實驗動物中心提供，合格證號：魯動質字20001003；飲用水均為自來水，自由攝食及進水。

1.1.2 實驗儀器 全自動生化分析儀Beckman 700，723可見光分光光度儀，上海第三分析儀器廠；FJ-2021 γ放射免疫計數器，西安國營二六二廠；GL20A全自動高速冷凍離心機，湖南儀器儀表總廠離心機廠；LXJ-II離心沉淀機，上海醫用分析儀器廠；電熱恒溫水浴箱，上海醫療器械七廠。

1.1.3 試劑與藥材 腺嘌呤，批號：000807，購自上海麗珠東風生物技術有限公司。尿素氮，批號：010101；肌酐，批號：010301；鈣，批號：000901，磷：批號：010101，均為北京中生生物工程高技術公司生化試劑盒。黃芪、大黃購自建聯中藥店，經本校中藥鑒定教研室鑒定符合《中華人民共和國藥典》2010年版標準［3］。

1.2 實驗方法

1.2.1 各實驗組溶液的制備 黃芪大黃組：按照藥物比例黃芪∶大黃（3∶1）稱取一定量藥物，加適量水浸泡30 min，水煎煮2次，合并濾液，水浴濃縮成每毫升制劑相當于生藥1 g，置4℃冰箱備用。黃芪組：稱取一定量的黃芪，制備方法同上。大黃組：稱取一定量的大黃，制備方法同上。

1.2.2 分組及模型制備 大鼠固體飼料喂養2 d～3 d，所示正常生長后隨機分為5組：分別為正常組、模型組、黃芪大黃組、大黃組、黃芪組。除正常組外，其他各組參考鄭平東［4］報道的方法，將3%的腺嘌呤10 mL/（kg·d）給大鼠灌胃，連續30 d。隨著灌胃日數的增加大鼠日益消瘦，模型組大鼠出現生長抑制現象，并出現多飲、多尿、體毛干枯不齊、精神萎靡、畏寒拱背現象即為造模成功的標志。造模灌胃腺嘌呤后，間隔6 h，中藥干預組每天分別用不同的中藥水煎液灌胃4 g/kg體重，正常組和模型組灌胃等量的自來水。連續用藥5 w。

1.2.3 指標檢測 實驗5 w后各組大鼠肝素抗凝取血，置冷凍離心機中，3000 r/min離心10 min，取上清，-20℃保存待用。采用Beckman 700全自動生化分析儀測定 UREA、Cr、鈣（Ca）、磷（P）；采用光化學擴增法測定血漿中SOD的含量；采用TBA反應比色法測定血漿中MDA的含量［5］。

1.3 統計學方法

實驗數據采用SPSS軟件進行統計處理，計量資料均以均數±標準差（±s）表示，F檢驗（方差分析）進行組間差異分析，以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 對 CRF 大鼠血漿中 UREA、Cr、CHOL、P、TG、Ca的影響

結果見表1、表2。

表1 對CRF大鼠 UREA、Cr的影響 （±s）

表1 對CRF大鼠 UREA、Cr的影響 （±s）

注：與正常組比較，1）P<0.01；與黃芪組比較，2）P<0.05

組別nUREA（mmol/L）Cr（μmol/L）正常組 105.69±1.6081.42±7.11模型組 822.14±8.591）2）183.52±43.221）黃芪大黃組 820.85±7.062）153.38±41.65大黃組 724.09±3.022）148.88±46.89黃芪組 833.75±19.95209.88±99.69

表2 對 CRF 大鼠 CHOL、TG、Ca、P 的影響 （±s）

表2 對 CRF 大鼠 CHOL、TG、Ca、P 的影響 （±s）

注：與模型組比較，1）P<0.01

組別 n CHOL TG Ca（mmol/L）P（mmol/L）正常組 105.35±5.382.73±1.231.12±0.5611.35±2.581）模型組 87.68±4.483.51±1.231.06±0.4717.88±3.45黃芪大黃組 84.30±1.892.74±0.241.22±0.4711.69±2.081）大黃組 75.59±2.003.05±0.741.13±0.8111.75±3.501）黃芪組 84.52±1.692.65±0.210.78±0.1312.07±3.501）

由表1、表2可以看出，與正常組比較，模型組血漿中 UREA、Cr、P 明顯升高（P<0.01），說明造模成功；黃芪大黃組、大黃組、黃芪組大鼠血漿的P水平與模型組相比則顯著降低（P<0.01）；黃芪大黃組與模型組相比有降低 UREA、Cr、膽固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）的趨勢；與模型組相比，黃芪大黃組有升高血鈣的趨勢。

2.2 對大鼠血漿中SOD、LPO的影響

結果見表3。

表3 對CRF大鼠血漿SOD、LPO的影響 （±s）

表3 對CRF大鼠血漿SOD、LPO的影響 （±s）

注：與模型組比較，1）P<0.01

組別 n SOD（μg/mL）LPO（mmol/L）正常組 1085.02±10.764.54±0.781）模型組 877.22±9.248.72±0.50黃芪大黃組 877.45±19.434.48±1.301）大黃組 778.65±22.034.73±1.361）黃芪組 881.76±6.864.32±2.391）

由表3可見，SOD含量各組間相比，差異雖無統計學意義（P>0.05），但與正常組比較，模型組SOD含量有降低的趨勢；與模型組相比，黃芪組SOD含量有升高的趨勢，而黃芪大黃組、大黃組變化不明顯。血漿LPO含量，模型組較正常組顯著升高（P<0.01）；與模型組相比，黃芪大黃組、大黃組、黃芪組都能明顯地降低大鼠血漿中LPO含量（P<0.01）。

3 討 論

CRF是各種原因引起的腎臟疾病持續進展的最終結局，是一種進行性的、不可逆的臨床綜合征，其臨床癥狀復雜，死亡率高［6］。中醫學對慢性腎功能衰竭的認識自《內經》時期開始，經過長期的臨床醫學發展，目前對此病的治療已有很大突破。研究多認為此病主要與脾腎虛損有關，誘因為外邪致虛勞，基本病機為本虛標實，正虛則包括氣血陰陽的虛損［7］，邪實為濕濁邪毒壅阻。因此臨床的基本治療原則是扶正祛邪。

大黃性寒味苦，入脾、胃、大腸、心包、肝經，具有清熱瀉火、涼血祛瘀、解毒功效，其臨床應用廣泛，除傳統的瀉下作用外，其臨床應用領域擴展到消化系統、免疫系統、泌尿系統等方面［8］。氮代謝紊亂是CRF患者的突出表現，大量實驗和臨床研究均證明，大黃具有改善氮代謝的作用［9］。研究報道，大黃對腎臟代償性增生的保護作用是通過降低CRF大鼠血清中肌酐、尿素氮水平，改善腎性貧血癥狀，調整鈣、磷、鎂等電解質代謝紊亂，糾正酸中毒，改善機體蛋白質代謝的紊亂狀態等途徑完成［6］。黃芪味甘性溫，具有補氣升陽、固表止汗、托毒排膿、利水消腫、斂瘡生肌的功效?，F代藥理研究表明，黃芪具有增強機體免疫功能，強心降壓、降血糖、利尿、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤、抗病毒、鎮靜、鎮痛等作用。黃芪對缺血性腎臟有保護作用［10-11］，通過抗氧化、清除自由基、促進細胞代謝、利尿消腫、減少尿白蛋白排泄、促肝臟合成白蛋白、降脂、調節免疫、降血壓等作用，保護腎臟細胞免受傷害。

本實驗結果表明，黃芪大黃組與模型組相比有降低尿素氮、肌酐代謝產物含量的趨勢，且作用強度優于黃芪組。對于膽固醇、甘油三酯，黃芪大黃組與模型組相比，都有降低的趨勢，其作用強度優于大黃組；對于鈣，黃芪大黃組與模型組相比，有升高的趨勢，且作用強度優于大黃組和黃芪組，表現出改善氮代謝作用，糾正鈣、磷、鎂等電解質代謝紊亂，糾正酸中毒，改善機體蛋白質代謝的紊亂狀態，對腎臟代償性增生有一定的保護作用；黃芪大黃組、大黃組、黃芪組與模型組相比，超氧化物歧化酶含量有升高的趨勢，但黃芪大黃組、大黃組變化不明顯；三組血漿中LPO的含量顯著降低（P<0.01），表現出清除自由基作用，改善由于過多的自由基對腎功能造成的進一步損害?？傊?，黃芪與大黃配伍、黃芪或大黃單用均可通過不同的作用途徑起到改善CRF的作用，黃芪與大黃配伍后總體作用效果強于單味藥。綜合評價認為，大黃、黃芪配伍后相互促進、協同起效，表現出較強的藥理活性，對CRF有較好的治療效果。

［1］嚴惠芳，馬居里.慢性腎功能衰竭的中醫研究與思考［J］.山西中醫，2007，28（4）：458-459.

［2］史偉.慢性腎功能衰竭的中醫治則與用藥［J］.江蘇中醫雜志，2007，39（7）：1-2.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010.

［4］鄭平東.用腺嘌呤制作慢性腎功能衰竭動物模型［J］.中華腎臟病雜志，1989，6（5）：342-343.

［5］楊勇，容蓉，盧兗偉，等.四物湯及其各單味藥對小鼠自由基代謝及免疫功能影響的比較研究［J］.山東中醫藥大學學報，2002，26（4）：299-300.

［6］王平，李春雨，沈曉飛，等.大黃水煎液治療慢性腎功能衰竭的實驗研究［J］.中藥藥理與臨床，2010，26（5）：91-94.

［7］趙凱彬，阮詩瑋.中醫藥治療慢性腎功能衰竭現狀與進展［J］.中醫藥通報，2010，9（1）：63-65.

［8］戴潔.大黃藥理研究與臨床應用［J］.天津藥學，2011，23（4）：67-69.

［9］黎磊石.大黃治療慢性腎功能衰竭的療效及其作用機理［J］.臨床內科雜志，1991，8（6）：12.

［10］荊豐德.黃芪的藥理作用與臨床應用研究綜述［J］.實用醫技雜志，2008，15（20）：2702-2704.

［11］原春輝，劉永峰，程穎，等.黃芪提取液對犬離體腎低溫灌注與保存影響的實驗研究［J］.中國中西醫結合雜志，2003，23（4）：291.