安煥霞+王占林+侯憲寬
摘要:以枸杞品種青杞1號葉片為外植體,比較不同激素濃度和配比對葉片愈傷組織誘導、愈傷組織生長的影響。結果表明,誘導葉片產生愈傷組織最佳的激素濃度與配比是0.7mg/L NAA+0.7mg/L 6-BA;對愈傷組織增殖效果最好的激素濃度與配比是1.0 mg/L 6-BA+0.8 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA;對愈傷組織分化效果最好的激素濃度與配比是1.3 mg/L KT+0.02 mg/L NAA。
關鍵詞:青杞1號;枸杞;葉片;激素;愈傷組織誘導
中圖分類號: S567.1+90.4 文獻標志碼: A
文章編號:1002-1302(2015)04-0059-03
收稿日期:2014-12-17
基金項目:國家星火計劃重大項目(編號:2012GA870001)。
作者簡介:安煥霞(1988—),女,河北邯鄲人,碩士研究生,研究方向為森林培育。E-mail:m13086272187@163.com。
通信作者:王占林,研究員,研究方向為森林培育。E-mail:1735105720@qq.com。
枸杞(Lycium barbarum L.) 在植物學分類學上屬被子植物門雙子葉植物綱茄科枸杞亞屬。既具有防風固沙、保持水土的作用,又是名貴的中藥材,應用前景十分廣闊[1-5]。 青海省柴達木地區平均海拔2 600~3 000 m,日照時間長,晝夜溫差大,空氣濕度低,獨特的氣候條件使得枸杞具有粒大飽滿、肉質肥厚、色澤鮮艷且味甘等特性,但枸杞產區存在品種混亂,高產高抗大果型品種匱乏現象,針對此問題,青海省農林科學院經輻射育種培育出枸杞品種青杞1號。在栽培繁殖過程中,須保持枸杞木本優良性狀,受繁殖材料限制,采用植物組織培養的方式進行快速繁育,是一種極為經濟有效的途徑。
植物組織培養建立在植物細胞的全能性、植物的再生作用的基礎上[6],而植物再生主要是離體的細胞、組織或器官恢復分生狀態,形成愈傷組織,進而再分化的過程[7]。一般認為,培養環境是能否成功誘導出愈傷組織的重要因素,而在誘導愈傷組織、分化過程中激素是關鍵[8-9]。
目前,眾多學者對枸杞組織培養和快速繁殖進行了研究[10-12],但還不夠系統和完善,本研究以青杞1號枸杞葉片為試驗材料,通過設置不同激素濃度和配比,統計分析愈傷組織生長情況,篩選出最佳的激素配比,為青杞1號快速擴繁提供可靠的依據,也可為其他木本植物的相關研究提供技術依據。
1 材料與方法
1.1 材料
為防止材料污染現象發生而影響試驗結果,本試驗從無菌組培苗(由柴達木枸杞產業升級關鍵技術開發與示范項目提供)上采集葉片。
1.2 方法
1.2.1 培養條件 主要是溫度和照度,溫度均為 (23±1) ℃,光照時間16 h/d,照度1 000~1 600 lx。另外MS培養基為基本培養基,并添加蔗糖30 g/L、瓊脂6.0 g/L,調節pH值為5.8~6.0,在容量為 150 mL的三角瓶中裝入 50 mL,在手提式高壓滅菌鍋中,于121 ℃滅菌23 min。
1.2.2 激素配制 1 mg/mL NAA、IBA、6-BA的配制:稱取 0.1 g 藥粉,加 1 mL蒸餾水,滴入0.1 mol/L NaOH 反復搖晃,再滴入NaOH,一直到藥物全部溶解,然后用100 mL容量瓶加水定容,蓋塞后搖勻。
1 mg/mL KT 的配制:稱取 0.1 g 藥粉,加 2~3 mL蒸餾水,滴入0.1 mol/L NaOH 反復搖晃,再滴入NaOH,一直到藥物全部溶解,然后用100 mL容量瓶加水定容,蓋塞后搖勻。
1.2.3 試驗設計
1.2.3.1 葉片愈傷組織誘導 將處理好的葉片切成長 1.5 cm、寬0.5 cm左右的小塊,置于不同愈傷組織誘導培養基上培養,定期觀察其生長情況,葉片愈傷組織誘導培養基溶配比見表1。每瓶接種3塊葉片,每處理接種3瓶,重復3次。
表1 葉片愈傷組織誘導
處理
培養基(mg/L)
NAA 6-BA
1 0.2 0.2
2 0.5 0.5
3 0.7 0.7
4 1.0 1.0
1.2.3.2 愈傷組織增殖 將葉片誘導健康的愈傷組織接入到增殖培養基中,愈傷組織增殖培養基溶液配比見表2。每瓶接種3個愈傷組織,每處理接種3瓶,重復3次。
表2 愈傷組織增殖試驗設計
處理
增殖培養基(mg/L)
6-BA IBA NAA
1 0.5 0.5 0
2 0.5 0.3 0.2
3 1.0 0.5 0.5
4 1.0 0.8 0.2
5 1.5 1.0 0.5
6 1.5 0.5 1.0
1.2.3.3 愈傷組織分化 溶液配比將大量增殖的愈傷組織接入到愈傷組織分化培養基中,進行愈傷組織分化試驗,愈傷組織分化培養基溶液配比見表3。每瓶接種3塊愈傷組織,每處理接種3瓶,重復3次。
表3 愈傷組織分化試驗設計
處理
愈傷組織分化培養基(mg/L)
KT NAA 6-BA
1 1.0 0 0
2 1.3 0.02 0
3 1.3 0.05 0
4 1.6 0.02 0
5 0 0 1.0
6 0 0.02 1.0