輔助性T細胞因子在不穩定型心絞痛發病機制中的作用*

陳興　鐘赟　 徐米清　許博裳　宮雅南　黃淑妍　肖新懷　羅輝遇

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輔助性T細胞因子在不穩定型心絞痛發病機制中的作用*

陳興①鐘赟①徐米清①許博裳①宮雅南①黃淑妍①肖新懷①羅輝遇①

【摘要】目的：探討血漿1型輔助性T細胞/2型輔助性T細胞（Th1/Th2）失衡在不穩定型心絞痛（UAP）發病中的作用。方法：選擇2012年6月-2014年6月本院收治的20例UAP患者和20例穩定型心絞痛（SAP）患者，另選取20例健康體檢者作為對照組。采用酶法檢測血清甘油三酯和總膽固醇等生化指標，ELISA試劑盒檢測Th1細胞因子干擾素-γ（IFN-γ）和Th2細胞因子白介素4（IL-4）的血漿蛋白表達水平。結果：對照組和SAP組患者的血漿IFN-γ和IL-4蛋白濃度比較差異無統計學意義（P＞0.05）。與對照組和SAP組相比，UAP組血漿IFN-γ水平和Th1/Th2比值均明顯升高，而IL-4水平明顯降低，差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論：UAP患者Th1細胞活性升高，Th2細胞活性降低，Th1/Th2亞群失衡可能在UAP的發病機制中發揮重要作用。

【關鍵詞】心絞痛；不穩定型；輔助性T細胞；細胞因子

①廣州醫科大學附屬第二醫院廣東廣州510260

First-author’s address：The Second Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510260，China

不穩定型心絞痛（UAP）是指介于穩定型心絞痛（SAP）與急性心肌梗死之間的心肌缺血癥候群，是活動性冠狀動脈硬化斑塊突然破裂、血栓形成、冠脈狹窄加重的結果。近年的研究表明，炎癥和免疫反應可能是易損斑塊破裂的關鍵因素，輔助性T細胞（Th）、自然殺傷細胞和細胞毒性細胞等多種免疫細胞參與了動脈粥樣斑塊形成和發展［1-3］。Th主要包括Th1和Th2兩種功能不同的亞群，正常狀態下，Th1和Th2處于動態平衡中，而Th1/Th2失衡已被證實與多種炎癥及變態反應性疾病密切相關［4-5］。本研究選擇Th1、Th2分泌的細胞因子干擾素-γ（IFN-γ）和白細胞介素-4（IL-4）作為主要檢測指標，研究Th1/Th2亞群失衡與UAP發病的關系。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2012年6月-2014年6月本院門診或住院收治的冠心病患者40例，均曾行冠狀動脈造影或冠狀動脈CT血管造影檢查明確冠心病診斷。其中，SAP患者20例，男11例，女9例，年齡48～70歲，符合加拿大心血管協會SAP分級Ⅱ或Ⅲ級診斷標準；UAP患者20例，男10例，女10例，年齡53～70歲，符合Braunwald分級Ⅱ或Ⅲ級，入院前24h內曾出現靜息性胸痛，心電圖檢查顯示一過性ST段壓低或T波倒置，血清肌鈣蛋白陰性。排除糖尿病、心源性休克、自身免疫性疾病、腫瘤、嚴重肝腎功能不全及嚴重感染患者，排除就診時甘油三酯和總膽固醇水平異常升高者。另隨機入選20例健康體檢者作為對照組，年齡、性別與冠心病患者均衡。所有研究對象均簽署知情同意書。各組研究對象在性別、年齡、空腹血糖（BG）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平方面比較差異均無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1　各組一般資料比較

1.2方法

1.2.1一般資料通過問卷調查法獲得所有研究對象的性別、年齡等一般資料。

1.2.2生化指標患者均采集此次就診時的空腹血液標本，采用酶法檢測BG、TC、TG、HDL-C和LDL-C。

1.2.3血漿IFN-γ和IL-4采集患者血樣后，離心收集血漿，檢測前儲存于-80℃冰箱，待所有研究對象血樣收集完畢后，采用ELISA試劑盒法（武漢博士德公司）檢測各組患者血漿IFN-γ和IL-4表達水平，操作步驟按說明書進行。

1.3統計學處理采用SPSS17.0軟件對所得結果進行統計學分析，計量資料采用（±s）表示，多組均數比較采用方差分析，多組均數的兩兩比較采用SNK-q檢驗，以P＜0.05表示差異有統計學意義。

2　結果

與對照組和SAP組比較，UAP組Th1相關細胞因子IFN-γ血漿濃度和Th1/Th2比值均明顯升高，而Th2相關細胞因子IL-4濃度明顯降低，差異均有統計學意義（P＜0.05）。對照組與SAP組比較，血漿IFN-γ和IL-4濃度及Th1/Th2比值差異均無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2　各組血漿Th1和Th2相關細胞因子表達水平比較（±s）

表2　各組血漿Th1和Th2相關細胞因子表達水平比較（±s）

*與對照組比較，P＜0.05；△與SAP組比較，P＜0.05

組別　IFN-γ（ng/L）　IL-4（ng/L）　Th1/Th2對照組（n=20）45.01±28.35　296.18±137.54　0.17±0.09 SAP組（n=20）58.70±30.02　275.42±100.87　0.23±0.13 UAP組（n=20）84.87±13.99*△　221.06±35.15*△　0.39±0.08*△

3　討論

不穩定型心絞痛（UAP）是一種高危心臟事件，與不穩定性粥樣斑塊密切相關。動脈粥樣硬化是冠心病的病理生理學基礎，但動脈粥樣硬化斑塊如何由穩定變為不穩定的機制尚不明確。近年的研究表明，動脈粥樣斑塊破裂幾乎總是與炎癥共存，動脈粥樣硬化斑塊中含有單核細胞、巨噬細胞和T淋巴細胞等炎性細胞，這提示炎癥免疫系統的變化與動脈粥樣斑塊病變進展密切相關［6-9］。由于炎癥和免疫反應與糖尿病、高脂血癥等多種冠心病合并癥密切相關，本研究排除了糖尿病等自身免疫性疾病患者以及高脂血癥或血脂控制不達標的冠心病患者［10-13］?；颊咭话阗Y料顯示，各組患者性別、年齡、血糖、血脂比較差異無統計學意義（P＞0.05），以此避免高血糖、高血脂等已知因素對炎癥指標的影響。

動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，活化的T淋巴細胞，尤其是CD4+Th細胞可能存在于動脈粥樣硬化發生、發展的各個階段。CD4+Th細胞是人體內重要的免疫調節細胞，主要包括Th1和Th2兩種功能不同的細胞亞群。Th1主要分泌IFN-γ、IL-2、IL-12等，主要介導細胞免疫，參與介導細胞毒和局部炎癥有關的免疫應答；Th2細胞主要分泌IL-10、IL-4、IL-5等，主要介導體液免疫，可避免Th1的過度活化。目前研究表明，Th亞型在冠狀動脈粥樣硬化病變中發揮重要作用。Methe等［14］對比研究了SAP患者、急性冠脈綜合征（ACS）患者、無先兆性心肌梗死患者和正常對照者的血漿Th1、Th2表達水平，結果發現，ACS患者的Th1水平與穩定型心絞痛（SAP）和無先兆性心肌梗死比較明顯升高，而Th2水平在各組中無明顯差異，由此認為Th1的激活可能導致了病變的不穩定。Mostafazadeh等［15］篩選了31例UAP患者、27例SAP患者和24例正常對照者，研究發現正常對照人群Th2相關細胞因子IL-10水平明顯高于其他各組冠心病患者，而IFN-γ和IL-4在各組患者中均無明顯差異。韓淑芳等［16］收集了40例ACS患者和18例SAP患者的外周血，檢測外周血中Th1、Th2相關細胞因子IFN-γ和IL-2的濃度，結果發現ACS患者Th1相關細胞因子水平高于SAP患者，而Th2相關細胞因子水平低于SAP患者，提示Th1/Th2亞群失衡可能參與了ACS的發生。由此可見，Th1、Th2細胞因子變化可能與急性冠脈事件相關，但在其相關因子表達水平、發揮作用方面仍存在較大分歧。

IFN-γ是一種重要的前炎性細胞因子，主要由活化的Th1產生。它能夠通過促進促炎相關基因表達，激活血液中單個核細胞靶向遷移至動脈血管內皮，活化巨噬細胞、自然殺傷細胞等效應細胞，誘導產生Th17等多種途徑，是參與動脈粥樣硬化形成和發展過程中的關鍵步驟［17-18］。Whitman等［19］給予動脈粥樣硬化易感的載脂蛋白E基因敲除鼠每日注射重組IFN-γ或安慰劑，30d后注射重組IFN-γ組小鼠動脈硬化損傷面積達對照組的2倍，這進一步證實了IFN-γ具有促動脈粥樣硬化的作用。本研究結果顯示，UAP患者血漿IFN-γ濃度明顯高于對照組和SAP組，這表明在排除各干擾因素的前提下，UAP病變本身可能誘導Th1活性的明顯升高。IL-4是一種重要的抗炎細胞因子，可以通過抑制Th向Th1亞群分化而避免Th1的過度激活。Huber等［20］在研究輕度高脂飲食小鼠模型時發現，與對照組相比，給予細胞因子IL-4可減少80%以上的動脈條紋面積，IL-4可能通過抑制Th1細胞反應阻止早期動脈脂質條紋的出現。本研究發現，UAP患者IL-4濃度明顯降低，提示Th2活性降低，對激活的Th1拮抗能力減弱，從而出現對Th1過度激活反應的協同作用。同時，對照組和SAP組患者血漿IFN-γ、IL-4濃度水平及兩者比值均無明顯差異，這進一步提示Th1/Th2失衡狀態可能反映動脈粥樣斑塊的不穩定狀態甚至斑塊破裂的過程，從而預示冠心病患者病情進展，隨時可能出現急性冠脈事件。因此，在臨床實踐中可考慮將Th1/Th2失衡狀態作為冠狀動脈易損斑塊的標記物之一，早期篩查識別UAP高?；颊?，可有利于臨床醫師及早對其進行合理的危險分層，有利于高?；颊咴缙诘玫接行Ц深A，從而降低病死率，改善患者預后。

綜上所述，Th1/Th2失衡可能與冠狀動脈粥樣斑塊性質有關，與易損斑塊的發生、發展密切相關，可能在UAP的發病機制中發揮重要作用。同時，應注意到冠心病發病機制非常復雜，干擾因素眾多，本研究入選患者數量有限，Th1/Th2失衡的實際臨床應用價值可能仍需在大樣本、長期、隨機對照的臨床研究中進一步探討。

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Effect of T Helper Cell Cytokines on Pathogenesis of Unstable Angina Pectoris

CHEN Xing，ZHONG Yun，XU Mi-qing，et al.
Medical Innovation of China，2016，13（13）：017-020

【Abstract】Objective：TodetecttheeffectofimbalanceofplasmaThelpercell（Th）1andTh2on pathogenesisofunstableanginapectoris（UAP）.Method：TwentypatientswithUAPandtwentypatientswith stableanginapectoris（SAP）admittedtoourhospitalfromJune2012toJune2014wererecruitedinthestudy，othertwentyadultsofhealthyexaminationasthecontrolgroup.Serumtriglyceride（TG），totalcholesterol（TC）andsomeotherbiochemicalindicesweredetectedbytheenzymemethod.Plasmaproteinexpressionsweremeasured forinterferon-γ（IFN-γ）ofTh1cytokineandinterleukin-4（IL-4）ofTh2cytokinebyenzymelinked immunosorbentassay（ELISA）.Result：Therewasnosignificantdifferenceonproteinconcentrationofplasma IFN-γandIL-4betweenthecontrolgroupandtheSAPgroup（P＞0.05）.Comparedtotheothertwogroups，patientsintheUAPgrouphadsignificantlyincreasedIFN-γconcentrationandratioofTh1/Th2，butdecreased IL-4concentration，thedifferenceswereallstatisticallysignificant（P＜0.05）.Conclusion：PatientswithUAP sufferfromupregulationofTh1activityanddownregulationofTh2activity，indicatingthatimbalanceofTh1and Th2mayplayanimportantroleintheUAPpathogenesis.

【Key words】Anginapectoris；Unstable；Thelpercell；Cytokine

*基金項目：廣東省廣州市中醫藥中西醫結合科研課題（20132A011031）；廣東省科技計劃項目（2013B021800198）

通信作者：陳興

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.13.005

收稿日期：（2016-01-15）（本文編輯：劉蕾）