復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中磷酸氯喹的雜質定性分析

陳曉英

（福建生物工程職業技術學院食品與生物工程系，福建福州350002）

復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中磷酸氯喹的雜質定性分析

陳曉英

（福建生物工程職業技術學院食品與生物工程系，福建福州350002）

采用高效液相色譜法（HPLC）（紫外檢測器UV和二級管陣列檢測器DAD）和質譜法MS）對復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中磷酸氯喹所產生的雜質進行定性鑒別與歸屬.實驗使用Luna C18色譜柱，以甲醇-2%醋酸（υ/υ 10∶90）為流動相，流速0.5 mL/min，柱溫為室溫，進樣量為20μl，紫外檢測波長為324 nm，DAD檢測波長掃描范圍為200～400 nm，進行高效液相色譜.質譜法則使用ESI電噴霧離子化源，霧化氣壓力為45 psi，干燥氣流速為10 L/min，干燥氣溫度350℃，毛細管電壓3.5 kV，掃描方式采用一級質譜全掃描，再對目標離子進行二級產物離子掃描，碰撞電壓20 eV，采集范圍100-1000 m/z.紫外檢測復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中有與磷酸氯喹對照相似的雜質峰，且該雜質的DAD光譜圖和氯喹的DAD光譜圖相似，同時二級質譜掃描顯示該雜質與氯喹有相似碎片.確證復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中磷酸氯喹所產生的雜質為N-去乙基氯喹.

復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊；磷酸氯喹；HPLC；HPLC-MS

復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊為復方降壓藥，其組成成分為：地巴唑、鹽酸異丙嗪、磷酸氯喹、硫酸胍生、維生素B6、氯化鉀、利血平、氯氮、氫氯噻嗪、乳酸鈣、維生素B1、三硅酸鎂.國內文獻多見其各主成份或重金屬含量測定［1-7］，文獻［8］對復方中鹽酸異丙嗪和氯氮的有關物質分析，未見對其組分磷酸氯喹產生的有關物質分析的文獻.本實驗對本品中組分磷酸氯喹的有關物質進行初步研究，采用HPLCMS/MS中Scan模式測定該雜質，得到一級質譜中分子離子峰，然后采用Product模式對分子離子峰進行二級質譜掃描，得到相應的碎片離子，根據分析結果進行結構推斷，推測組分磷酸氯喹產生的主要雜質為N-去乙基氯喹.

1　儀器和試藥

儀器：美國Agilent1260HPLC-DAD、Agilent1200 HPL-C、6410 triple quadLC-MS.

試藥：市售復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊（福建延年藥業有限公司，批號20111204），磷酸氯喹對照（中國食品藥品檢定研究院），甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純.

2　實驗方法

2.1液相色譜條件

色譜柱：Luna C18（250×4.6mm，5μm）；流動相：以甲醇-2%醋酸（V/V 10∶90）；流速：0.5 ml/min；柱溫：室溫；進樣量：20 μl.

紫外檢測器：檢測波長為324nm，DAD波長掃描范圍為200～400nm；

2.2質譜條件

ESI電噴霧離子化源，霧化氣壓力為45 psi，干燥氣流速為10 L/min，干燥氣溫度350℃，毛細管電壓3.5 kV.負離子檢測模式，掃描方式采用一級質譜全掃描，再對目標離子進行二級產物離子掃描，不同的碰撞電壓20 eV，采集范圍100-1000 m/z.

3　結果與討論

3.1HPLC-UV分析

抽取9種不同廠家的復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊樣品，在研究過程中發現，按照探索研究中有關物質項下方法處理后，測定有關物質含量，樣品的HPLCUV色譜圖中磷酸氯喹色譜峰相鄰有一個較明顯的小峰，經專屬性試驗排除了樣品中其他組分的干擾，而且同法對磷酸氯喹原料藥及對照品分別測定，發現在相同位置均出現明顯的色譜峰.典型的色譜圖見圖1和圖2.

3.2HPLC-DAD分析

為了分析HPLC-UV色譜圖中雜質的來源，對所有樣品進行測定，發現該雜質與鹽酸氯喹原料中的雜質保留時間和DAD光譜圖基本一致，因此懷疑該雜質為鹽酸氯喹原料帶來的.中國藥典中磷酸氯喹有關物質檢查用的是薄層色譜自身對照法，并未闡明有哪些雜質，陳?？担?］只用HPLC檢測了磷酸氯喹雜質的量但也未闡明是哪些雜質.據方文僅［10］報道，磷酸氯喹的雜質峰有2～3個，測定的樣品中僅有一個相鄰主峰的雜質峰較為明顯，根據HPLC-DAD光譜圖情況并結合HPLC-UV色譜圖情況，初步推測該雜質為N-去乙基氯喹.典型的光譜圖見圖3和圖4.

圖1　復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊有關物質典型HPLC-UV色譜圖Fig.1The typical HPLC-UV chromatogram of the related substances in Compound Bendazol andHydrochlorothiazide Capsules sample

圖2　鹽酸氯喹原料有關物質典型HPLC-UV色譜圖Fig.2The typical HPLC-UV chromatogram of the related substances in Chloroquine Phosphate raw material

3.3HPLC-MS分析

為了確證以上雜質峰，采用HPLC-MS對該雜質峰進行結構的進一步分析.采用HPLC-MS/MS中Scan模式測定該雜質，得到雜質的DAD紫外光譜圖和一級質譜中分子離子峰，然后采用Product模式對分子離子峰進行二級質譜掃描，得到相應的碎片離子，再進行結構推斷.該雜質（疑似N-去乙基氯喹）及氯喹的質譜信息見表1和圖5、圖6.

3.4討論

從上述的質譜碎片和紫外光譜圖可以看到，雜質與氯喹有相似的質譜碎片和紫外光譜圖，因此應該和氯喹有相似的結構.綜合文獻［10］和氯喹的裂解規律，結合各雜質相應的質譜碎片確定該雜質為N-去乙基氯喹.該雜質可能的質譜裂解途徑詳見圖7.

圖3　疑似N-去乙基氯喹的DAD光譜圖Fig.3Suspected DAD spectrogram of N-deethylation chloroquine

圖4　氯喹的DAD光譜圖Fig.4DAD spectrogram of Chloroquine Phosphate

表1　疑似N-去甲基氯喹和氯喹質譜信息表Tab.1Mass information of suspected N-deethylation chloroquine and Chloroquine Phosphate

圖5　疑似N-去乙基氯喹的二級質譜圖Fig.5Mass spectrogram of suspected N-deethylation chloroquine

圖6　氯喹的二級質譜圖Fig.6Mass spectrogram of Chloroquine Phosphate

圖7　N-去乙基氯喹可能的質譜裂解途徑Fig.7Possible mass spectrum cleavage pathway of N-deethylation chloroquine

［1］郭福團，莊波陽，郭仙忠，等.9個企業復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊殼中8種金屬元素的含量分析［J］.中國藥房，2015，26（1）：121-123.

［2］陳炳.ICP-MS法測定復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中7種有害金屬的含量［J］.海峽藥學，2014，26（2）：55-57.

［3］修虹.HPLC法測定復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中利血平的含量［J］.海峽藥學，2012，23（12）：63-65.

［4］陳秀琳.HPLC法測定復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中六種組分的含量［J］.海峽藥學，2011，23（12）：55-57.

［5］陳秀琳.HPLC法測定復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中硫酸胍生、磷酸氯喹、維生素B1和維生素B6的含量［J］.中國藥品標準，2010，11（6）：453-456.

［6］田寶勇，劉英華，楊曉華，等.火焰原子吸收法測定復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中氯化鉀含量［J］.河北科技大學學報，2010，31（5）：406-408.

［7］鄧富良，饒均明，周平，等.HPLC測定復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中五種成分的含量［J］.中國藥科大學學報，2004，35（5）：446-448.

［8］陳曉英.復方地巴唑氫氯噻嗪膠囊中鹽酸異丙嗪和氯氮的有關物質分析［J］.中國藥房，2014，25（41）：3911-3913.

［9］陳?？?，吳偉.磷酸氯喹有關物質的HPLC測定［J］.中國醫藥工業雜志，2007，38（5）：372-373.

［10］方文僅，陳日南，陳雋，等.磷酸氯喹中有關雜質的分析［J］.中國醫藥工業雜志，1997，28（12）：548-550.

責任編輯：劉紅

The Qualitative Analysis of Impurities by Chloroquine Phosphate in Compound Bendazol and Hydrochlorothiazide Capsules

CHEN Xiaoying
（Department of Food and Biological Engineering，Fujian Vocational College of Bio-engineering，Fuzhou 350002，China）

The impurities of chloroquine phosphate in Compound bendazol and hydrochlorothiazide capsules，were identi?fied using high performance liquid chromatography（UV detector and two diode array detector）and mass spectrometry.Us?ing Luna C18 column with the mobile phase of methanol and acetic acid-2%，（υ/υ 10∶90），with flow rate of 0.5 ml/min，col?umn temperature at room temperature，the injection volume was 20μl，the UV detection wavelength was 324nm and the DAD detection wavelength range was 200～400nm，by high performance liquid chromatography.In mass spectrometry，ESI electro?spray ionization was used，atomization gas pressure was 45 psi，with drying air flow rate 10 L/min and temperature 350℃and capillary voltage 3.5 kV，scaning MS.And then the second scan was carried out to the first target ion with voltage 20eV and collection range of 100-1000 m/z.UV detection results showed that the impurity peak in Compound bendazol and hydro?chlorothiazide capsules was similar to that in chloroquine phosphate.And the DAD detection result of the impuritie was simi?lar to chloroquine.The second mass scan result showed that the molecular fragments were similar to chloroquine.The impuri?ties generated by chloroquine phosphate in Compound bendazol and hydrochlorothiazide capsules is N-deethylation chloro?quine.

compound bendazol and hydrochlorothiazide capsules；chloroquine phosphate；HPLC；HPLC-MS

R 917

A

1674-4942（2015）04-0414-04

2015-11-10