不同腧穴組方對高脂血癥大鼠肝臟形態學影響的觀察

苗晉玲，張國鑫，張中原，冀來喜

（1.山西中醫學院，山西太原030024； 2.天津中醫藥大學針灸推拿學院，天津300193）

高脂血癥（hyperlipidemia）是由于脂肪代謝或運轉異常使血漿中一種或幾種脂質高于正常的一類常見疾病，是人體內脂質代謝紊亂的結果，是動脈粥樣硬化和脂肪肝發病的重要危險因素［1］。脂肪性肝病是因甘油三酯（TG）在肝臟過度沉積而導致的臨床病理綜合征。隨著人們生活方式及飲食習慣的變化，高脂血癥并發脂肪肝的發病率不斷升高，且發病年齡日趨提前［2］。據統計，我國高脂血癥的發病率為18.6%，全國血脂異常人數約1.6億，脂肪肝平均發病率25%，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病。因此，防治高脂血癥合并脂肪肝有著重要的臨床價值。針灸作為一種有效的治療方法，以操作簡便，療效確切，毒副作用少而更具獨特的優勢。

通過觀察高脂血癥并發脂肪肝大鼠針刺“豐隆、中脘、曲池”穴不同組合后肝臟的形態學變化，進而探討最佳腧穴組方治療高脂血癥并發脂肪肝的療效及初步機制，以便為臨床提供更多的理論和實驗指導。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物與分組 雄性SD大鼠90只（購于北京海淀興旺實驗動物養殖場），體重（70±10）g，普通飼料喂養1 w后，將大鼠隨機分為空白組10只（A組），模型組80只，空白組喂養普通飼料，模型組喂養高脂固體飼料（2.0%膽固醇，10.0%豬油，0.2%丙基硫氧嘧啶，基礎飼料87.8%）復制高脂血癥脂肪肝大鼠模型。自由喂養，飲水不限。動物房溫度和濕度分別維持在23℃和60%左右。飼養3 w后，隔夜禁食，所有大鼠眼眶靜脈采血，檢測膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白及谷氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶值，觀察血脂、肝功指標是否升高。造模成功后，從第4周將模型組大鼠隨機分為模型對照組 10只（B組），曲池組（C組），中脘組（D組），豐隆組（E組），曲池+中脘組（F組），曲池+豐隆組（G組），中脘+豐隆組（H組），曲池+中脘+豐隆組（I組），每組10只。

1.1.2 試劑與儀器 TG、TC試劑盒，AST、ALT試劑盒（太原奧盛源科貿有限公司）；電子秤（太原市小店區體壇生化試劑商行），毫針（漢醫無菌針），電針儀、離心機、生物顯微鏡等設備以及生化分析、圖像分析均由山西醫科大學提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 針刺方法 造模成功后，模型對照組大鼠抓取固定，不做針刺。電針治療組大鼠均固定于大鼠固定器中，采用32號1寸漢醫一次性針灸針，取穴參照華興邦動物穴位圖譜，分別取“曲池”、“豐隆”、“中脘”，針刺后接通電針治療儀，避免同一條導線分接身體兩側。頻率10 Hz，強度1.5 V連續波刺激，以肢體輕微抖動為宜。1次/d，20 min/次，連續治療4 w。1.2.2 觀察指標 治療期間，每日觀察并記錄各組大鼠的整體精神狀態、活動度、毛色、糞便等變化。實驗7 w后，禁食12 h，10%水合氯醛麻醉，腹主動脈取血，分離血清，分別檢測甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、谷氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST），由山西中醫學院附屬醫院檢驗科完成。取肝臟左葉，肉眼觀察各組肝臟顏色、體積、包膜及切面有無異常變化。截取肝臟左葉1 cm×1 cm×1 cm組織1塊，置于10%福爾馬林固定，逐級酒精脫水，石蠟包埋，常規切片，HE染色，光鏡觀察肝臟細胞變化。

1.3 統計學方法

采用SPSS13.0統計軟件數據分析，所有數據資料采用均數±標準差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況

實驗過程中，與正常組大鼠相比，模型組大鼠毛色由亮白色變為乳白色，毛發干，食量減少，大便減少，對外界刺激的反應較遲鈍。

2.2 各組大鼠干預4 w后血脂比較

與A組比較，B組大鼠血清TC、TG、LDL-C明顯升高，HDL-C降低（P<0.01），說明造模成功，模型表現為高血脂狀態。與B組比較，除C組外其余各針刺組 TC均顯著降低（P<0.05，P<0.01）；I組 TG 明顯降低（P<0.05），其余針刺各組均有降低趨勢，但差異無統計學意義（P>0.05）；針刺各組HDL-C均顯著升高，LDL-C均明顯降低（P<0.05或P<0.01）。

TC、TG、LDL-C變化各針刺組間比較差異均無統計學意義（P>0.05），針刺各組降低 TC、TG、LDL-C趨勢的效果為I>H>G>F>E>D>C；針刺各組HDL-C有遞增趨勢，但各組間比較差異均無統計學意義（P>0.05），其增高HDL-C的效果為C

表1 各組大鼠干預4 w后血脂比較 （mmol/L，±s）

表1 各組大鼠干預4 w后血脂比較 （mmol/L，±s）

注：與 A 組比較，1）P<0.01；與 B 組比較，2）P<0.05，3）P<0.01

組別 TC TG HDL-C LDL-C A 組 1.58±0.180.35±0.111.00±0.130.50±0.09 B 組 1.78±0.121） 0.57±0.211） 0.82±0.111） 0.79±0.111）C 組 1.67±0.130.43±0.140.41±0.112） 0.62±0.113）D 組 1.63±0.162） 0.42±0.080.44±0.082） 0.59±0.183）E 組 1.48±0.163） 0.42±0.070.46±0.142） 0.58±0.183）F 組 1.43±0.563） 0.41±0.090.49±0.112） 0.54±0.173）G 組 1.40±0.113） 0.41±0.110.49±0.932） 0.54±0.123）H 組 1.33±0.103） 0.38±0.120.53±0.122） 0.53±0.133）I 組 1.29±0.193） 0.37±0.092） 0.69±0.103） 0.47±0.153）

2.3 各組大鼠干預7 w后谷氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶含量的比較

結果見表2。

表2 各組大鼠干預7 w后ALT、AST含量的比較 （mmol/L，±s）

表2 各組大鼠干預7 w后ALT、AST含量的比較 （mmol/L，±s）

注：與 B 組比較，1）P<0.05

組別 n ALT AST A 組 1058.51±5.411） 155.42±7.95 B 組 1073.82±12.32132.98±19.8 C 組 1077.30±8.15159.50±10.02 D 組 1077.45±5.80169.53±11.71 E 組 1069.21±9.60147.78±8.62 F 組 1075.31±10.07138.17±8.37 G 組 1075.86±10.32138.14±16.71 H 組 1075.61±6.68127.28±17.29 I 組 1065.32±13.121） 121.86±13.581）

由表2可見，食用高脂飼料后大鼠血清中的轉氨酶明顯升高，B組較A組ALT升高明顯，電針不同腧穴組合治療7 w后，I組ALT、AST較B組顯著下降（P<0.05）。

2.4 肝臟組織形態學變化

各大鼠肝臟組織解剖后，A組肝臟外觀呈暗紅色，質地柔軟，彈性好。B組肝臟均不同程度發黃，有油膩感，體積增大，邊緣圓鈍，有的與周圍組織粘連（結果見圖1）。A組肝小葉結構完整清晰，肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝小葉肝細胞分界清晰，胞核圓，位于細胞中央，胞質豐富，肝竇中枯否細胞清晰可見。B組肝索排列紊亂，肝細胞腫脹，呈中-重度脂肪變，均可見到小葉內炎癥，炎癥細胞主要以單個核細胞為主，肝細胞出現大小不等的脂肪滴，以大泡型脂肪滴為主，部分肝細胞核被脂肪滴擠壓而明顯偏位，未見纖維化。C～E組肝小葉結構清晰度差，肝索放射狀排列不齊，部分肝細胞體積增大，在中央靜脈及匯管區周邊脂變程度較輕，匯管區可見炎性細胞浸潤，偶見肝細胞壞死灶。F～H組肝小葉結構基本完整清晰，肝索放射狀排列基本整齊，偶見炎性細胞浸潤。I組肝小葉和肝竇結構清晰，細胞內脂滴數量減少，體積縮?。ńY果見圖2）。

圖1 肝臟肉眼觀察圖

圖2 各組大鼠肝臟光鏡觀察圖（HE染色，10×40）

3 討論

高脂血癥并發脂肪肝，是一種臨床常見的脂代謝紊亂及肝功異常的疾病。近年來，隨著經濟的發展，人們生活水平的提高及膳食結構的改變，導致體力活動減少，肥胖比例上升，高脂血癥并發脂肪肝發病率呈現出持續升高的趨勢。

目前國內外研究肝臟代謝、脂質代謝過程中多使用大鼠，它具有價格相對低、生產周期短、易于飼養管理、抵抗力強、實驗取材可滿足大量指標的檢測等特點，被廣泛用于高脂血癥研究的模型動物［3］。高脂血癥脂肪肝大鼠的造模及治療方法很多，但其機理一致，均通過直接給動物喂飼含有高膽固醇、高甘油三酯的高脂食餌引起動物脂代謝紊亂，從而使動物血清中的轉氨酶和甘油三酯升高［4］。再通過針刺不同腧穴治療，如周利等［5］電針“豐隆”穴與普伐他汀鈉組比較，發現兩組均對高脂血癥大鼠TC、TG、LDL-C、NO以及CGRP具有較好的良性調節作用。謝凱等［6］將強刺激針刺與常規針刺治療進行比較，結果發現兩者均可降低血清總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG），升高HDL-C，其中以強刺激針法的總膽固醇水平與治療前相比較降幅最大。夏棣其等［7］認為電針具有保護肝細胞、減輕炎癥反應、改善肝功能作用，血脂和血清酶學檢查結果與肝組織病理形態學檢測結果并不完全一致，檢測肝組織活檢更有意義。雖然針刺治療均有效，但選穴配伍至今尚缺乏系統而完整的標準，客觀上多數處于自發狀態，難以得到科學實驗的證實，因此開展治療高脂血癥脂肪肝的腧穴配伍研究十分重要。

在本實驗設計中，我們采用小周齡大鼠喂養高脂固體飼料方法進行造模，理由如下：①生長環境因素：有著明確的遺傳背景優點的SD大鼠與人接近，從周齡小的開始喂養高脂飼料更容易改變機體內環境，誘發模型速度快；②體重、體長的變化：食用高脂飼料后，體重、體長呈上升趨勢；③模型的可操作性：喂養固體飼料方便，較接近于人類飲食方式。

本實驗在篩選文獻的基礎上，緊密結合臨床實際，選定使用頻次較高、理論記載完整的曲池、中脘、豐隆三穴，從一般情況、體重與對血液中各項指標含量的測定、肝臟病理學變化，便于了解高脂飼料對肝臟功能的影響。造模成功，針刺治療4 w后，與模型組比較，針刺組TC、TG、LDL值均不同程度下降，HDL值升高，ALT、AST值下降。模型組肝臟有明顯病理學損傷，表現為輕至中度脂肪肝。三穴組治療效果較單穴、雙穴組顯著，肝小葉和肝竇結構清晰，細胞內脂滴數量減少，體積縮小。進一步驗證三穴組具有良性調節血脂、肝功及改善肝細胞結構的優勢。

通過實驗證實，不同腧穴對高脂血癥脂肪性肝病大鼠肝臟均有明顯的保護作用，以“曲池”、“中脘”、“豐隆”三穴配伍療效最優。篩選出針灸治療高脂血癥脂肪肝的最佳腧穴組方，為防治高脂血證脂肪肝提供客觀可靠的實驗依據。

［1］郭姣，樸勝華.從高脂血癥發病低齡化趨勢探討其中醫發病機制［J］.中醫藥信息，2008，25（6）：4-6.

［2］馬奎軍.中藥配合針刺豐隆穴治療高脂血癥［J］.中國中醫藥現代遠程教育，2008，6（5）：476.

［3］Yanaqisawa M，Kurihara H，Kimura S，et a1.A novel potent vasoconstrictor peptide produced by vascular endothelial cells［J］.Nature，1988，322（6163）：411-415.

［4］Brown M S，Goldstin J L.A receptor-mediated pathway for cholesterol homeostasis［J］.Science，1986，232（4746）：34.

［5］周利，萬文俊，劉靈光，等.電針"豐隆"穴對高脂血癥大鼠 NO、ET 及 CGRP 的影響［J］.中國針灸，2008，28（1）：57-60.

［6］謝凱，李海舟.強刺激針法對單純性肥胖大鼠脂代謝的調節作用［J］.上海針灸雜志，2010，29（2）：122-124.

［7］夏棣其，劉淑娟，楊欽河.電針豐隆及足三里穴對非酒精性脂肪性肝炎大鼠的干預效應［J］.中國組織工程研究與臨床康復，2007，47（11）：9483-9486.