口腔扁平苔蘚患者外周血中Th1和Th17升高在發病機制中的意義

蔣永元 朱璇

上海復旦大學附屬中山醫院青浦分院口腔科，上海 201700

口腔扁平苔蘚（OLP）是慢性炎性自身免疫性疾病，常累及頰部、舌及牙齦并伴發充血、糜爛、潰瘍，若病損經久不愈，局部癌變風險可大幅上升[1]。目前臨床對于OLP的發病機制尚無明確結論，多數學者認為，OLP是一種T細胞介導的自身免疫性疾病，其中輔助性T細胞亞群（Th1/Th2）漂移學說備受關注[2]。研究發現，OLP患者病損組織中可見Th17細胞大量浸潤，表明Th17可能參與了OLP的炎癥免疫反應進展[3]。為驗證這一假設，此次研究比較71例OLP患者及30名健康體檢者上述指標水平，探討Th1、Th17在OLP發病機制中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

入選標準：參照第四版《口腔粘膜病學》[4]并經病理組織學檢查確診OLP，簽署書面同意協議。排除標準：合并其它口腔粘膜或系統性疾??；合并嚴重感染性疾??；合并其他部位癌前病損或腫瘤；入組前1個月內有抗生素或免疫制劑使用史。2015年2月至2016年12月71例患者符合條件，納入患者組；選取同期性別、年齡與患者相近的30名健康體檢者作為NC組。

1.2 檢測方法

抽取兩組受試者入組次日清晨空腹靜脈血5 mL，使用FACSC CantoTMⅡ Flow Cytometer流式細胞儀（美國BD公司）以及配套Th1、Th17試劑盒，運用雙重免疫熒光染色技術檢測[5]。借助配套CBA Instrument Setup template及Cytometer Setup Beads，使用Cellquest軟件建立獲取模式，讀取細胞因子檢測數據。其中，Th1型細胞因子包括腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、干擾素-γ（IFN-γ）以及白細胞介素-2（IL-2）；Th17型細胞因子包括IL-17及IL-23。

1.3 分析方法

比較患者組、NC組外周血Th1型細胞因子及Th17型細胞因子水平，按照OLP患者臨床類型[6]分非糜爛型（口腔粘膜可見白色條紋但無充血糜爛）；輕度糜爛型（口腔粘膜有白色條紋并伴單灶或多灶小面積糜爛，總面積≤1 cm2）；重度糜爛型（口腔粘膜有白色條紋并伴單灶或多灶小面積糜爛，總面積＞1 cm2），比較各組患者外周血中Th1、Th17水平差異。臨床體征及臨床癥狀再次分組，運用Pearson相關性分析，明確Th1、Th17與患者臨床特征的關聯。臨床體征評分方法按照文獻[7]、臨床癥狀評分標準按照文獻[8]。

1.4 統計學分析

對本臨床研究的所有數據采用SPSS 18.0進行分析，Th1和Th17型細胞因子水平組間比較采用t檢驗，Pearson法，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 患者組與NC組外周血Th1和Th17檢測結果

患者組外周血Th1型細胞因子（TNF-α、IFN-γ、IL2）及Th17型細胞因子（IL-17、IL-23）水平均高于NC組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 患者組與NC組外周血Th1和Th17檢測結果比較（pg/mL，x±s）

2.2 不同臨床類型患者外周血Th1和Th17檢測結果

隨著患者臨床類型由非糜爛型向輕度糜爛、重度糜爛進展，其外周血Th1型細胞因子、Th17型細胞因子均逐漸升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同臨床類型OLP患者外周血Th1和Th17檢測結果比較（pg/mL，x±s）

2.3 相關性分析

Pearson相關性分析示，OLP患者外周血Th1型細胞因子、Th17型細胞因子與其臨床類型、臨床體征評分及臨床癥狀評分呈弱正相關（P＜0.05）。見表3。

表3 OLP患者外周血Th1和Th17與臨床特征的相關性分析（r值）

3 討論

多數研究認為，免疫因素在OLP的發生發展中扮演了重要角色，其中，T細胞介導的細胞免疫反應被認為與OLP的發生密切相關，且已有大量研究證實Th1/Th2失衡所致體液免疫及細胞免疫紊亂與OLP的相關性，但目前該病的確切發病機制尚無全面闡釋[9-10]。

既往研究顯示，OLP病損組織固有層內可見大量散在分布的Th1和Th17細胞，且患者外周血Th1和Th17細胞比例均顯著升高并與OLP臨床表型具有密切關聯[11]?；诩韧芯?，此次分析OLP患者外周血Th1、Th17水平變化，結果顯示，與健康者相比，OLP患者外周血Th1、Th17型細胞因子水平均大幅升高，同時，隨著患者病損組織糜爛程度的加劇，其Th1、Th17型細胞因子水平逐漸升高，且Pearson相關性分析亦印證了Th1、Th17型細胞因子與OLP臨床類型、臨床體征評分、臨床癥狀評分的相關性。

Th1型細胞因子中，TNF-α是一種促炎性細胞因子，主要由活化的單核-巨噬細胞分泌，不僅能夠刺激單核細胞分泌IL-1、IL-6及趨化因子，還可促使Th細胞向Th1細胞分化[12]。有學者發現，OLP病損處T細胞分泌的趨化因子可激發肥大細胞脫顆粒作用，促使TNF-α大量釋放，而TNF-α可進一步上調趨化因子分泌，形成瀑布樣效應，加劇OLP慢性發展過程[13]。一項體外研究結果顯示，OLP局部病損取約有1%的基底膜細胞內IFN-γ mRNA呈陽性表達[14]，其引發局部病損的機制可能與增強粘附分子及主要組織相容性復合體-Ⅱ表達有關，這一連鎖反應的形成可能是促使局部炎癥反應增強的重要原因。作為一種重要調節因子，IL-2可參與損傷、炎癥、宿主免疫反應等多個過程，扮演著中性粒細胞活化劑、T細胞趨化劑等多種角色，OLP患者外周血IL-2顯著升高的原因可能與TNF-α-TNFR-1信號通路介導的免疫炎癥反應有關，此外，亦有研究發現，IL-2、TNF-α在病損部位的大量聚集，也可協同促進Th1細胞介導的炎癥反應進展[15]。

Th17細胞是一種與Th1、Th2細胞不同分化途徑的獨立輔助性T細胞亞群，其產生的特征性促炎癥細胞因子IL-17，被認為是自身免疫性疾病必須的效應性、輔助性T細胞亞群[16]。在自身免疫性疾病中，IL-17主要誘導早期分化與晚期成活增殖兩個階段，且可刺激角化細胞、成纖維細胞、內皮細胞、巨噬細胞等，誘導TNF-α、IL-2大量分泌，促進局部炎癥反應的增強[17]。此次研究OLP患者外周血內亦檢出大量IL-17，說明IL-17也在OLP的免疫病理過程中發揮了重要作用。OLP患者外周血IL-23水平大幅上升，意味著Th17細胞穩定性破壞、Th17細胞大量增殖以及區域聚集，也是加劇局部組織損傷、激活局部微環境炎癥級聯反應的重要因子[18]。

綜上所述，OLP患者外周血中Th1和Th17均顯著升高，二者均可誘導炎癥反應增強、加劇局部組織損傷，共同促進OLP病理生理改變的發生與發展。重視外周血Th1和Th17檢測以評估病情，并尋求控制Th1和Th17的靶向治療藥物，有望為OLP的診療提供新的思路。

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