高效毛細管電泳法測定鹽酸馬尼地平片中鹽酸馬尼地平的含量

宋群立，王 蕾，郝永偉，張超峰，史進進，張紅嶺#

1)許昌幼兒師范學校 許昌 461700 2)鄭州大學藥學院 鄭州 450001

鈣通道拮抗劑[1-3]是一種重要的、臨床常用的心血管治療藥物，廣泛用于冠心病、心絞痛、高血壓、心律失常、心力衰竭等的臨床治療。目前臨床常用的鈣通道阻滯劑主要有兩種，分別為二氫吡啶類和非二氫吡啶類。鹽酸馬尼地平為二氫吡啶類鈣通道拮抗劑，對心臟無抑制作用，不影響心率，具有一定抗動脈粥樣硬化作用，對腎臟具有保護作用，不良反應少，對于高血壓合并2型糖尿病或者糖耐量降低的患者以及老年患者均有良好的降壓作用[4]。目前，測定鹽酸馬尼地平含量的方法有HPLC法[5-6]和液相色譜-質譜聯用法(LC-MS)[7-8]。與上述方法相比，毛細管電泳法具有不使用有機溶劑、經濟、高效分離等優點，目前在藥物制劑、蛋白質及食品的分析檢測中已廣泛應用。作者建立了采用高效毛細管電泳法測定鹽酸馬尼地平片中鹽酸馬尼地平含量的方法，報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料 P/ACE MDQ毛細管電泳儀(美國Beckman公司)，熔融石英毛細管(河北永年光導纖維廠)，Starter 3C酸度計與CP214分析天平(美國奧豪斯公司)，超純水器(美國Millipore公司)。鹽酸馬尼地平對照品(純度 ＞99.0%，批號:20110218)、內標物苯磺酸氨氯地平對照品(純度＞99.0%，批號:20110309)均購自湖北遠成藥業有限公司，鹽酸馬尼地平片(10 mg/片，鄭州大學新藥研究中心提供，批號:20110625、20110709、20110728)，實驗所用其他試劑均為分析純，緩沖液和樣品溶液配制用水均為超純水。

1.2 所需溶液的制備 ①運行緩沖液:稱取無水醋酸鈉1.23 g，溶于500 mL超純水中，得到30 mmol/L醋酸鈉溶液，用1 mol/L醋酸溶液調節pH為4.5。②對照品溶液:精密稱取鹽酸馬尼地平對照品適量，加水定容于100 mL容量瓶中，配成1.0 g/L對照品溶液。③內標溶液:精密稱取苯磺酸氨氯地平適量，加水定容于100 mL容量瓶中，配成1.0 g/L內標溶液。④樣品溶液:取供試品鹽酸馬尼地平片3批，每批20片，精密稱重，置干燥潔凈的研缽中研磨均勻，精密稱取適量(約相當于鹽酸馬尼地平10 mg)，各3份，置100 mL容量瓶中，加適量水充分溶解，再加水定容至刻度，搖勻，以0.45 μm濾膜過濾，取續濾液即為供試品溶液。

1.3 電泳條件 以熔融石英毛細管柱(45 cm×75 μm，有效長度 37 cm)為固定相，壓力進樣(3.4 kPa×5 s)，工作電壓 25 kV，柱溫 25 ℃，檢測波長228 nm，運行緩沖液:30 mmol/L醋酸鹽緩沖液(pH 4.5)。每次運行前用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液、超純水、運行緩沖液依次沖洗毛細管5、3、3 min，2次運行之間以緩沖液沖洗3 min。

1.4 方法學考察

1.4.1 標準曲線的繪制 分別精密吸取對照品溶液 0.25、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50 mL，置 10 mL容量瓶中，各加入內標溶液1.0 mL，加水定容至刻度，搖勻，得到含內標物0.1 g/L，對照品質量濃度分別為 0.025、0.050、0.100、0.150、0.200、0.250 g/L的溶液;按1.3中實驗條依次進樣，以對照品的質量濃度(g/L)為X軸，對照品與內標物峰面積的比值為Y軸，進行線性回歸。

1.4.2 精密度實驗 精密量取對照品溶液、內標溶液各1.0 mL，置10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，配制成0.1 g/L對照品溶液(內標濃度0.1 g/L)，按1.3中實驗條件連續重復進樣6次，記錄色譜圖并計算對照品與內標物峰面積比值及遷移時間。

1.4.3 最低檢測限與最低定量限 分別取信噪比為3∶1時鹽酸馬尼地平溶液的質量濃度為最低檢測限，取信噪比為10∶1時鹽酸馬尼地平的質量濃度為最低定量限。

1.4.4 加樣回收率實驗 取同一批號已知含量的鹽酸馬尼地平片20片，精密稱量，計算平均片重，置研缽中研磨均勻，精密稱取該粉末9份(相當于平均片重)，置于100 mL容量瓶中，分別精密加入鹽酸馬尼地平對照品適量、內標溶液10 mL，加入適量水充分溶解，再加水定容至刻度，混勻，以0.45 μm濾膜過濾，取續濾液，按1.3中實驗條件進樣檢測。

1.5 樣品含量測定 分別精密吸取不同批號的樣品溶液4.0 mL及內標溶液1.0 mL，置10 mL容量瓶中，加水定容至刻度。按1.3中實驗條件進樣檢測。

2 結果

2.1 毛細管電泳圖 見圖1。

2.2 方法學考察結果 該法標準曲線回歸方程為:Y=12.086X+0.00689，r=0.9994。由此可知，在內標濃度為0.1 g/L時，馬尼地平含量在0.025～0.250 g/L時線性關系良好。馬尼地平的最低檢測限為0.0025 g/L，最低定量限為 0.008 g/L。精密度實驗中，峰面積比RSD為1.67%，遷移時間RSD為0.79%。加樣回收率實驗結果見表1。

圖1 對照品(A)及樣品(B)毛細管電泳圖

表1 加樣回收率實驗結果

2.3 樣品含量測定結果 3批樣品馬尼地平相對標示含量分別為 99.32%、99.28%、99.57%。

3 討論

緩沖液的pH值對樣品峰的分離有較大的影響。溶液pH值對毛細管表面特性及柱壁與溶質的電荷差異有較大影響，可改變其相互作用，影響各峰之間的分離度。實驗考察多種 pH值(3.5、4.0、4.5、5.0、6.0)對分離度的影響，結果表明，隨著緩沖液pH值的增高，電滲流增大，樣品的保留時間縮短，但峰形亦隨之變差。綜合考慮后，選用pH值為4.5的醋酸鹽緩沖液，樣品分析時間短，且有較好的分離度。

分離電壓主要對分離度和分析時間產生影響。當分離電壓增加，毛細管軸向的電場強度同時增強，柱效增大，分離時間縮短。分別選擇分離電壓15、20、25 kV進行實驗，結果顯示，25 kV時遷移時間短，同時鹽酸馬尼地平和苯磺酸氨氯地平有較好的分離度。

緩沖液的濃度在一定程度上影響峰形和遷移時間。隨著離子濃度增大，電滲流減小、遷移時間延長、色譜峰變寬。分別選擇30、50、70 mmol/L的醋酸鹽緩沖液，當緩沖液濃度為30 mmol/L時，電流較小，產生的熱較小，馬尼地平和氨氯地平能得到較好的分離。

加入內標可提高毛細管電泳的準確度。該研究結果顯示，加入內標后，回歸方程線性相關系數r=0.9994，RSD=1.67%。

該方法和HPLC[2]法相比，具有樣品保留時間短、分析速度快的優點。該方法樣品保留時間為3 min;HPLC法樣品保留時間為11 min。此外，樣品制備及分析過程中，HPLC法用到有機溶劑，污染大，該方法未用到有機溶劑，更加環保。

總之，該方法簡便、快速、經濟、重復性好，可用于鹽酸馬尼地平片中鹽酸馬尼地平含量的測定。

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