吉馬酮改善H2O2誘導的臍靜脈血管內皮細胞氧化應激損傷的作用

陳瓊芳 王鋼 唐麗清++俞獻文

[摘要]該文主要研究吉馬酮對過氧化氫（H2O2）誘導的臍靜脈血管內皮細胞（HUVECs）氧化損傷的保護作用并探討其可能的作用機制。使用500 μmol·L-1H2O2誘導臍靜脈內皮細胞3 h，從而建立氧化損傷模型，再用不同濃度吉馬酮（20，40，100，150，200 μmol·L-1）保護24 h。利用MTT法檢測吉馬酮對H2O2損傷HUVECs細胞活力的影響；ELISA法檢測PGI2，TXB2，ET1，tPA，PAI1，TNFα和IL6；硝酸還原酶法檢測NO；比色法檢測NOS及GSHPx；再分別采用TBA法、WST1法和微量酶標法檢測MDA，SOD和LDH的含量等；Hoechst 33258熒光染色法觀察細胞凋亡情況；RTPCR檢測細胞中Bax，Bcl2，Caspase3 mRNA表達。結果表明500 μmol·L-1H2O2作用3 h細胞損傷率達到52%，而在20～200 μmol·L-1隨著吉馬酮濃度的增大被損傷細胞活性不斷增強。與正常組比較，H2O2損傷使PGI2，NO，TNOS，tPA，SOD，GSHPx和Bcl2 mRNA降低，使PAI1，ET1，IL6，TNFα，TXB2，LDH，MDA，Bax mRNA和Caspase3 mRNA增加；與模型組比較，吉馬酮（200，100，50 μmol·L-1）使PGI2，NO，TNOS，tPA，SOD，GSHPx和Bcl2 mRNA增加，使PAI1，ET1，IL6，TNFα，TXB2，LDH，MDA，Bax mRNA和Caspase3 mRNA減少。Hoechst 33258熒光染色與正常組比較，模型組細胞膜與細胞核呈濃縮致密的強藍色熒光，細胞數量明顯減少；與模型組比較，給藥組的藍色熒光強度降低等。以上研究結果表明，吉馬酮可能通過抗氧化及抑制細胞凋亡等作用，從而改善H2O2誘導的臍靜脈血管內皮細胞氧化應激損傷的作用。

[關鍵詞]吉馬酮； H2O2； 臍靜脈內皮細胞； 氧化應激； 保護作用

Effect of germacrone in alleviating HUVECs damaged by

H2O2induced oxidative stress

CHEN Qiongfang1， WANG Gang1， TANG Liqing1， YU Xianwen1， LI Zhaofei2， YANG Xiufen1*

（1. Department of Pharmacology， School of Pharmacy， Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning 530001， China；

2. Shaanxi Second People′s Hospital， Xi′an 710000， China）

[Abstract]This study focuses on the protective effect of germacrone on human umbilical vein endothelial cells（HUVECs） damaged by H2O2induced oxidative stress and its possible mechanisms. The oxidative damage model was established by using 500 μmol·L-1 H2O2 to treat HUVECs for 3 hours， and then protected with different concentrations of germacrone for 24 hours. The effect of germacrone on cell viability of HUVECs damaged by H2O2 was detected by MTT. The contents of PGI2， TXB2， ET1， tPA， PAI1， TNFα and IL6 were detected by ELISA. The content of NO was detected by using nitrate reductase method. Colorimetry was used to detect NOS and GSHPx. The contents of MDA， SOD and LDH were detected by TBA， WST1 and microplate respectively. Apoptosis was observed by Hoechst 33258 fluorescent staining. The mRNA expressions of Bax， Bcl2 and Caspase3 in cells were detected by RTPCR. The results showed that the cell damage rate was 52% after treated with 500 μmol·L1 H2O2 for 3 hours. The cell activity was increasing with the rise of germacrone concentration within the range of 20200 mol·L-1. Compared with normal group， the contents of PGI2， NO， TNOS， tPA， SOD， GSHPx and Bcl2 mRNA expressions were lower after damaged with H2O2. The contents of PAI1， ET1， IL6， TNFα， TXB2， LDH， MDA， Bax mRNA and Caspase3 mRNA expressions were increased. Compared with model group， the contents of PGI2， NO， TNOS， tPA， SOD， GSHPx and Bcl2 mRNA expressions were increased after treated with germacrone. The contents of PAI1， ET1， IL6， TNFα， TXB2， LDH， MDA， Bax mRNA and Caspase3 mRNA expressions were lower after treated with germacrone. According to Hoechst 33258 fluorescence staining， compared with normal group， the cell membrane and the nucleus showed strong dense blue fluorescence， and the number of cells significantly decreased in model group. Compared with model group， blue fluorescence intensity decreased in drug group. The above findings demonstrate that germacrone may improve the effect on HUVECs damaged by H2O2induced oxidative stress by resisting oxidation and inhibiting cell apoptosis.endprint

[Key words]germacrone； H2O2； human umbilical vein endothelial cell（HUVEC）； oxidative stress； protective effect

血管內皮細胞與血管生理學的血管舒張、再生、炎癥和屏障功能等許多方面密切相關，同樣內皮細胞損傷也是導致動脈粥樣硬化和高血壓等疾病的重要因素之一[1]，其中氧化應激引起的血管內皮細胞氧化應激損傷是引起血管內皮功能障礙的重要因素[2]。因此，保護和改善血管內皮細胞的功能是預防和治療疾病的重要手段，從而利用天然藥用植物有效成分預防血管內皮細胞的損傷來研究治療心血管疾病形成熱潮。

氧化應激是由潛在的活性氧生成與清除活性之間不平衡而導致的代謝狀態[3]。氧化應激損傷還可導致中性粒細胞炎性浸潤，蛋白酶分泌增加，產生大量氧化中間產物，及機體存在的一些抗氧化酶的變化，主要包括超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSHPx）、過氧化氫酶（CAT）等。因此認為其是導致衰老和疾病的一個比較重要的因素。本研究通過過氧化氫（H2O2）損傷HUVECs 細胞從而建立氧化應激體外模型，用于探討吉馬酮對HUVECs細胞氧化應激損傷的保護作用和機制，為吉馬酮的進一步研究和開發提供有益的依據。

1材料

11藥物及配置吉馬酮（純度≥98%，購自中國科學院成都生物研究所，Lot No MUST15012414）。吉馬酮的配制：精密稱取吉馬酮，加入DMSO吹打數次使其溶解完全（DMSO的質量分數為01%），再加入DMEM/F12培養液充分混勻，再經025 μm微孔濾膜過濾除菌，即得。

12試劑30%H2O2（成都市科龍化工試劑廠）；DMEM/F12細胞培養液（Hyclone，Lot No AAL209346）；四季青胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司）；1×PBS（Gibco，Lot No 8116251）；025%胰蛋白酶EDTA消化液（Gibco，Lot No 1665735）；MTT（Sigma，Lot No M2128）；DMSO（Sigma，Lot No 520C031）；4%多聚甲醛（Solarbio，Lot No 20160711）；Hoechst 33258染色液（生物工程，E6073010005）；NO試劑盒、TNOS試劑盒、LDH測試盒、GSHPx測試盒、SOD測定試劑盒和微量MDA測試盒（南京建成生物工程研究所）；PGI2，TXB2，ET1，tPA，PAI1，TNFα和IL6酶聯免疫試劑盒（武漢華美生物工程有限公司）；DEPC水（生物工程上海有限公司，Lot No C612BA0013）；RNAiso plus（TAKARA）；異丙醇、無水乙醇和氯仿（AR，成都市新都區木蘭鎮工業開發區）；RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit（Thermo，Lot No 00310953）；Taq MasterMix（康為，Lot No 00461511）；內參GAPDH（生物工程購買）；引物（寶生物公司合成）。

13儀器細胞培養箱（Sanyo，MCO18AIC）；TECAN全波長酶標儀（Infinite M200PRO）；高速多用離心機（Thermo Fisher）；電熱恒溫鼓風干燥箱（上海鴻都電子科技有限公司，DHG9140A）；倒置熒光顯微鏡（Leica，DMI3000B）；通用電泳儀（PowerPac Universal）；低溫離心機（Eppenderf，Centrifuge 5430R）；PCR儀（BIO RAO T100TMThermal Cycler）；凝膠成像儀（BIORAD）。

2方法

21氧化損傷模型的建立及MTT比色法檢測吉馬酮對H2O2損傷HUVECs活性的影響參考相關文獻[45]，消化離心制備細胞懸液，細胞計數，稀釋使細胞濃度為5×104個/mL待用，96孔板每孔加入150 μL細胞懸液（每孔約75×103個細胞），貼壁24 h，吸出培養液，1×PBS洗滌2遍，每孔加入150 μL的500 μmol·L-1 H2O2孵育3 h，即得H2O2氧化損傷模型。吸出損傷液，1×PBS洗滌2遍，正常組與模型組分別加入150 μL培養液，給藥組分別加入150 μL含不同濃度吉馬酮（分別為20，40，100，150，200 μmol·L-1）的培養液，置入培養箱中培養24 h，再采用MTT法在490 nm檢測A。每組設計6個復孔，實驗重復3遍。抑制率=[（A正常值-A空白組）-（A模型組-A空白組）]/（A正常值-A空白組）×100%。

22實驗分組及細胞培養上清液和細胞裂解液的制備實驗分為正常組、模型組（500 μmol·L-1H2O2）、吉馬酮高劑量組（200 μmol·L-1 ）、吉馬酮中劑量組（100 μmol·L-1 ）、吉馬酮低劑量組（50 μmol·L-1），n=6。消化離心制備細胞懸液，計數，稀釋使細胞濃度為2×105 個/mL待用，6孔板每孔加入2 mL細胞懸液（每孔約4×105個細胞），貼壁24 h，造模方法與給藥同21中所述，孵育24 h后取細胞培養液高速離心取上清，即得細胞培養上清液，分裝，-20 ℃保持，待用。

將上述處理后的細胞放置在冰上，用4～5 mL冰1×PBS洗滌2遍，加入2 mL 1×PBS用細胞刮刷把細胞從瓶底刮下，吸入離心管，重復2次，盡量在冰上進行操作。1 000 r·min-1離心3 min，去除上清液，加1×PBS（pH 74左右）將細胞稀釋至1×108個/mL，-20 ℃過夜，反復凍融3次破壞細胞膜后，于4 ℃，12 000 r·min-1離心15 min取上清液，即得細胞裂解液，分裝，-20 ℃保持，待用。

23利用Hoechst 33258熒光染色法觀察吉馬酮對H2O2誘導HUVECs細胞的凋亡情況的影響參考相關文獻[6]，消化離心制備細胞懸浮液，計數，稀釋使細胞濃度為1×105個/mL待用，24孔板每孔加入1 mL細胞懸液（每孔約1×105個細胞），貼壁24 h，造模方法同21中所述，設對照組（正常組和模型組）與給藥組，對照組加入正常培養液、給藥組不同濃度吉馬酮（200，100，50 μmol·L-1）孵育24 h。棄上清液，1×PBS洗滌2次，2 min 1次；再加每孔1 mL 4%多聚甲醛固定30 min；1×PBS洗滌3次，2 min 1次；每孔加05 mL稀釋10倍的Hoechst染色液避光染色20 min；在激發波長350 nm、發射波長460 nm的熒光顯微鏡下觀察并拍照。嚴格按照細胞凋亡熒光Hoechst 33258 檢測試劑盒說明書操作流程進行。endprint

24RTPCR檢測細胞中Bax，Bcl2，Caspase3 mRNA表達實驗分組及細胞處理同21與22，再提取RNA：每孔加入RNAiso plus 1 mL，吹打使細胞溶解，吸入15 mL無酶EP管中；再加300 μL氯仿，振蕩混勻，12 000 r·min-1 4 ℃低溫離心10 min，取上清液；加入等量異丙醇，混勻，-20 ℃靜置30 min，12 000 r·min-1 4 ℃低溫離心10 min，棄上清液；分別加入750 μL無水乙醇和250 μL DEPC水，12 000 r·min-1 4 ℃低溫離心10 min，棄上清液；晾干，約10 min，然后加入20 μL DEPC水，混勻，檢測RNA濃度。再把所有組稀釋至02 g·L-1。最后分別嚴格按照試劑盒說明逆轉錄和擴增等。

引物：Bax 上游：GACGAACTGGACAGTAACATGGA，下游：GCAAAGTAGAAAAGGGCGACA，產物長度149 bp，退火溫度61 ℃；Bcl2 上游： ACTTCGCCGAGATGTCCAG，下游：ACCCCACCGAACTCAAAGAA，產物長度136 bp，退火溫度61 ℃；Caspase3 上游：AAGGCAGAGCCATGGACCAC，下游：CTGGCAGCATCATCCACACATAC，產物長度81 bp，退火溫度64 ℃。

25數據統計RTPCR圖像采用Image J軟件分析，數據利用統計學軟件SPSS 220進行統計分析，實驗數據均以±s表示，各組間計量資料比較采用單因素方差分析（ANOVA），組間數據多重比較采用LSD法，并結合Dunnett′s T3檢驗，以P<005為有統計學意義。

3結果

31吉馬酮對H2O2損傷的HUVECs活性的影響設正常組的抑制率為0，則與正常組比較500 μmol·L-1H2O2組抑制率達50%以上，而H2O2損傷后用吉馬酮保護24 h，發現在較低濃度時影響不大，而隨著濃度的增大細胞的損傷程度減輕，見表1。形態學結果見圖1，與正常組比較，模型組細胞數目明顯減少，且細胞形態變圓；與模型組比較，給藥組的細胞明顯增加，并有一定的劑量差異。

1正常組；2模型組；3吉馬酮高劑量組（200 μmol·L-1）；4吉馬酮中劑量組（100 μmol·L-1）；5吉馬酮低劑量組（50 μmol·L-1）（圖2同）。

32吉馬酮對H2O2損傷的HUVECs細胞上清液中PGI2，TXB2，ET1，NO和TNOS含量的影響模型組與正常組比較，細胞培養上清液中PGI2和總一氧化氮合酶（TNOS）含量減少（P<005），且NO釋放量也顯著減少（P<001）；而細胞培養液中TXB2和ET1的含量顯著增加（P<001）。與模型組比較，只有吉馬酮高劑量組使PGI2含量增加（P<005），而吉馬酮中劑量和高劑量組增加不明顯沒有統計學意義；200，100 μmol·L-1吉馬酮細胞培養上清液中TNOS的含量顯著增加（P<001），NO的含量增加（P<005）；200，100，50 μmol·L-1吉馬酮都可以使TXB2含量減少（P<005），且高劑量變化明顯；200，100 μmol·L-1吉馬酮組細胞中的ET1含量顯著減少（P<001），而50 μmol·L-1組則無統計學意義，見表2。

33吉馬酮對H2O2損傷的HUVECs細胞裂解液中tPA和PAI1的影響與正常組比較，H2O2誘導后使tPA顯著減少（P<001），使PAI1顯著增加（P<001），tPA/PAI1的比值減少；與模型組比較，200，100 μmol·L-1吉馬酮組使tPA顯著增加（P<001），而50 μmol·L-1吉馬酮組幾乎沒有變化，200，100 μmol·L-1吉馬酮可抑制細胞中PAI1的生成（P<005），而低劑量組無統計學意義，見表3。

34吉馬酮對H2O2損傷的HUVECs細胞上清液中MDA，SOD，LDH和GSHPx的影響與正常組比較，H2O2損傷的HUVECs細胞釋放MDA和LDH的量明顯增加（P<005，P<001），細胞培養上清液中SOD和GSHPx的含量減少（P<005）；與模型組比較，200，100 μmol·L-1吉馬酮組顯著抑制MDA 和LDH（P<001），200 μmol·L-1吉馬酮使細胞培養液中SOD及GSHPx增加（P<005），吉馬酮中劑量和低劑量組中SOD及GSHPx的含量變化不明顯，無統計學意義，見表4。

35吉馬酮對H2O2損傷的HUVECs細胞裂解液中IL6和TNFα變化的影響與正常組比較，H2O2損傷的HUVECs細胞裂解液中IL6和TNFα的含量顯著性增加（P<001）。與模型組比較，200，100 μmol·L-1吉馬酮使H2O2損傷的HUVECs細胞裂解液中IL6的含量顯著性減少（P<001），同時細胞裂解液中TNFα的含量也明顯減少（P<001），而50 μmol·L-1吉馬酮組幾乎無變化，并無統計學意義，見表5。

36Hoechst 33258熒光染色觀察不同濃度吉馬酮對H2O2誘導HUVECs細胞的凋亡情況的影響細胞主要表現為細胞核濃縮及細胞核碎裂等典型改變。熒光顯微鏡觀察可見Hoechst 33258熒光染色，對照組細胞呈均勻微弱的熒光，500 μmol·L-1H2O2作用HUVECs細胞后，細胞的體積、形態及細胞內的結構均發生了明顯的變化，細胞膜與細胞核呈濃縮致密的強藍色熒光，顯微鏡下可見大量的細胞碎片，并且細胞的死亡數量增加，細胞的數量明顯減少。再用不同濃度吉馬酮（200，100，50 μmol·L-1）培養24 h后，與模型組比較，細胞的數量明顯增加，細胞藍色熒光強度減弱，而且凋亡細胞的數量隨著藥物濃度的升高而減少，見圖2。

37不同濃度吉馬酮對H2O2誘導HUVECs細胞中Bax，Bcl2，Caspase3 mRNA表達情況的影響與正常組比較，H2O2誘導細胞后使HUVECs細胞中Bax mRNA和Caspase3 mRNA的表達增加，而Bcl2 mRNA的表達減少；與模型組比較，HUVECs細胞中Bax mRNA和Caspase3 mRNA的表達減少，而Bcl2 mRNA的表達增加，見表6，圖3。因此可知，一定劑量的吉馬酮具有改善H2O2所致HUVECs細胞氧化損傷所致細胞凋亡的能力。endprint

4小結與討論

血管內皮細胞功能非常復雜，是血液與組織間進行物質交換的屏障，其不但可以調節血小板的功能、激活促凝因子、清除活化后凝血因子和纖溶過程，還可以通過產生血管活性物質從而調節血管張力[7]，其結構和功能損傷與許多疾病的發生和發展密切相關[8]，導致血管內皮細胞損傷的因素很多，其中氧化應激是造成血管內皮損傷的主要原因之一。H2O2是體內常見的活性氧，可促進自由基生成，如生物體內的H2O2沒有及時清除則可透過細胞膜，會造成脂質過氧化而導致細胞氧化應激損傷。氧化應激水平的提高不僅可以導致細胞損傷、甚至可致死細胞，氧化損傷還是一些神經退行性疾病、艾滋病和腦病重要的發病機制[9]。因此抑制血管內皮細胞氧化應激損傷對一些血管性病變的防治具有重要意義[10]。

血管內皮細胞的代謝與增殖情況可以提高其活性程度來反映[11]，利用MTT測定結果可以反映細胞的活性程度[12]。本實驗通過建立H2O2損傷HUVECs細胞模型，從而模擬體內氧化應激損傷，再利用吉馬酮對H2O2損傷HUVECs細胞的相關作用進行研究。MTT 法檢測發現，吉馬酮能夠增強H2O2損傷所致HUVECs細胞的細胞活力，在顯微鏡下觀察可知，與正常組比較，模型組細胞數目明顯減少，且細胞形態變圓；與模型組比較，給藥組的細胞數量明顯增加，并且在高劑量時細胞的數量最多。

MDA是氧自由基的攻擊細胞膜發生脂質過氧化反應的產物，其含量可以反映氧自由基的水平及脂質過氧化的程度，MDA還可與核酸或蛋白質發生交聯現象，而發生損傷，MDA不僅是細胞損傷的代謝產物，而且是導致細胞損傷的原因之一[13]。LDH是內皮細胞損傷后的代謝產物，它的活力強弱可以用來反映細胞的損傷程度。因此，本實驗通過測定LDH和MDA含量來反映內皮細胞損傷的情況和程度。由實驗結果可知，H2O2損傷后HUVECs細胞培養液中LDH和MDA含量增加，加入吉馬酮培養24 h后發現，HUVECs細胞培養液中LDH和MDA含量明顯減少，由此可知吉馬酮可能具有增強細胞抗氧化及抑制脂質的過氧化作用。SOD和GSHPx等屬于內源性抗氧化酶，能夠清除氧自由基，從而保護細胞，當細胞氧化應激損傷沒有特別嚴重時還可對其進行修復[14]。為研究吉馬酮的抗氧化作用，本實驗檢測了吉馬酮對H2O2損傷的HUVECs細胞SOD和GSHPx的釋放影響。試驗結果說明，吉馬酮保護培養24 h后細胞培養液中SOD和GSHPx活性明顯增強，則吉馬酮具有緩解BMECs細胞損傷的作用，從而保持其完整性。

血管內皮細胞是合成前列環素（PGI2）的主要場所，PGI2可以舒張血管平滑肌、擴張血管，同NO都具有抑制血小板聚集；血栓素（TXA2）具有血小板凝聚和血管收縮作用，其與PGI2兩者動態平衡以維持血管收縮功能及血小板聚集作用，而TXA2生物半衰期非常之短，迅速轉化為無活性的血栓素B2（TXB2），因此常檢測TXB2的含量[15]。本實驗結果表明，H2O2誘導使HUVECs 細胞培養上清液中PGI2的含量降低，而TXB2的生成量顯著增加，TNOS的含量減少，NO的含量也相隨減少；吉馬酮在較大劑量時可致損傷后HUVECs細胞PGI2的分泌量增加，TXB2的生成減少，細胞培養上清液中TNOS和NO的含量也增加。從而維持血管收縮功能及血小板聚集作用。ET1是如今以來作用最強的血管收縮物。而PAI1和tPA主要由VEC合成和分泌，分別纖溶酶原激活抑制物和纖溶酶原的激活物。本實驗結果顯示，吉馬酮可以明顯減少H2O2誘導的HUVECs細胞培養上清液中ET1含量增加；H2O2誘導的HUVECs細胞裂解液中tPA含量顯著性降低，PAI1含量顯著增加，可見H2O2可導致HUVECs細胞纖溶功能出現異常，加入吉馬酮可明顯抑制細胞產生PAI1，促進tPA的生成，改善tPA/PAI1，從而保護HUVECs細胞和使其纖溶功能恢復正常。

臨床上診斷炎癥反應的常用指標是炎癥因子的含量：腫瘤壞死因子α（TNFα） 是體內非常重要的一種炎癥細胞因子，在炎癥過程中發揮著重要的作用，其含量水平可以反映H2O2損傷HUVECs細胞的炎癥損傷程度；IL6為另外一種主要的炎癥因子，其自身不僅能夠介導炎癥的發生，還能夠促進TNFα的生成[16]。本實驗結果顯示，H2O2損傷后HUVECs細胞中IL6和TNFα的含量顯著增加；加入吉馬酮保護24 h后，HUVECs細胞中IL6和TNFα的生成量的以緩解。以上結果可以看出，吉馬酮可以抑制H2O2損傷后HUVECs細胞中IL6和TNFα的生成，從而緩解H2O2損傷導致的HUVECs細胞的炎癥。

細胞凋亡是一種有多種基因調控的細胞程序性死亡的過程，主要表現為細胞核濃縮及細胞核碎裂等典型改變。其中Bcl2基因家族發揮重要作用，基因Bcl2和Bax都屬于Bcl2基因家族，Bcl2基因抑制細胞凋亡、Bax基因促細胞凋亡，二者相互作用、共同協調細胞凋亡過程，Bcl2不但可以通過控制細胞信號的傳導來保護細胞生存，其還可以和Bax蛋白結合，從而抑制細胞凋亡。因此Bcl2/Bax越小，細胞凋亡情況越嚴重[17]。細胞凋亡途徑有細胞表面死亡受體途徑和線粒體引發途徑2種，2種途徑都能激活處于細胞凋亡途徑下游的Caspase3及其他下游的Caspase效應子，激活的Caspase3能裂解大量底物使細胞凋亡[18]。本實驗通過Hoechst 33258熒光染色觀察后可知，H2O2作用HUVECs細胞后，細胞的體積、形態及細胞內的結構均發生了明顯的變化，細胞膜與細胞核呈濃縮致密的強藍色熒光，顯微鏡下可見大量的細胞核碎片，并且細胞的死亡數量增加，細胞的數量明顯減少。再用吉馬酮培養24 h后，細胞的數量明顯增加，細胞藍色熒光強度減弱，細胞碎片也減少，而且凋亡細胞的數量隨著藥物濃度的升高而減少。再利用RTPCR法檢測可知，H2O2誘導HUVECs細胞后使HUVECs細胞中Bax mRNA和Caspase3 mRNA的表達增加，而Bcl2 mRNA的表達減少；吉馬酮保護培養24 h后HUVECs細胞中各相關基因的生成趨于正常。endprint

綜上所述，吉馬酮對H2O2誘導損傷的HUVECs細胞的保護作用及機制可能與以下作用相關：①吉馬酮可以改善細胞的形態和生長、增殖率；②吉馬酮可以緩解H2O2誘導損傷HUVECs細胞后LDH和MDA含量釋放，且可增加SOD和GSHPX活性，而提高抗氧化能力，清除自由基對HUVECs細胞的損害；③增加血管活性物質PGI2和NO等生成，減少血管收縮物TXB2和ET1的生成；④抑制炎癥因子的釋放；⑤抑制細胞凋亡，維持細胞的結構和功能。

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[責任編輯張寧寧]endprint